小吞噬细胞的吞噬功能检测.ppt

新乡医学院免疫学教研室 实实验验目目的的 掌握吞噬作用的掌握吞噬作用的原理和方法原理和方法 掌握显微镜油镜的掌握显微镜油镜的使用方法使用方法 掌握掌握瑞氏染色瑞氏染色的方法的方法 实实验验原原理理 血液中的多形核白细胞是一种小吞噬细血液中的多形核白细胞是一种小吞噬细胞，其细胞浆内含有多种酶类，对侵入胞，其细胞浆内含有多种酶类，对侵入体内的细菌具有强大的吞噬和消化功能，体内的细菌具有强大的吞噬和消化功能，是机体非特异性免疫的重要组成部分。是机体非特异性免疫的重要组成部分。意义意义：在某些情况下，小吞噬细胞也参：在某些情况下，小吞噬细胞也参与某些超敏反应和自身免疫疾病的组织与某些超敏反应和自身免疫疾病的组织损伤和炎症过程，因此，测定小吞噬细损伤和炎症过程，因此，测定小吞噬细胞的功能可在一定程度上反映机体的免胞的功能可在一定程度上反映机体的免疫状态，也可作为判定疗效的一种指标。疫状态，也可作为判定疗效的一种指标。大吞噬细胞（大吞噬细胞（单核巨噬细胞）单核巨噬细胞）小吞噬细胞（小吞噬细胞（中性粒细胞）中性粒细胞）吞吞噬噬细细胞胞 分分类类 大大吞吞噬噬细细胞胞 来源：单核巨噬细胞 存在部位：血液（单核细胞（单核细胞)全身结缔组织及小血管的基底 膜组织（巨噬细胞）（巨噬细胞）功能基础：富含溶酶体及线粒体富含溶酶体及线粒体 功能：吞噬病原微生物（寄生虫等），死亡细胞。反应时间及寿命：反应时间长（48h），寿命长。小小吞吞噬噬细细胞胞 来 源：中性粒细胞 存在部位：血液、炎症部位（全身）功能基础：溶酶体，过氧化物酶及杀菌物质。功 能：主要吞噬化脓菌主要吞噬化脓菌 反应时间及寿命：反应时间快,数分钟到几小时，寿命短.平均数小时 吞吞噬噬示示意意图图 吞噬过程吞噬过程 实实验验材材料料 无菌肉汤无菌肉汤 白葡菌液白葡菌液 注射器注射器 瑞氏染液瑞氏染液 PBS缓冲液缓冲液 解剖器材解剖器材 玻片、显微镜等玻片、显微镜等 实实验验方方法法 1.诱导诱导：实验前实验前1小时给小白鼠腹小时给小白鼠腹腔注射无菌肉汤腔注射无菌肉汤2ml，诱导浆液，诱导浆液渗出渗出 2.注射注射：给小白鼠腹腔内注射白给小白鼠腹腔内注射白葡菌液葡菌液1ml，让小鼠活动，让小鼠活动 3.取样取样：注射后注射后35 分钟处死小分钟处死小白鼠，白鼠，抽取腹腔液抽取腹腔液涂片涂片 4.染色：染色：标本干燥后标本干燥后瑞氏染液染瑞氏染液染色色 瑞瑞氏氏染染色色 5.瑞氏染色瑞氏染色：滴加滴加34滴瑞氏染滴瑞氏染液于标本上，以完全盖住标本液于标本上，以完全盖住标本为宜。为宜。30秒秒后滴两倍体积的缓冲液，后滴两倍体积的缓冲液，吹吸均匀吹吸均匀。3分钟分钟后甩去玻片上的染液，吸后甩去玻片上的染液，吸水纸吸干。水纸吸干。油镜镜检油镜镜检 油镜下见中性粒细胞胞浆呈淡胞浆呈淡兰色兰色，核分叶、紫红深染核分叶、紫红深染，白白葡菌呈兰色葡菌呈兰色。可见中性粒细胞胞浆内吞噬有很多白葡菌。实实验验结结果果 注射菌液时不要注射到皮下或腹腔脏器内，注射后轻揉腹部，使液体在腹腔内分散均匀 注意掌握好染色时间 注注意意事事项项 巨噬细胞吞噬鸡红细胞巨噬细胞吞噬鸡红细胞 大吞噬大吞噬（示教片）（示教片）油 镜 头 的 识 别 油镜头上常刻有白色环圈，或标有“油”字、“oil”、100/1.30 等。使用油镜可放大1000倍 原 理 使用油镜观察时，需加香柏油，因为油镜需要进入镜头的光线多，但油镜的透光孔最小，这样进入的光线就少，物体不易看清楚。同时又因自玻片透过的光线，由于介质（玻片空气接物镜）密度（玻片：n=1.52，空气：n=1.0）不同而发生了折射散光，因此射入镜头的光线就更少，物体更看不清楚。原 理 采用一种和玻片折光率相接近的介质如香柏油，加于标本与玻片之间，使光线不通过空气，这样射入镜头的光线就较多，物象就可看得清楚。原 理 使 用 方 法 先用低倍镜找到视野先用低倍镜找到视野 a将光线调至最强程度（聚光器提高，光圈全部开将光线调至最强程度（聚光器提高，光圈全部开放）。放）。b转动粗调节器使载物台下降，滴香柏油转动粗调节器使载物台下降，滴香柏油1小滴（不要小滴（不要过多，不要涂开）于接物镜正下方标本上。过多，不要涂开）于接物镜正下方标本上。c转动接物镜转换盘，使油镜头于镜筒下方。转动接物镜转换盘，使油镜头于镜筒下方。d俯身镜旁侧面在肉眼的观察下，转动粗调节器使油俯身镜旁侧面在肉眼的观察下，转动粗调节器使油镜头徐徐浸入香柏油内，轻轻接触玻片为止。镜头徐徐浸入香柏油内，轻轻接触玻片为止。e慢慢转动粗调节器，使载物台徐徐下降至见到标本慢慢转动粗调节器，使载物台徐徐下降至见到标本的物象为止。的物象为止。f转动微调节器，使视野物象达到最清晰的程度。转动微调节器，使视野物象达到最清晰的程度。g左手徐徐移动推进器，并转动微调节器以观察标本。左手徐徐移动推进器，并转动微调节器以观察标本。h标本观察完毕后，转动粗调节器将载物台下降，取标本观察完毕后，转动粗调节器将载物台下降，取下标本玻片。下标本玻片。最后用擦镜液将油镜头上的最后用擦镜液将油镜头上的香柏油擦干净香柏油擦干净 精品课件精品课件！精品课件精品课件！下 周 实 验 课 内 容 豚鼠的过敏实验（发敏）