抗-CD3-、-CD28-单抗对人-T-淋巴细胞共刺激作用的影响因素.pdf

4 己 抗 C D 3、C D 2 8单 抗对 人 T淋 巴细 胞 共刺 激 作用 的影 响 因素 王顺 友孙 雨x 马 宝骊 j：二 学 上 海 市 免 疫 学 研 究 所 上 海 2 0 0 0 2 5 良；t 摘要以抗 C D 3 和抗 c 璜8作为T细胞激话的第一和第二信号 观察二者不同浓度，不同作用j 吼中和不同作用时同对人了 淋 巴细胞增殖反应的影响 结果 显示单一的抗 C D 3 和抗 c 咄不能桶激 丁 细胞增殖，只有同时或在一定时间内接受二者的 共同刺激才能促使 T细胞增殖。单独接受抗 C D 3 2 a h 或抗 c D 2 8l 6 h 后，T 细胞对相应的另一信号刺激呈低反应性，这一现 象可能与 T细胞耐受及 自身免疫病 的发生有关。关键词C D 3：c D 2 8；T淋巴细胞i增殖；共刺激 一 一 _一-_-_ 一 B r e B c h e r 和 c I l o n 于 7 0年代初首 次提 出免疫识 别的双信号理论。耐 T 细胞而言，传导第 一信号 的 受体分子 是 T细胞 表面 特异性 抗 原受体(1 t)，它由 删(或 忙)，C D 3复合物(7 a-E)和 二 聚 体(或 异二聚体)共同构成。1 R作为接受第 一信号的受体，其信息由 C D 3复合体分子向细胞内 传递，因此，抗 C D 3的单克隆抗体可 以模拟第一信 号，刺激 T细胞产生一系列的生化反应(如蛋 白质 的磷酸化)，c 浓度升高，磷脂分解等 1 J。但是，免疫活性 细胞在接受第一信号之后一定时间内如果 不能接 受第 二 信号 的刺 激，则 将 产生 低 反 应性(p 0 s i b i )或灭能(a n e r g y)。因此，第 一信 号决定了免疫反应的特异性，而第二信号决定了免 疫反应的量及其时空效应 J。到 目前为止，对第二 信号(共刺 激信号)的认识还不完整。在已经发现 的第二信号 分 子中C D S 0(B 7 1)是最 重 要的 一 类。它表达于抗原提呈 细胞(A P C)表面，通过 与 T细胞表面受体 C D 2 8相互作用 激活接受第一信 号刺激 的 T细胞，使其增殖和分泌 I L 2 L 3 J。C D 2 8 分 子接受 刺激 后，也 能传递一 种不依 赖 于 c 的，并对免疫抑翩剂环胞霉素(C s A)和 F K 5 0 6有抗性 的信号l。一般认为，C I Y 2 8在传递这 一信 息之前 需要第一信号激活的 l：r l K酶对其细胞浆内 m删 区域的酩氨酸磷酸化 磷酸化 的 C D 2 8能檄 活 P I 3 激酶，后者进一步活 化 P 礤 噬，促进转 录因子 的活 化L】J。抗 C D 2 8单抗也可模拟第二信号 C D S 0。异常 表达 的 c D 8 0分子与多种 自身免疫性疾病有关j J。以 C D S 0分 子或 C T L A 4 I g分 子代替(3 1)8 0，与 C 1 Y 2 8 结合 可阻 断 T细胞 的激 活 而 治疗 移 植 排 斥反 应。为此，我们观察了第一信号和共刺激信号对 T细胞增 殖 的影 响。1 材料和 方法 1 1 材 料C D 2 8单 抗腹 水(G 1 3 mg )由 美 国 B ri s t o l-My e r s s b b药物研究所 L i n s l e y教授馈赠；C I Y 3单抗 腹 水(O 7 5,W m 1)由 分 撼 C I)3单 抗 杂 交 瘤(购 自美国 A T C C公 司)制备。二种单 抗经 纯化 后用于下述实验。1 2外周 血 T细胞 分 离无 菌抽 取 正 常 人外 周 血，肝索抗凝。用 淋巴细胞分离 液离心分离 单个核 细 胞，经尼龙毛柱吸附后，得到非粘附细胞为纯化 T 细胞，经抗 C D 3、抗 C I Y 2 8、锥 兰染色，计算纯度、C D 2 8 阳性率及活力分别为 8 2、7 9 和 9 9。培 养于含 1 0 人 A B型血清的 t L r 1 6 4 0培养液。1 3 抗 c D 3 和抗 C D 2 8抗体的浓度对 T细胞增殖的 影响在 9 6孔板 内，每孔 加 人纯 化的 T细胞(2 i 0 I m 1)1 ，不同稀 释度的抗 C D 3 或抗 C D?-8抗体 1 o D ，3 7，5 e 条件下继续 培养 9 6 h，在实验 结 束前 1 6 h加入 1 8 51 0 3 B q H-T ri P ，用 多头细胞 收集 仪收集 细胞，液体闪烁计数仪测定放射性计数。1 4 共刺激时相9 6孔板 内每孔加入纯化 T细胞 2 1 0 5 孑 L，抗 C D 3单抗 1 (终 浓度为 1 2 5 )。3 7，5 c 条 件下 于不 同 时间(0、i、2、4、8、1 6、2 4和 3 2 1)洗 去 C D 3单 抗，加 人 C D 2 8 单抗(终 浓度为 5 V m 1)，继续 培养 至 9 6 h。另一组加 抗 C I Y 2 8单 抗 1 脚 d(终 浓 度为 5 )，维普资讯 http:/ 维普资讯 http:/ 9 9 9年第 1 9卷第 4 后细胞的反应性逐渐下降。对于先接受抗 C D 3作用 的 T细胞，如果 2 43 6 h 之 内不能接受第二信号的 刺激 则对以后的刺激产生呈明显的低反应性(图 1)先 接受 抗 C D 2 8 处 理 的 T细胞 的增殖 反应 在 1 6 h 已明显降低 2 43 6 h则基本不再对第一 或第 二信 号的刺激产生反应(图 3)。L i n s l e y等 曾报道 C D 2 8 与其配基的结合会 引起 C D 2 8表 达的降低。P H A或 P MA激括的 T细胞在接受 C D S 0 C HO细胞刺激后 4 h C D 2 8 r r 删 即显著降低 2 4 h 才恢复到接近正常 的水平。细胞 表面的 C I T 2 8分子在 1 22 4 h显著减 少，直到 4 8 h恢 复到正 常水平_】0 1。