提取细胞全蛋白操作方法.docx
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提取
细胞
蛋白
操作方法
细胞全蛋白提取步骤
①吸取培养基，预冷PBS清洗细胞三次，细胞刮刮脱细胞，收集至离心管，1000rpm离心5分钟。洗涤后的细胞转移至洁净EP管，
②冰上操作，配制细胞裂解液，1ml Lysis,Buffer中加入10 μl磷酸酶抑制剂、1 μl蛋白酶抑制剂、5μl 100mM的PMSF。混匀后冰上保存数分钟待用。
③在洗涤好的细胞中按照每107个细胞加入1ml细胞裂解液的比例，加入细胞裂解液。200μl移液器反复吹打，至蛋白析出。
④4℃摇床，温和振摇15分钟。
⑤14000rpm，4℃离心15分钟，上清即为细胞全蛋白提取物。
⑥BCA法测蛋白浓度。蛋白分装后保存于-70℃冰箱，避免反复冻融。
提取细胞全蛋白整个过程中所有使用的物品及试剂均需预冷，防止蛋白降解。
