2023年不同断面颜色白术中白术内酯IIIIII含量的测定.docx

不同断面颜色白术中量的测定 摘 要：目的 通过比较不同断面颜色白术中白术内酯的含量，从而确定不同颜色的白术的质量，建立白术的质量标准。 方法：采用外标法，HPLC法测量其中一个含量。Dikma Kromasil C。。(250 mm×4．6 miD．，5 pro)色谱柱，以乙腈(A)一水(B)为流动相梯度洗脱；体积流量为1．0 mL／min，柱温为25℃，检测波长为220 nm(白术内酯I、III)、276 nm(白术内酯I)，进样量10uL。 结果 白术内酯I分别在1．14～114、0．776"-'77．6、3．21～321 ug／mL与峰面积呈良好的线性关系。 结论 白术颜色白者与颜色棕者，其中白术内酯I.II.III含量差异较大，尤其白术内酯I.III含量白者多于棕者，故而白术白者质量优于棕者。 关键词：白术；I白术内酯I，白术内酯II，白术内酯III，高效液相色谱 断面颜色 1 引言 1.1白术简介 白术为菊科植物白术Atractylodes macrocephalaKoidz．的枯燥根，主产于浙江、安徽、湖北、湖南等省。味甘，性温，具有补气健脾，燥湿利水，止汗，安胎的成效[1]。主要含有挥发油和内酯类成分。其中的内酯类成分具有抗炎、抗肿瘤的作用，还具有调节胃肠道功能和促进营养物质吸收的作用，尤其以白术内酯I的作用明显。白术有多种炮制品，有白术、清炒白术、麸炒白术、土炒白术、泔制白术、米白术、盐白术、蒸白术和白术炭等。生白术临床常被用以健脾燥湿、利水消肿为主，炒制可以缓和燥性、增强其焦香之气，增强健脾益气之功能，麸炒可以增强其健脾消食的作用，土炒白术那么多用于补脾止泻.中国药典>>2023年版一部收载有麸炒白术和土炒白术两种规格的炮制品。为有效控制白术质量，本实验采用HPLC法测定了白术不同断面颜色白术中的白术内酯I、的含量I,建立白术外观与内在质量的关系，使白术的内在质量更直观，从而更好地指导用药者的用药，保证临床用药的效果。 1.2化学研究 白术主要含挥发油、内酯类化合物和多糖类成分。其中挥发油在白术饮片中占比大约为1.4%,其主要成分有苍术酮、苍术醇等,其中苍术酮在挥发油中含量占比为 31%-61%,挥发油中相对含量较高的还有 2-[(2-乙氧基-3,4-二甲基-2-环己烯)-1-甲基]-呋喃，其占挥发油的17%左右,β-3,4-二甲基-苯丁酸异丙酯约占 16.46%左右。利用气象色谱法提取白术的挥发油，其中相对含量最高的是蓬莪术烯(48%左右),其次含量较高的有吉马烯(6.6%左右),1-亚甲基-4-甲基-7-[1-甲基乙烯基]-十氢萘(6%左右),邻苯二甲酸二丁酯(11%左右)等。对产于浙江的白术,以水蒸气蒸馏和超临界萃取法提取其中的挥发油,含量最高者都是苍术酮。 此外，从白术中还含有多种内酯类成分。其中有白术内酯I(atrcatylenolide Ⅰ)、白术内酯Ⅱ(atractylcnolideⅡ)、白术内酯Ⅲ(atractylcnolide Ⅲ)、以上含量较高，此外还含有白术内酯Ⅳ(atractylenolide Ⅳ)、双白术内酯、8,9-环氧白术内酯、4,15-环氧羟基白术内酯等微量内酯类成分。其中白术内酯 I 的含量在 0.1%左右，白术内酯Ⅲ的含量030%之间。此外,白术还含有多糖类成分[3]白术三醇及维生素 A 等。 1.3药理研究 1.抗衰老作用 白术可以提高 12 个月月龄以上小鼠的红细胞 SOD 活性,并抑制小鼠脑单胺氧化酶 B 的活性,从而有对抗红细胞自氧化溶血的作用。此外白术还有去除活性氧自由基的作用。白术还具有抗衰老作用，其原理为其水煎液可显著提高老年小鼠体内全血谷光甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活力,从而显著降低红细胞中丙二醛的含量。 