医疗器械免疫原性评价方法　第4部分：小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验　半体内法 YYT 1465.4-2017.pdf

YY/T1465.4-2017前言YY/T1465医疗器械免疫原性评价方法，分为以下部分：一第1部分：体外T淋巴细胞转化试验：一第2部分：血清免疫球蛋白和补体成分测定(ELISA法)：第3部分：空斑形成细胞测定琼脂周相法：第4部分：小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验半体内法：一第5部分：用M86抗体测定动物源性医疗器械中a-Gl抗原清除率。本部分为YY/T1465的第4部分。有关其他方面的医疗器械免度原性评价方法将有其他部分的标准。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家食品药品监督管理总局提出。本部分由全国医疗器械生物学评价标准化技术委员会(SAC/T248)归口。本部分起草单位：四川医疗器械生物材料和制品检验中心、山东省医疗器械产品质量检验中心。本部分起草人：袁暾、梁洁、乔春霞、郑秀娥。YY/T1465.4-2017医疗器械免疫原性评价方法第4部分：小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验半体内法1范围YY/T1465的本部分给出了半体内法测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细跑的方法。本部分适用于评价医疗器械/材料对巨噬细胞吞噬能力的影响。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T16886.1医疗器械生物学评价第1部分：风险管理过程中的评价与试验(GB/T16886.1一2011,IS)10993-1:2009,DT)GB/T16886.2医疗器械生物学评价第2公：动物福利要求(GB/T16886.2一2011，IS)10993-2:2006,IDT)GB/T16886.11医疗器械生物学评价第1部分：全身毒性试验(GB/T16886.11一2011，IS)10993-6:2006,IDT)GB/T16886.12医疗器械生物学评第12部分：样品制备与参照样品(GB/T16886.12一2005,1S()10993-12:2002,IDT)GB/T16886.20医疗器械生物学评价第20部分：医疗器械免疫毒理学试险原则与方法(GB/T16886.20-2015.IS()/TS10993-20:2006,IDT)3术语和定义GB/T16886.1、GB/T16886.2、GB/T16886.12和GB/T16886.20界定的术开和定义适用于本文件。4试验原理使用鸡红细胞免疫小鼠后，小鼠巨噬细胞可将其作为异物识别并吞噬。通过染色计数吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞的数量可反映巨噬细胞的吞噬功能。当医疗器械/材料作用于机体时，通过检测巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬能力的变化情况，即可评价医疗器械/材料对机体巨噬细胞吞噬功能的影响。5试验动物5.1动物种属的选择本试验选择的动物种属为小鼠，雌雄不限。Blb/c小鼠是优先推荐的品系。宜使用体重在18g22gYY/T1465.4-2017成年未生育过且未受孕的小鼠。在试验开始时，动物体重差异宜最小，并不超过平均体重的士20%。当有充分数据证实时，也可以选择其他品系动物。5.2动物准备所有的动物试验应在经国家认可机构批准并符合实验室动物福利全部适用法规的实验室内进行，并且还应符合GB/T16886.2的要求。随机选择动物，进行个体标记，并于试验前在实验室条件下适应至少5d。6样品制备及接触途径6.1对于医疗器械中常见的不溶性非降解物质，可根据GB/T16886.12的原则，制备样品浸提液。宜使用适宜的溶剂进行加严浸提，以溶出所有可浸提的组分。浸提液宜当日制备除非有稳定性数据说明贮存的可接受性。按照样品的顶期用途，宜按照GB/T16886.11的要求确定样品/浸提液的动物接触方式。常用的动物接触方式可包括灌胃，腹腔注射及静脉注射等。接触剂量及接触时间可参考GB/T16886,11中急性，亚急性，亚慢性及慢性全身毒性试险的要求进行设计，并在最终试验报告中写明。6.2对于可降解的医疗器械，应根据预期临床应用方式设计器械与动物接触/免疫方式。当有可获得的研究文献时，可以考虑采用已有文献报道的方法进行试验设计，以与现有数据进行比较。当没有可参考的动物接触/免疫方式时，可考虑与预期临床应用方式相似的植入途径。6.3液体试险物质可直接使用或稀释使用。注：医疗器械中免疫原多为大分子物质，如制备样品浸提液，对选用浸提方法的有效性进行说明。7对照样品的选择7.1阳性对照推荐使用能够促进巨噬细胞吞噬能力的阳性对照物质包括：1O0IU/g的y干扰素(IFN-Y)或10mg/kg植物血凝素A(PHA):能够抑制巨噬细胞吞噬能力的阳性对照物质包括：5mg/kg的地塞米松或200g/kg的环磷酰胺。也可使用其他经过充分论证的阳性对照试验物质。阳性对照物质的选择及应用方式宜根据受试样品的预期用途及试验目的确定。7.2阴性对照使用GB/T16886.12中推荐的浸提介质（如生理盐水）以与试验样品相同的处理方式进行操作。注：当存在已知的有长期临床使用史，其免疫毒性水平已被认为可接受且与试验样品组成与预期使用方式均相同的已上市产品时，也可作为阴性对照，但其应川需经充分的论证。8试验步骤8.1试验分组将实验动物按照随机原则进行以下分组，每组至少5只动物：a)试验样品组；b)阳性对照组：c)阴性对照组。注：对材料或其浸提液进行梯度稀释有助于得出免疫应答的剂量效应关系，推荐试验样品组采川不同剂量进行试验。