细胞培养基选择.doc

细胞培养基的分类 培养细胞的完全培养基由基础培养基（如MEM）和添加剂（如血清或无血清培养用的某些确定的激素及生长因子）组成，培养基的配方一直在改进，其中包括抗生素和抗有丝分裂剂等等。 一、基础培养基 绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。最广泛应用的培养基是Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂（例如核苷酸）。MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。Dulbecco`s改良培养基——DMEM，现应用于快速生长的细胞，同MEM含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。 在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及在许多细胞培养中它常用作碳源。对于神经元的培养常常在基础培养基中增加葡萄糖的含量到0.6%或者加入丙酮酸（若培养基中这两种物质缺乏时）。MEM与F12均要用5%的CO2来平衡，DMEM含更高浓度的NaCO3，要用10%的CO2来平衡，当然也可以在较低CO2浓度下使用。这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的，但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。 原则上，HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。实际操作中并非如此简单。显然，溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。Leiboviz`s L15培养基可用来在大气环境中令神经细胞生长，该培养基采用了与众不同的BSS作基础，它含有高浓度的氨基酸来提高缓冲能力，培养基中使用半乳糖作碳源，以阻止培养基中乳酸形成，少量溶解的CO2由丙酮酸代谢产生。这一培养基的优点是明显的，特别是在保持较高CO2有困难时，例如在长时间的显微操作及生理学研究中。L15培养基已用来成功的培养了外周神经元，但尚未在CNS神经元的发育研究中全面检测过。 (日水培养基 NISSUI   MEM 细胞培养 原代传递用组织(细胞)培养产品 α-MEM ①       05921-102g (10.2g for 1L) Nissui 含核（糖核）苷、脱氧核（糖核）苷，不含碳酸氢钠。该培养基比Eagle’s MEM多8种氨基酸、4种维生素、丙酮酸、4种核苷、4种脱氧核苷。 RT α-MEM ② 05922-101g (10.1g for 1L) Nissui 不含核（糖核）苷、脱氧核（糖核）苷、碳酸氢钠。 RT Dulbecco’s Modified Eagle Medium ① 0688-100g ; 0316-500g (10.0g for 1L) Nissui 不含碳酸氢钠。该培养基比Eagle’s MEM氨基酸浓度多2倍、维生素浓度多4倍，并含有甘氨酸、L-丝氨酸、丙酮酸盐和微量铁离子。该培养基广泛用于病毒研究、原生细胞、单细胞培养。 RT Dulbecco’s Modified Eagle Medium ② 05919-100g (9.5g for 1L) Nissui 不含L-谷氨酸、碳酸氢钠。能高压灭菌（121℃，15分钟）。该培养基比Eagle’s MEM氨基酸浓度多2倍、维生素浓度多4倍，并含有甘氨酸、L-丝氨酸、丙酮酸盐和微量铁离子。该培养基广泛用于病毒研究、原生细胞、单细胞培养。 RT Eagle’s MEM ①    13788987962   021-50272977-6221   trade@ 05900-100g ; 00680-500g (9.4g for 1L) Nissui 含有卡那霉素，不含L-谷氨酸、碳酸氢钠。能高压灭菌（121℃，15分钟）。特别有助于HeLa、L和其他细胞系的生长。 RT Eagle’s MEM ② 05901-100g (9.4g for 1L) Nissui 含有卡那霉素，不含酚红、L-谷氨酸、碳酸氢钠。能高压灭菌（121℃，15分钟）。 RT Eagle’s MEM ③ 05902-100g (9.4g for 1L) Nissui 不含卡那霉素、酚红、L-谷氨酸、碳酸氢钠。能高压灭菌（121℃，15分钟）。 RT Eagle’s MEM ④ 05903-100g (10.3g for 1L) Nissui 含有卡那霉素，不含L-谷氨酸、碳酸氢钠。用于悬浮培养。能高压灭菌（121℃，15分钟）。 RT Eagle’s MEM Amino Acids and Vitamins Medium 05904-20g (0.88g for 1L) Nissui 该培养基用作2-5倍浓缩液，加热至37℃并溶解，可用于少数细胞培养、悬浮培养、在半固态琼脂上形成细胞群落或斑块。 RT ES Medium 05971-100g (9.7g for 1L) Nissui 含有卡那霉素，不含L-谷氨酸、碳酸氢钠。能高压灭菌（121℃，15分钟）。该培养基比Eagle’s MEM多添加了7种氨基酸、丙酮酸钠和维生素B12。 RT Ham’s F12 Medium 05910-100g (10.6g for 1L) Nissui 不含碳酸氢钠。该培养基用于克隆哺乳动物细胞的增殖，特别用于中国田鼠细胞。 