2023年HPLC法分析川芎香附配伍前后指标成分的变化柴胡香附川芎.docx

天道酬勤 [HPLC法分析川芎-香附配伍前后指标成分的变化]柴胡香附川芎 　　作者简介] 张文娟，女，主管药师，硕士，主要从事中药化学成分分析。 　　[通讯作者] 王庆伟，男，主管药师，博士，主要从事药物代谢动力学及透皮制剂的研究。 　　 　　[] 目的：研究药对川芎-香附配伍对单味药材中指标成分的影响。方法：以川芎嗪、阿魏酸、藁本内酯和α-香附酮为指标成分，采用HPLC法分析川芎、香附及川芎-香附配伍前后变化。色谱条件：色谱柱为Inertsil ODS-3〔4.6 mm×250 mm，5 μm〕；流动相为：甲醇-0.05%磷酸水溶液〔梯度洗脱，0~20 min：45%~48%甲醇；20~25 min：48%~70%甲醇；25~50 min：70%~75%甲醇；50~55 min：75%~100％甲醇；55~60 min：100%~45%甲醇〕，检测波长为270 nm。结果：药对中指标成分川芎嗪、阿魏酸、藁本内酯含量与单味药材相比均有所增大。结论：川芎-香附配伍前后特征峰面积均发生明显变化。 　　[关键词] HPLC；川芎-香附；川芎嗪；阿魏酸；藁本内酯；α-香附酮 　　[中图分类号] R284.2[文献标识码]A [文章编号]1673-7210〔2023〕07〔b〕-096-03 　　Analysis of the diversify in the matched pair of Chuanxiong Rhizoma and 　　Cyperi Rhizoma by HPLC 　　ZHANG Wenjuan, XU Yuan, WANG Qingwei 　　Department of Pharmacy, Tangdu Hospital, the Fourth Military Medical University, Xi′an 710038, China 　　[Abstract] Objective: To study the effect on the index component of Chuanxiong Rhizoma and Cyperi Rhizoma after matched. Methods: The ligustrazine, ferulic aid and ligustilide were used as the index ingredients to analyze the diversity in the matched pair of Chuanxiong Rhizoma and Cyperi Rhizoma by HPLC. The Inertsil ODS-3 (4.6 mm×250 mm, 5 μm) column was used; methanol-0.05% phosphoric acid was used as mobile phase in a gradient elution(0-20 min: 45%-48% methanol; 20-25 min: 48%-70% methanol; 25-50 min: 70%-75% methanol; 50-55 min: 75%-100% methanol; 55-60 min: 100%-45% methanol). The detective wavelength was 270 nm, and the flow rate was about 1 ml/min. Results: The concentration of ligustrazine, ferulic acid and ligustilide in crude drug pairs were increased compared with the single plant medicine. Conclusion: The peak area has changed absolutely after matched. 　　[Key words] HPLC; The matched pair of Chuanxiong Rhizoma and Cyperi Rhizoma; Ligustrazine; Ferulic acid; Ligustilide; α-Cyperone 　　川芎-香附既是行气疏肝的药对，也是很多大复方中常用的配伍结构，临床主要用于郁证的治疗。川芎味辛，性温。入肝、胆、心包经，具有活血行气、祛风止痛的成效[1]，为治头痛之要药[2]。香附味辛、微苦、微甘，性平，归肝、三焦经，具有疏肝行气、调经止痛的成效，常用醋制。 　　由于香附、川芎化学成分复杂，既含有大量的脂溶性成分，又有水溶性成分。本试验选择川芎中成清楚确的生物碱主成分川芎嗪、酸性主要成分阿魏酸及挥发油主要成分藁本内酯；选择香附中成清楚确的挥发油主成分α-香附酮作为指标，采用HPLC法分析药对川芎-香附配伍前后的含量变化，探讨川芎-香附配伍对指标成分的影响。 　　1 仪器与试药 　　高效液相色谱仪〔岛津SPD-10AvP〕；超声波清洗器〔昆山市超声波仪器厂〕；电子分析天平〔BS 223S 赛多利斯〕。甲醇〔分析纯，天津市红岩化学试剂厂〕，乙醇〔分析纯，天津市红岩化学试剂厂〕。磷酸〔分析纯，天津市百世化工公司化学试剂厂〕。 　　流动相所用甲醇、乙腈均为色谱纯〔美国FISHER公司〕，纯化水；阿魏酸对照品〔含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号110773-202211〕；盐酸川芎嗪对照品〔含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号110817-200305〕； 藁本内酯对照品〔天津一方科技，批号：00012180-3956〕；α-香附酮对照品〔供鉴别用，中国药品生物制品检定所，批号110748-202209)。川芎药材，香附药材均购于西安中药饮片厂，经第四军医大学药学院生药教研室鉴定分别为伞形科植物川芎的枯燥根茎和莎草科植物莎草的枯燥根茎。制香附为按照2023版中国药典自制。