第33卷第1期2023年2月生物技术Biotechnology33(1):19Feb.,2023收稿日期:2022-02-11基金资助:全军卫勤保障能力创新与生成专项(20WQ029);全军保健专项科研课题(18BJZ14);广东省医学科学技术研究基金项目(A2021273)作者简介:邹赛(1997-),女,湖南省岳阳人,学士,检验师,研究方向:肿瘤分子标志物快速诊断,E-mail:784753475@qq.com。∗通讯作者:李林海(1972-),男,云南省大理人,博士,教授,博导,研究方向:肿瘤分子标志物及细胞信号转导学,发表论文100余篇,E-mail:mature303@126.com。技术与方法TECHNIQUEANDMETHOD基于CRISPR/Cas13a的EML4-ALK融合基因检测方法的建立邹赛1,2,肖斌3,邝振展4,孙朝晖1,黄秀娜1,李林海3∗(1.中国人民解放军南部战区总医院检验科,广东广州510010;2.珠海市妇幼保健院检验科,广东珠海519000;3.广州医科大学附属第六医院,清远市人民医院检验医学部,广东清远511518;4.深圳大学附属华南医院检验科,广东深圳518000)摘要:[目的]构建基于CRISPR/Cas13a蛋白的SHERLOCK技术平台,并将其应用于肺癌EML4-ALK融合基因的检测。[方法]构建EML4-ALK融合基因的质粒标准品;利用RPA和PCR技术分别扩增目的基因后进行SHERLOCK检测并比对结果,比较基于RPA和PCR扩增的SHERLOCK检测EML4-ALK融合基因的灵敏度,评估SHERLOCK检测目的基因及多种非目标基因的特异性。[结果]成功构建EML4-ALK融合基因表达质粒标准品;基于RPA和PCR扩增的SHERLOCK检测EML4-ALK融合基因的相对荧光值无显著差异,最低检测下限为10copies/μL,且在5min内荧光达到平台期;SHERLOCK技术仅对EML4-ALK融合基因有阳性检测信号,对EML4、ALK、EGFRT790M和EGFRL858R基因无阳性检测信号。[结论]基于SHERLOCK技术的EML4-ALK融合基因检测方法具有特异性强、灵敏度高、检测时间短等优势,有望为肺癌EML4-ALK融合基因的早期诊断提供重要依据。关键词:Cas13a蛋白;SHERLOCK技术;EML4-ALK;基因检测中图分类号:R446.7文献标识码:ADOI:10.16519/j.cnki.1004-311x.2023.01.0004EstablishmentofanovelmethodindetectingEML4-ALKfusiongenebasedonCRISPR/Cas13aZOUSai1,2,XIAOBin3,KUANGZhen-zhan4,SUNZhao-hui1,HUANGXiu-na1,LILin-hai3∗(1.DepartmentofClinicalLaboratory,GeneralHospitaloftheSouthernTheateroftheChinesePeople′sLiberationArmy,Guangzhou510010,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,ClinicalLaboratoryofZhuhaiMaternalandChildHealthHospital,Zhuhai519000,China;3.DepartmentofLa...