RT Medium 199 0683-100g ; 0681-500g (9.8g for 1L) Nissui 不含碳酸氢钠。该培养基不能增殖细胞，但能用于病毒学研究中的细胞培养，并且可用于生产脊髓灰质炎疫苗。 RT RPMI 1640 Medium ① 0684-100g ; 0682-500g (10.4g for 1L) Nissui 不含碳酸氢钠。用于悬浮细胞培养。 RT RPMI 1640 Medium ② 0689-100g ; 0687-500g (10.2g for 1L) Nissui 不含L-谷氨酸、碳酸氢钠。能高压灭菌（121℃，15分钟）。该培养基能克服一般RPMI 1640 培养基只能膜过滤除菌而难以除去诸如支原体的缺点，用该培养基培养小鼠和人的白血病细胞、各种细胞系和KATO-III细胞株能显著增强它们的活性。 RT SFM-101 05963-基础培养基 1×12.5g / 补充物A 1×10ml(冻干) / 补充物B 1×5ml (12.5g for 1L) Nissui SFM-101是一种无血培养基，对细胞培养和帮助小鼠杂交瘤细胞生产抗体作用显著。由于是无血清配方，减少了牛血清各批次间成分不同而对试验的干扰。低蛋白含量，使得后期对细胞产物如单克隆抗体和生物活性物质的收集和纯化更加便利。 RT UC Medium 202 05923-103g (10.3g for 1L) Nissui 不含碳酸氢钠。UC Medium 202是培养CHO细胞的低浓度血清培养基，用于细胞增殖和生产细胞产物。该培养基加入1％胎牛血清培养CHO细胞的效果等同于α-MEM加入5％胎牛血清。 RT Eagle’s MEM Liquid 06650-500ml Nissui 含卡那霉素、L-谷氨酸、碳酸氢钠。特别适用于HeLa、L或其他细胞系的培养。 RT RPMI 1640 Liquid 06652-500ml Nissui 含L-谷氨酸、碳酸氢钠。用于悬浮培养。 RT SFM-101 Liquid 06654-500ml Nissui 即用型培养基，无须添加其他物质。SFM-101是一种无血培养基，对细胞培养和帮助小鼠杂交瘤细胞生产抗体作用显著。由于是无血清配方，减少了牛血清各批次间成分不同而对试验的干扰。低蛋白含量，使得后期对细胞产物如单克隆抗体和生物活性物质的收集和纯化更加便利。 RT Dulbecco’s PBS㈠ 05913-100g (9.6g for 1L) Nissui 能高压灭菌（121℃，15分钟）或膜过滤灭菌。 RT Earle’s Solution 05907-100g (8.6g for 1L) Nissui 不含碳酸氢钠。 RT Hanks’ Solution ① 05905-100g (9.8g for 1L) Nissui 不含碳酸氢钠。 RT Hanks’ Solution ② 05906-100g Nissui 不含酚红、碳酸氢钠。用于免疫学实验、透析或其他。 RT Dulbecco’s PBS Metal Salt Solution 05914-10ml (1.0ml for 1L) Nissui RT Glutamine 05908-0.3g (一个包装中含0.3g灭菌、冻干的谷氨酰胺) Nissui 溶液用于高压灭菌的无L-谷氨酸培养基的补充物，如Eagle’s MEM。 RT ) 二、血清 细胞在单纯的基础培养基中不能存活，在特殊类型的细胞培养中必须提供某些痕量营养物质及生长因子才能使细胞得以生长并维持生长状态。基础培养基常常要添加血清，血清终浓度多为5~20%。特殊用途的血清来源须用经验确定，广泛应用的血清种类有马血清与胎牛血清。胎牛血清中富含有丝分裂因子，常选其作增殖细胞用的血清，也用于细胞系和原代培养。而马血清常常用来作有丝分裂后的神经元培养。然而，很多人也将胎牛血清用于神经元培养，也有人用马血清来培养胶质细胞。用大鼠进行神经元培养的某些研究者喜欢使用同型血清；人类的胎盘血清，亦曾用于神经组织的器官类型的培养，也用在一些特殊培养种类中。 血清的不同批号含有不同的成分，所以许多人发现，应该在使用前对血清进行测试。大多数试剂商提供样品，所满意的批号即可选用，这样可以一次得到足够一年用量的血清，血清在使用前通常在56℃加热30分钟，这一过程称为灭活。 三、无血清培养基 1979年神经细胞培养出现了一个重要进展，用化学添加剂即可维持神经细胞存活与生长而不需要在培养基中添加血清。其工作基础是用合适的激素、营养物和促贴壁的物质的组合置换培养基中的成分，最后找到了适合大多数细胞培养的试剂配方，该配方称为N2，专门用于神经细胞培养，最早是用在B104大鼠神经母细胞瘤细胞系的培养。它的基础培养基是1：1的DMEM与H12的混合液，添加了胰岛素、转铁蛋白、黄体酮、腐胺和硒。胰岛素和胰岛素样生长因子对于大多数类型细胞的存活和生长有重要作用，硒是谷胱甘肽产生的合作因子，可能有助于过氧化物和超氧化物的水解，有报道说还能防止细胞的光照损伤。随后的其他配方如N1N3则含有较低浓度的转铁蛋白。 未料到的是上述配方构成的培养基可以支持神经母细胞瘤细胞系快速增殖，随后又发展了能支持原代培养的各种神经元生长的培养基，这种培养基在许多实验室里已取代了有血清培养。在某些培养方案中，细胞直接进入无血清培养，这样的培养基可以消除来自血清的不均一性。更为重要的是，它们可用来检测生长因子以及其他促进神经元存活或生长的因子，或者用来检测那些可保护神经元免遭环境毒物损伤的制剂。专用于神经元的培养基在某些培养环境中还可以减低非神经元细胞的增殖，故可使神经元