中国药典2015版无菌检查方法适用性试验(直接接种法).pdf

*公司公司*产品产品 无菌检查方法适用性试验无菌检查方法适用性试验 1、样品信息 样品名称 生产厂家 规格型号 批号 2、培养基及试剂 名称 生产厂家 批号 硫乙醇酸盐流体培养基 胰酪大豆胨液体培养基 胰酪大豆胨琼脂培养基 0.9%无菌氯化钠溶液 沙氏葡萄糖液体培养基 沙氏葡萄糖琼脂培养基 冲洗液及稀释液 3、菌种基本信息：菌种名称 菌种来源 菌种编号 菌种代数 金黄色葡萄球菌 CMCC（B）26003 大肠埃希菌 CMCC（B）44102 生孢梭菌 CMCC（B）64941 枯草芽孢杆菌 CMCC（B）63501 白色念珠菌 CMCC（F）98001 黑曲霉 CMCC（F）98003 4、菌液制备：2.1 接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨培养基中或胰酪大豆胨脂培养基上，3035培养 1824 小时，培养物用 0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含菌数小于 100cfu 的菌悬液。2.2 接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，3035培养 1824小时，培养物用 0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含菌数小于 100cfu 的菌悬液。2.3 接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基或沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，2025培养 2448 小时，培养物用 0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml含菌数小于 100cfu 的菌悬液。2.4 接种黑曲霉菌的新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，2025培养57 天，加入 35ml 含 0.05%（ml/ml）聚山梨酯 80 的 0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含 0.05%（ml/ml）聚山梨酯 80 的 0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含菌数小于 100cfu 的菌孢子悬液。5、菌落计数：菌种名称 稀释级别 菌落计数 cfu/ml 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 枯草芽孢杆菌 生孢梭菌 白色念珠菌 黑曲霉 6、无菌检查直接接种法方法适用性试验 6.1 供试品制备：描述供试品制备过程（主要为每个样品的取样部位及用量）。6.2 试验组：取装量为 ml 硫乙醇酸盐流体培养基，接种 规定的供试品量（同6.1），并接种小于 100cfu 的金黄色葡萄球菌；大肠埃希菌、生孢梭菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉按照上述步骤操作，其中大肠埃希菌、生孢梭菌加入硫乙醇酸盐流体培养基，枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉加入胰酪大豆胨液体培养基。6.3 对照组：取装量为 ml 硫乙醇酸盐流体培养基 3 管，分别接种小于 100cfu的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌；取相同装量的胰酪大豆胨培养基 3 管，分别接种小于 100cfu 枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉。注：6.1 和 6.2 中供试品制备、每种培养基接种供试品的量、培养基装量由企业根据产品特性和药典的要求确定。6.4 上述培养基置规定的温度培养，培养时间不超过 5 天，逐日观察记录各管试验菌生长情况。6.5 验证结果 培养基 硫乙醇酸盐流体培养基 胰酪大豆胨培养基 培养时间（d）1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 金黄色葡萄球菌 试验组 /对照组 /大肠埃希菌 试验组 /对照组 /生孢梭菌 试验组 /对照组 /枯草芽孢杆菌 试验组/对照组/白色念珠菌 试验组/对照组/黑曲霉 试验组/对照组/“/”表示不适用；“-”表示试验菌生长微弱、缓慢或不生长；“+”表示试验菌生长良好 与对照管相比，含供试品各容器中的试验菌均生长良好，表明*产品的检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检查方法和检查条件进行供试品的无菌检查。6.6 供试品无菌检查方法的确定：取供试品 20 个，以无菌操作拆开每个包装，供试品制备方法（同6.1），10个接种于装量为 ml的硫乙醇酸盐流体培养基，10个接种于 ml胰酪大豆胨培养基中。另取 1 个供试品以无菌操作拆开包装，供试品制备方法（同6.1），接种于硫乙醇酸盐流体培养基中，并接种小于100cfu的 作为阳性对照。按中华人民共和国药典2015年版四部1101无菌检查法中规定的直接接种法进行试验。(注明:供试品无菌检查方法有关培养基装量及供试品用量应根据该检品方法验证的用量。6.6条既是技术要求中无菌试验修改的内容。)检验人：复核人：