基于Box-Behnken...浸渍工艺及其质量标准的研究_王文.pdf

1309药品评价 Drug Evaluation 2022,19（21）基于 Box-Behnken 设计-响应面法优化白斑酊浸渍工艺及其质量标准的研究王文1，许时贵1，付志媛1，魏鑫华2，张国松21.江西省皮肤病专科医院，江西省皮肤病临床医学研究中心，国家皮肤与免疫疾病临床医学研究中心分中心建设单位，江西 南昌 330001；2.江西中医药大学，江西 南昌 330006摘要目的：优化白斑酊的浸渍工艺，并对其质量标准进行研究。方法：以补骨脂素和异补骨脂素的总转移率为指标，采用单因素考察结合 Box-Behnken 设计-响应面法优化白斑酊的浸渍工艺。结果：浸渍工艺为：3 味药材粉碎成细粉，过 40 目筛，加 70%乙醇，料液比为 945，浸渍 9 d。测定方法结果准确可靠。结论：优化后的浸渍工艺操作简单，浸渍效果良好，结果稳定可靠。关键词工艺学,制药；浸渍；白斑酊；补骨脂素；异补骨脂素；高效液相色谱法DOI:10.19939/ki.1672-2809.2022.21.08Optimization of Impregnation Process of Baiban Tincture by Box-Behnken Design-response Surface Methodology and its Quality Standard Research WANG Wen1,XU Shigui1,FU Zhiyuan1,WEI Xinhua2,ZHANG Guosong21.Dermatology Hospital of Jiangxi Province,Jiangxi Provincial Clinical Research Center For Skin Diseases,Candidate Branch of National Clinical Research Center for Skin Diseases,Nanchang Jiangxi 330001,China;2.Jiangxi University of Chinese Medicine,Nanchang Jiangxi 330006,China.Abstract Objective:To optimize the impregnation process of baiban tincture and study its quality standard.Methods:With the total transfer rate of psoralen and isopsoralen as the index,the impregnation process of leukoplakia tincture was optimized by single factor investigation combined with Box-Behnken design-response surface methodology.Results:The final impregnation process was determined as follows:three medicinal herbs were crushed into fine powder,sieved through 40 mesh sieve,70%ethanol was added,the ratio of material to liquid was 945,and the maceration lasted for 9 days.The results of this method are accurate and reliable.Conclusion:The optimized impregnation process is easy to operate,with good impregnation effect and stable and reliable results.Key Words Technology,pharmaceutical;Immersion;Baiban tincture;Psoralen;Isopsoralen;HPLC基金项目：江西省中医药管理局科技计划项目（2021A338），江西省医院制剂重点研究室（赣中医药科教字20213号）作者简介：王文，硕士，主管药师。研究方向：药物制剂、医院药学。E-mail:通信作者：许时贵，本科，主管药师。研究方向：药物制剂、医院药学。E-mail:白斑酊收载于南京市卫生局主编的医院制剂规范1，为临床经验方，由补骨脂、菟丝子、栀子 3 味中药以 111 的比例构成，主要用于治疗白癜风2-3、皮肤白斑等。该处方在临床上使用多年。使用本品时，需将相同重量的 3 味药材用适宜浓度的乙醇浸渍 710 d 后方可使用，且浸渍时间长，操作烦琐，患者依从性差。而且由于患者操作水平的不同，造成工艺不稳定，药品的质量得不到保证，影响药物疗效。本研究根据白斑酊处方组成、有效成分的性质，保持原剂型（酊剂）不变的情况下，使用单因素考察结合 Box-Behnken 设计-响应面法进行实验，优化浸渍工艺，在保证原组方中治疗疾病的物质基础未发生变化的情况下优化了制剂生产工艺，保证了制剂的稳定、安全、有效。1 仪器和试药Agilent 1260高效液相色谱仪（配备紫外检测器，四元梯度泵，安捷伦数据处理软件系统）。补骨脂素对照品（批号 110739-200814）、异补骨脂素对照品（批号 110738-200511）、栀子对照药材（批号 120986-201108）、栀子苷对照品（批号 110749-200714）均购自中国食品药品检定研究院。2 方法和结果2.1 浸渍工艺研究2.1.1 补骨脂素和异补骨脂素含量测定方法 补骨脂1310药品评价 Drug Evaluation 2022,19（21）为该处方的君药，是治疗白癜风常用的中药。其主要活性成分补骨脂素和异补骨脂素，具有较强镇静、解痉、止血等作用，是补骨脂治疗白癜风的有效成分4。实验以补骨脂素和异补骨脂素总转移率为指标，进行浸渍工艺研究。（1）色谱条件和系统适用性条件。