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　色谱条件与系统适用性试验：色谱柱为Inertsil ODS-3〔4.6 mm×250 mm，5 μm)；以甲醇-0.05%磷酸溶液为流动相〔梯度洗脱，0~20 min：45%~48%甲醇；20~25 min：48%~70%甲醇；25~50min：70%~75%甲醇；50~55 min：75%~100%甲醇；55~60 min：100%~45%甲醇〕；检测波长为270 nm；柱温25℃；流速为1 ml/min。 　　2.2 对照品溶液的制备 　　精密称取川芎嗪对照品3.68 mg，置10 ml棕色量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得〔每1 ml含川芎嗪0.368 mg〕。 　　精密称取阿魏酸对照品2.41 mg，置10 ml棕色量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得〔每1 ml含阿魏酸0.241 mg〕。 　　精密称藁本内酯对照品1.022 7 mg，置10 ml棕色量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得〔每1 ml含藁本内酯0.102 27 mg〕。 　　精密称取α-香附酮对照品85.93 mg，置10 ml棕色量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得〔每1 ml含α-香附酮8.593 mg〕。 本文为全文原貌 未安装PDF浏览器用户请先下载安装 原版全文 　　2.3供试品溶液的制备 　　取川芎、制香附药材粉末〔过三号筛〕各约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密参加70%甲醇50 ml，密塞，称定重量，超声提取30 min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液用微孔滤膜〔0.45 μm〕滤过，取续滤液，即得。取川芎－制香附〔1∶1〕混合药材粉末〔过三号筛〕约1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密参加70%甲醇100 ml，密塞，称定重量，超声提取30 min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液用微孔滤膜〔0.45 μm〕滤过，取续滤液，即得。 　　2.4 结果 　　分别精密吸取对照品溶液与川芎及制香附供试品溶液各20 μl，川芎-制香附配伍供试品40 μl注入液相色谱仪，测定，即得。对照品及供试品色谱图见图1，单味药材及药对中峰面积数据见表1。由表1峰面积数据可以看出，10个特征峰中其中2~9号特征峰的峰面积明显增加。其中1号峰与9号峰为制香附与配伍后药对中的共有峰，2~7号峰为川芎与配伍后药对中的共有峰。2号、4号、7号峰分别为指标成分川芎嗪、阿魏酸和藁本内酯。 　　表1 川芎、制香附及川芎－制香附〔1∶1〕特征峰的保存时间及峰面积 　　3 讨论 　　药对是组成方剂的核心，它构成简单，却具备了复方根本主治功能，是中医遣方用药特点之一；药对是介于单方与复方之间的配伍单元，表达着中药方剂适证化裁、灵活加减的运用特点[3]，以点带面，对于分析中药方剂的配伍规律有事半功倍之效。 　　化学成分是中药作用的物质根底，任何配伍效应都应有特定的化学表述。因此研究药对配伍前后化学成分的变化是探讨其配伍规律的一个重要途径。所以本文采用HPLC法测定了川芎-香附配伍前后指标成分的变化。测定结果显示：药对中除2号、10号特征峰外其余的含量与单味药材相比均有所增大，但其发生变化的配伍机制还有待进一步深入研究。 　　川芎样品中有一与α-香附酮几乎相同保存时间的物质出现〔α-香附酮标准品保存时间为59.079 min，制香附中α-香附酮保存时间为59.079 min，川芎中10号峰的保存时间为59.066 min〕。但该特征峰在川芎－制香附配伍后保存时间稍有滞后为59.129 min。而且该峰的峰面积相对与川芎和制香附单味药材发生了不同的变化。相对与川芎该峰的峰面积有所增加，而相对与制香附该峰的峰面积有所减小。此峰的变化可能由于梯度洗脱流动相极性的变化，也有可能是两味药材配伍后物质相互影响而导致保存时间发生变化。该峰的峰面积相对川芎和制香附单味药材发生了不同的变化，相对川芎该峰的峰面积有所增加，而相对于制香附该峰的峰面积有所减小。对该物质的此种变化我们将在以后的实验中进一步探讨研究。 　　现代医家蒲辅周认为香附、川芎二药合用肝胆气郁才能推动[4]。鲁府禁方香茗散(香附子二钱，川芎一钱，细茶一撮。水煎温服) 主治气脑冲动，头痛。川芎与香附配伍长于利气开郁，活血止痛，为治疗气郁头痛之重要方剂。临床用于肝气郁结之头痛甚佳。川芎中的生物碱与有机酸是其活血化瘀的主要活性成分，川芎嗪有明显镇痛作用[5]，阿魏酸已经被证实为川芎治疗偏头痛的有效成分[6]。川芎挥发油中苯酞类成分含量最高，多种苯酞类化合物被证明是川芎中对心脑血管作用的主要成分[7]。挥发油是香附主要有效成分之一，α-香附酮是香附挥发油的主要成分[8]，且为较强的前列腺素生物合成抑制剂，被认为是镇痛作用的有效成分之一[9-10]。中药成分复杂，协同起效的特点提示药对配伍前后化学成分的变化值得深入探讨。同时也为川芎－制香附配伍前后药理药效变化的研究奠定了一定的根底。 　　[参考文献] 　　[1]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京:中国医药科技出版社,2023:38. 　　[2]王筠默.中药药理学[M].上海:上海科学技术出版社,1987:111-112. 　　[3]孙洋,陈婷,徐强.从药对的角度考察复方配伍规律[J].世界科学技术-中医药现代化,2004,(1):17-21. 　　[4]肖森茂,彭永开.百家配伍用药经验菜箐[M].北京:中国中医药出版社,1992:149. 　　[5]杨丽娟.川芎的药理作用研究进展[J].黑龙江医药,2023,23(4):599- 600. 　　[6]袁莹,林晓,冯怡,等.川芎治疗偏头痛效应组分的体内移行研究[J].中国药学杂志,2023,45(9):694-697. 　　[7]Natio T, Kubota K, Shimoda Y, et al. Effects of constistuent