1.3.2 免疫调节作用 白术能明显增加TH细胞数量,提高 TH/TS比值，纠正 T 细胞亚群分布紊乱的状态,可明显提上下下的 IL-2 水平,并且能使 T淋巴细胞外表 IL-2R 的表达增加 ,这可能是白术免疫调节作用的机制之一[3] . 1.3.3 对肠胃运动的作用 白术水煎液通过胆碱能受体介导,并与α-受体有关[5-6]，从而实现小剂量白术煎剂对离体 具有明显的促进小鼠胃排空及促进小肠运动功能的作用[4]，,大剂量的白术煎液还能增强小鼠的肠胃推进运动,这种豚鼠回肠平滑肌收缩轻度抑制,较大剂量那么作用相反,并呈量效反响关系。 [9] 1.3.4 对子宫平滑肌的作用 白术的醇提取物与石油醚提取物对未孕小鼠离体子宫自发性收缩及药物兴奋性收缩呈显著抑制,水提物此作用较弱,醇提物较强。 1.3.5 对腹膜孔的调节作用 白术有明显的消腹水作用，其原理为白术可显著的开大腹膜孔,而且不仅使腹膜孔开放数目增加,分布的密度明也显增高。 1.对肿瘤的作用 白术有明显的抗肿瘤作用，其原理有二： 第一，白可以降低肿瘤细胞的增值率,降低肿瘤组织的侵袭性；第二，白术可提高机体自身对抗肿瘤细胞反响的能力及增强对肿瘤细胞的细胞毒作用。 1.4白术化学成分的药理作用研究 1. 白术挥发油有明显的抗消化道肿瘤的作用，可以延长患有艾氏腹水癌(EAC)的小鼠的生命,也可明显抑制小鼠移植性肿瘤肝癌 H22及肉瘤 S180 细胞的增殖。白术挥发油可,抑制癌细胞的生长，其原理是白术通过提高巨噬细胞的活性,从而增强机体非特异性免疫功能。白术挥发油还具有抑制肠管自发运动的作用。 1. 白术多糖 PAM可以恢复免疫抑制小鼠的增殖作用，对淋巴细胞的调节与 β-肾上腺素受体冲动剂异丙肾上腺素相关。其还可以单独激活或协同 ConA/PHA促进正常小鼠淋巴细胞转化，并且能明显地提高 IL-2 分泌的水平。白术多糖能增加胸腺与脾脏的重量,对抗由环磷酰胺所致的白细胞减少作用,增强腹腔巨噬细胞的吞噬功能,能促进淋巴细胞转化和促进溶血素的生成,所以具有全面的免疫增强作用。 1.4.3 白术内酯类成分(白术内酯Ⅰ、Ⅲ)具有抗炎、抗肿瘤作用[7],该类成分还具有调节胃肠道功能和促进营养物质吸收的功能,尤其以白术内酯Ⅰ的作用最为明显[8]，双白术内酯对豚鼠离体心房肌有负性肌力和负性频率作用。 1.5总结 白术为我国常用中药材，为名副其实的大宗药材。其最常被用于各类消化系统疾病。正因为其用量大，所以不仅要从内在制定其质量标准，也须建立其外观与内在质量的关系，以指导患者用药。然而平常市面白术质量参差不齐，颜色也不相同。药典中记白术为黄白至淡棕色，此两种颜色相差悬殊，以往古籍中也有记载越白越好[10]。因为白术最常被用于消化系统疾病，而其中内酯类成分为作用根底，也因为其内酯类成分为其独有的，与苍术相区别的物质，故而本实验选取其中白术内酯I,II,III为指标，探讨其不同颜色的质量的优劣，也也验证古籍所载正确与否。 2实验局部 2.1仪器与药品 美国Agillent 1100高效液相色谱仪，二级阵列检测器，1100色谱工作站。白术内酯I、II、III对照品购自中国药品生物制品检定所，批号分别为1396—060123、1397—060123、1398—060123；乙腈和甲醇皆为色谱纯，水为纯化水。白术药材购于西安雨润中药材专业市场，经陕西中医药大学鉴定教研室鉴定为菊科植物白术Amacrocephala Koidz．的枯燥根。 2.2方法与结果 2.2.1色谱条件：Dikma Kromasil C18(250 mm×4．6 mm，5 tim)色谱柱；以乙腈(A)一水(B)为流动相，梯度洗脱：0～16 min，60％～76％A，16～18min76％---100％A；18～30 min，100％A；流动相的体积流量为1．0 mL／min；柱温为25℃；检测波长为220nm(白术内酯I、III)、276 nm(白术内酯II)；进样量为10 uL。