我们观察 到的 现象可能与 T细胞 C I 7 2 8 表 达的降低有关。一般认为，T细胞单独接受第二信号不产生反 应，但我们的结果提示 C D 2 8单 独接受抗体结合 作用 后 会 明显影 响 随后对 抗 C D 3 抗 C D 2 8 对 T细 胞 的激活作用。这一现象的生理学功能尚不清楚。在 体内，C D 2 8的配基 主要存在于活化的 A P C细胞表 面，机体在受到外源或内源性的刺激(如细菌或病 毒的感染，局部炎症 等)时可弓 f 起 A P E细胞 大量 表 达 C D 8 0，此时 循环 的无 关 T细胞 可能 与 C D8 0相 结合，如果它们进 一步不与 T C R特 异的抗原作用 将会引起耐受。此时如果 T细胞与其相应的特异性 抗 原相 互作 用，则 可不 再依 赖 于辅助 细胞 而直 接 被 激活，形成一种多克隆激活状态。任何一类免疫反 应的发生及强度都是 由其所接受信号的类型和量所 决定的，这一质和量决定免疫反应对机 体的作用。机体也有可能通过对第一信号和第二信号发生的时 间来调控多种淋 巴细胞 的反应性。参 考文 献 l R u d d c E J a n e n O 嘶Y T ws t e p 1 R cD 3-CIM a n d CD 2 8 s i g n a l i n g i n T c e l l s：S H2 S H3 d o n mi ，p r o t e i t c ro e,i n e a n d J p l d k ina a e J k一 1 9 94 2 2 5：2 3 4 2 J u n e CH，B1 u e o fl e J A，Na d l e L M，d a 1 。I he盯a n d C嘲 T。c f a mi l iI n ma u n d T o d a y 1 ；1 5：3 21 3 Gi n u i CD，F r e e ma n GJ I Gfib b e n J G，e l a l B c e i l s u r f a c e a n ti g e n B 7 p m i d e s a c o s t imula t o r y 目 t h a t i n d u 1 c e l l s t o T a【e a n d s e c r ele l n t e r l e u k i n 2 P r o e Na il A c 甜S e i U弘，1 9 91；8 8：6 5 4 Y，Ph i U i p a CA 0“n 血 II J M，d CD2 8 日 t r a r d u e fi o n：T 0 n e p h o s p h y l ati ml a n d r e c e p t o ri a fi o n 0 f p h c e ph o l n o s i fid 3 I d n a s e c o r r e la t e 钔t h C 一 i l：d e to e n d e n t 耐n a 蜘a c fiv i t y Eu r J I mmun o 1 1 9 9 4；2 4：2 73 2 5 e fi l g h e n J，9 R B o ，d a l f u n c ti c s d B7 a n d o n I Ie u ma t o i d s 3 mo i a l T c dl sJ 1 r c a n u n d 1 9 9 4；1 5 3：l 3 7 8 6 g e r r i n P J，s c 0【D，Q L l i 出y L，吐0 1 R o l e H 7：C D 2 8 C I L A 4 i n th e i n d u c tio n c h r o n i c r e l a p s i n g e x t r m me n a l l e W c me e#u d o my e l fi s J l r mm o 1 1 9 9 5：1 5 4：1 4 8 7 L e h o w D J，Z e ng Y，T h s t l e t x,t r a J t e J R，e l bg-te n n r v i v a l o f x e n o g m e i c pa r ma ti c i s o e t 8 i n d u c e d b y C 4 S c l e n ，1 9 9 2；2 5 7 78 9 8 A b e R，Va d m b g h e P凸，e t a l Di s t i n c t t r a m&e ft i n CI M a n d CD8 s ole inc T e dl s 叮 C I Y 2 8 r e F 妇 l i g a t i o n J I mmu n d，1 9 9 5；1 5 4：9 8 5 9 S a n s c DM，l 呻n A，Bo s h dl M，e t a l 册 CD 2 8 b u t n o t L F-3 CD2 i n t va a e t i o n z e a l x p r o v i d et hh d-t yc 【h u mm T 昕 dq，1 9 93；8 0：2 4 2 1 0 I i n s l e y P S，Br a d s h a w J，Urea s M，d a 1 C I Y 2 8朗 日 呲 h y B T B B1 ind u c s t r a ns ie n t d o wn-q 0 f CI Y 2 g sv n t h e s s 蛐d 0 r 日。d u n 叩。n 萄 n 鼹协 C I 挖8 i g n a l i n g j I r a m d 1 9 9 3；1 5 0：3 1 61 (1 9 9 8 年 6月 2 5日收稿，1 9 9 8 年 1 1 月 1 8日修回)Co s fi mu l a t o r y Effe c t o f An t i CD3 a n