细胞样品收集注意事项.doc

细胞样品收集方法 一、 蛋白 以T75培养瓶为例 1. 把培养上清彻底转移至50或15ml离心管中，用PBS洗涤1-2次（PBS需彻底吸干，洗液时把板倾斜），每次洗涤时，均需把PBS转移到同一个50或15ml离心管，每培养瓶细胞准备一个离心管，切勿混淆； 2. 每培养瓶加入300ul RIPA裂解液（加入裂解液时，一定用放平，是细胞与裂解液充分接触）, 把上述离心管离心（水平转角离心机，1000RPM, 8min）,彻底移除上清，加入300ul RIPA裂解液，吹打12下后，把裂解液转移至同一培养瓶中，则培养瓶中合并有200ul，盖好盖子，用封口膜封口后置于-80℃保存；注意做好标记！ （如果用PBS洗涤后，细胞未飘起，则把600ul RIPA裂解液直接加入培养瓶） 备注：给你提供的RIPA裂解液用EP管装，每管990ul，同时提供PMSF,使用时每管加入10ul PMSF,混匀再使用。操作要快，做好一瓶，放好一瓶！强烈建议一瓶一瓶的做。 表一 培养器皿 RIPA裂解液用量 备注 6孔板 150-300ul 根据细胞的密度适当调整用量，Trizol的最少用量为1ml 35mm培养皿 150-300ul 根据细胞的密度适当调整用量，Trizol的最少用量为1ml 60mm培养皿 300-600ul 根据细胞的密度适当调整用量，Trizol的最少用量为1ml 100mm培养皿 600-1200ul 根据细胞的密度适当调整用量，Trizol的最少用量为1ml T25培养瓶 300-600ul 根据细胞的密度适当调整用量，Trizol的最少用量为1ml T75培养瓶 600-1000ul 根据细胞的密度适当调整用量，Trizol的最少用量为1ml