理论塔板数以白术内酯I计算应该不低于5 000。色谱图见图l 2.2.2对照品溶液的制备:称取白术内酯I、I对照品精密称定，置于10 mL的容量瓶中，以甲醇溶解并添加至刻度，摇匀。 2.2.3供试品溶液的制备：称取两种白术饮片约1 g，置于50 mL规格的锥形瓶中，参加甲醇50 mL，超声提取30 min，过滤，浓缩，转移至100ml的容量瓶，再参加甲醇定容至100 mL，摇匀，即得。规定以颜色白者制得的供试品为供试品1，以颜色淡棕色者制得的为供试品2。 线性关系考察：分别精密吸取白术内酯I、II.III混合对照品储藏液0．1、0．3、0．5、1．0、2．0、5．0.7．0.9 .1.25ml置于10ml的容量瓶中，参加甲醇定容，摇匀。在以上色谱条件下进行分析，分别以峰面积(y)为纵坐标，以质量浓度(x)为横坐标，进行线性回归，绘制标准曲线，得回归方程如下:白术内酯I、II、III分别在1．15～115、0．775～77．5、3．20~320ug／mL与峰面积呈良好的线性关系，回归方程分别为Y=4 350X+7．715、Y=2 878X+5．228、y=8 038X+14．94，r分别为0．999 9。 精密度试验：精密吸取两种白术供试品溶液，在以上色谱条件下连续进样6次，分别测定白术内酯I、II、III的峰面积，结果如下：相对标准偏差分别为0.46％、0．37％、0．52％。 重现性试验：取生白术饮片6份各约 g，精密称定，以甲醇声提取，制备供试品溶液，在以上色谱条件下测定其峰面积，计算其中白术内酯I、II、III的质量分数，结果如下：其相对标准偏差分别为I.23％、2．55％、2．25％。 稳定性试验：取白术供试品溶液，分别于0、l、3、5、10、15、24、32、48 h在上述色谱条件下进样分析，分别计算白术内酯I、II、III的质量分数，结果如下:其相对标准偏差分别为1．63％、0．99％、0．58％，结果说明供试品溶液在48 h内稳定。 图I 白术内酯I.III(A.220nm)和白术内酯II(B.276nm)和样品()HPLC图谱 Fig．1 HPLC Chromatograms of atractylenoIides Iand I reference substance(A)，atractylenolides I reference SUbstance(B)，RhizomaAtractylodis Macrocephalae(C amd D)。stirbaked Rhizoma Atractylodis Macrocephalaein bran(E and F)。stir—baked RhizomaAtractylodis Macrocephalae with soil(G and H)，stir—baked Rhizoma AtractylodisMacrocephalae simply(I and J) 加样回收率试验：精密称取白术供试品粉末约g，安供试品制备方法提取，分别精密参加混合对照品溶液，制备供试品溶液，在各水平下平行操作3份，在供试品高效液相色谱条件下进样分析，计算回收率。结果如下：白术内酯I、II、III的平均回收率分别为9％、10％、％，相对标准偏差分别为％、％、％。 2.2.9样品测定：取各两种白术制备供试品溶液，进行测定，进样10UL，计算白术内酯I、II、III的质量分数，结果见表1。 供试品 白术内酯I (mg/g) 白术内酯II (mg/g) 白术内酯III (mg/g) 内酯总量 (mg/g) 1 8 2 90 表1不同断面颜色白术中自术内酯I、I、Ⅲ的测定结果 3分析与讨论 检测器的选择 光电二极管阵列检测器可同时检测190-800nm全部紫外光和可见波长范围内的信号，进行一次检测，可以同时获得多个吸收。由于本实验需要检测白术内酯I.II.I