色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱（4.6 mm250 mm，5 m）；流动相：甲醇-水（5050）；检测波长：246 nm；流速：1 mL/min；柱温：35。理论板数按补骨脂素峰计算不低于 3 000。（2）溶液制备。混合对照品溶液的制备：取补骨脂素对照品、异补骨脂素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 1 mL 含补骨脂素 14.0 g 和异补骨脂素 16.4 g 的混合溶液，即得；供试品溶液制备：精密量取浸渍液 1 mL，置 50 mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。（3）测定法。分别精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液各 10 L,注入高效液相色谱仪，测定。（4）阴性对照溶液的制备。处方中除去补骨脂的其余药味按制剂工艺制备，制得供试品阴性对照，照供试品溶液制备的方法制得供试品阴性对照溶液。分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液与阴性对照溶液各 10 L，按上述色谱条件测定，结果阴性对照溶液色谱在与对照品溶液色谱和供试品色谱相应位置上无对应色谱峰出现，说明该方法专属性良好，结果如图 1 所示。（5）线性范围考察。精密吸取混合对照品溶液2 L、5 L、8 L、10 L、15 L、20 L（分别含补骨脂素对照品 0.028 g、0.070 g、0.112 g、0.140 g、0.210 g、0.280 g 和异补骨脂素对照品 0.033 g、0.082 g、0.131 g、0.164 g、0.246 g、0.328 g）分别注入色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，并以峰面积（Y）对补骨脂素和异补骨脂素进样量（X）进行回归，得标准曲线。补骨脂素线性方程为：Y=8 985.5X-2.142 9，r=1.000 0；异补骨脂素线性方程为：Y=10 585X-4.643 7，r=1.000 0。表明补骨脂素和异补骨脂素在各自进样量范围内与峰面积线性关系良好。（6）精密度试验。精密吸取混合对照品溶液10 L，重复进样 6 次,测得补骨脂素对照品峰面积平均值为 1 257.25，RSD 为 0.17%；测得异补骨脂素对照品峰面积平均值为 1 732.97，RSD 为 0.18%，说明该方法精密度良好。（7）稳定性试验。取供试品溶液 10 L，按拟定的含量测定项下方法分别在 0、2、4、8、16、24 h 测定，结果补骨脂素峰面积平均值为 699.07，RSD（n=6）为 0.53%；异补骨脂素峰面积平均值为604.86，RSD（n=6）为 0.49%，表明供试品溶液在24 h 内稳定。（8）重复性试验。按拟定的含量测定方法，取同一批样品平行制备 6 份供试品溶液，测得补骨脂素峰面积平均值为 696.88，RSD（n=6）为 0.66%；异骨脂素峰面积平均值为 600.74，RSD（n=6）为0.20%，表明方法重复性良好。注：1.补骨脂素对照品；2.异补骨脂素对照品。图1 高效液相色谱图：A.供试品溶液；B.混合对照品溶液；C.阴性对照溶液ABC1122吸收值/mAU吸收值/mAU吸收值/mAU时间/min时间/min时间/min1311药品评价 Drug Evaluation 2022,19（21）（9）加样回收率试验。取已知含量的样品（补骨脂素和异补骨脂素含量分别为 0.389 0 mg/mL、0.286 0 mg/mL）1 mL，精密加入补骨脂素对照品和异补骨脂素对照品混合溶液 1 mL(补骨脂素浓度为0.392 2 mg/mL、异补骨脂素浓度为 0.300 5 mg/mL)，按供试品制备与测定方法，平行做 6 份，计算得补骨脂素回收率为 101.75%，RSD 为 0.63%；异补骨脂素回收率为 101.21%，RSD 为 0.36%，结果见表 1、表 2。说明该方法准确度良好。表1 补骨脂素回收率测定结果序号测得量/mg样品中补骨脂素的量/mg补骨脂素的加入量/mg回收率/%平均值/%RSD/%10.788 00.389 00.392 2101.73 101.750.6320.787 10.389 00.392 2101.50 30.787 50.389 00.392 2101.61 40.792 80.389 00.392 2102.96 50.785 30.389 00.392 2101.05 60.787 70.389 00.392 2101.66 表2 异补骨脂素回收率测定结果序号测得量/mg样品中异补骨脂素的量/mg异补骨脂素的加入量/mg回收率/%平均值/%RSD/%10.591 70.286 00.300 5101.73 101.21 0.3620.590 10.286 00.300 5101.20 30.589 20.286 00.300 5100.90 40.591 20.286 00.300 5101.56 50.588 90.286 00.300 5100.80 60.589 80.286 00.300 5101.10（10）补骨脂药材含量测定。取补骨脂药材粉末（过三号筛）约 0.5 g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流提取 2 h，放冷，转移至 100 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液 5 mL，置 25 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。精密吸取 10 L 进样，测得药材中补骨脂素和异补骨脂素的总含量为 1.26。2.1.2 单因素考察 白斑酊处方为：补骨脂 60 g、菟丝子 60 g、栀子 60 g。（1）原料粉碎粒度。称取处方饮片 3 份，分别粉碎，过 20 目、30 目、40 目筛，70%乙醇料液比940，浸渍 7 d，按上述方法测得浸渍液中补骨脂素和异补骨脂素总转移率分别为 43.37%、57.21%、68.35%。结果表明，随着粉碎粒度增加，总转移增加，确定