细胞培养对无血清培养基的适应.doc

细胞培养对无血清培养基的适应 有两种方法可以使细胞适应无血清培养基(SFM): 1．直接适应法式—将细胞直接从添加血清的培养基转换到无血 清培养基中。 2．连续适应或循序隔绝法—分几步将细胞从添加血清的培养基 转换到无血清培养基中。与直接适应法相比较，连续适应法对于 细胞更温和些。 为了使细胞适应无血清培养基，关键是细胞培养应满足以下条 件： 1．处于对数生长中期 2．存活率大于90% 3．在适应期间，以较高的初始细胞接种量进行接种 　下面列出了常规适应步骤。初始细胞接种量、细胞产量和培养 　周期是连续优化的良好开端。 直接适应 有些类型的细胞可以直接从含有血清培养基适应无血清培养基。 对于直接适应，细胞接种量应在2.5 x 105 -3.5 x 105细胞/ml范围 内，当细胞密度达到1 x 106-3 x 106细胞/ml时，传代培养细胞。 培养4至7天后，当细胞密度达到2 x 106 -4 x 106细胞/ml时，细 胞已完全适应了无血清培养基。当细胞密度达到1x 106 -3 x 106 细胞/ml且存活率为90%时，应当每隔3到5天再次将适应了无血 清培养基的贮存细胞在无血清培养基中进行传代培养。 连续适应 我们推荐采用连续适应法使细胞适应无血清培养基(SFM),典型的 转换步骤如下: 第一代 75%含血清培养基和 25%无血清培养基 第二代 50%含血清培养基和 50%无血清培养基 第三代 25%含血清培养基和 75%无血清培养基 第四代 100%无血清培养基 由于从75%无血清培养基到100%无血清培养基的变化对细胞的 压力过大，因此可能需要将细胞在含有10%含血清培养基与90% 无血清培养基的混合培养基中传代培养2-3次。可以认为大多数 细胞系在100%无血清培养基中传代培养3次后即可完全适应。在 将细胞转换到100%无血清培养基中之前，偶尔也会遇到问题， 无法通过某一特定步骤。如果出现这种情况，可在上一混合比例 的含血清培养基中将细胞传代培养2-3次。 无血清培养基的使用注意事项 总体而言,无血清基培养中的细胞对于极端pH值、温度、渗透 度、机械压力和酶处理更为敏感。 抗生素 在无血清培养基中最好不要使用抗生素。如需使用，建议其用量 比使用含血清培养基时减少十分之一到五分之一。这是因为血清 蛋白倾向于结合一定量的抗生素；如果没有这些血清蛋白，原来 使用的抗生素水平将对某些细胞产生毒性。 更高的细胞密度 在适应前，细胞必须处于对数生长中期，而且存活率大于90%。 可能必须采用连续适应的方法。在无血清适应期间，每次传代时 接种密度要高于正常传代，这有助于适应过程。由于部分细胞无 法在新的培养环境中存活，因此接入更多的细胞可以提高以后传 代存活的细胞数量。 细胞聚集 在适应无血清培养基时，细胞经常会聚成团。建议您在进行细胞 传代时将细胞团轻轻弄碎，使之散开。 细胞形态 在适应无血清培养基的过程中以及适应无血清培养基以后，一般 不会发生细微的细胞形态变化。只要细胞倍增时间和存活率保持 良好，细微的形态变化是无关紧要的。 条件培养基适应 适应无血清培养的另一种方法是使用“条件培养基”。这种培养 基是指细胞已经在其中生长了完整一代。如果采用这种方法，可 以按照以下步骤进行适应 第一代 100%含血清培养基 第二代 50%来自第一代的培养基和 50%无血清培养基 第三代 50%来自第二代的培养基和 50%无血清培养基 第四代 50%来自第三代的培养基和 50%无血清培养基 第五代 100%无血清培养基 无论采用哪种适应方法，都强烈建议您始终采取下列预防措施： ?适应前用含血清培养基冻存一份细胞。 ?每进行下一步适应之前，都要在上一步的条件中再培养一份 细 胞作为备份，以免进行下一步适应时细胞无法存活。