GB 31660.6-2019 食品安全国家标准 动物性食品中5种α2-受体激动剂残留量的测定 液相色谱-串联质谱法.pdf

GB 31660.62019 2019-09-06 发布 2020-04-01 实施 食品安全国家标准 动物性食品中 5 种 2-受体激动剂残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 National food safety standard-Determination of five kinds of alpha-agonists residues in animal derived food by liquid chromatography-tandem mass spectrometry method 发布发布 GB31660.62019 I 前 言 本标准系首次发布。GB31660.62019 1 食品安全国家标准 动物性食品中 5 种 2-受体激动剂残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范围范围 本标准规定了动物性食品中5种2-受体激动剂的制样和液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于猪肌肉、肝脏和肾脏组织及鸡肌肉和肝脏组织中替扎尼定、赛拉嗪、溴莫尼定、安普乐定和可乐定残留量的测定。2 规范性引用文件规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理原理 试样中残留的2-受体激动剂，用碳酸钠缓冲溶液、乙酸乙酯提取，固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱测定，外标法定量。4 试剂和材料试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的一级水。4.1 试剂 4.1.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯。4.1.2 甲酸（HCOOH）：色谱纯。4.1.3 甲醇（CH3OH）。4.1.4 氨水（NH4OH）。4.1.5 无水碳酸钠（Na2CO3）。4.1.6 碳酸氢钠（NaHCO3）。4.1.7 乙酸乙酯（CH3COOC2H5）。4.2 溶液配制 4.2.1 碳酸钠溶液：取无水碳酸钠 10.6 g，用水溶解并稀释至 100 mL。4.2.2 碳酸氢钠溶液：取碳酸氢钠 8.4 g，用水溶解并稀释至 100 mL。4.2.3 碳酸钠缓冲溶液：取碳酸钠溶液 90 mL、碳酸氢钠溶液 10 mL，混匀，现用现配。4.2.4 甲酸溶液（0.2）：取甲酸 1 mL，用水溶解并稀释至 500 mL。4.2.5 甲酸-乙腈溶液：取 0.2%甲酸溶液 80 mL，加乙腈 20 mL，混匀。4.2.6 氨水甲醇溶液（5）：取氨水 5 mL，用甲醇溶解并稀释至 100mL。4.3 标准品 盐酸替扎尼定（Tizanidine hydrochloride,C9H8ClN5S HCl,CAS:64461-82-1）、盐酸赛拉嗪（Xylazine Hydrochloride,C12H16N2S,CAS:7361-61-7）、溴莫尼定（Brimonidine,C11H10BrN5,CAS:59803-98-4）、盐 酸 安 普 乐 定（Apraclonidine hydrochloride,C9H10N4Cl2 HCl,GB31660.62019 2 CAS:73218-79-8）和盐酸可乐定（Clonidine hydrochloride,C9H10Cl3N3,CAS:4205-91-8）：含量均98%。4.4 标准溶液制备 4.4.1 标准贮备液：取盐酸替扎尼定、盐酸赛拉嗪、溴莫尼定、盐酸安普乐定和盐酸可乐定标准品各约 10mg，精密称定，分别于 10 mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度均为 1 mg/mL 的盐酸替扎尼定、盐酸赛拉嗪、溴莫尼定、盐酸安普乐定和盐酸可乐定标准贮备液。28保存，有效期 6 个月。4.4.2 混合标准工作液：分别精密量取上述标准贮备液各 1 mL，于 100 mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为 10 g/mL 的混合标准工作液。于 28保存，有效期1 个月。4.4.3 标准曲线制备：分别精密量取混合标准工作液适量，用甲酸-乙腈溶液稀释配制成浓度为0.5、1、10、50和100 g/L系列混合标准工作液，临用现配。4.5 材料 4.5.1 固相萃取MCX柱：60mg/3mL，或相当者。4.5.2 滤膜：有机相，0.22 m。5 仪器和设备仪器和设备 5.1 液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾电离源。5.2 分析天平：感量 0.00001 g 和 0.01 g。5.3 均质机。5.4 离心机。5.5 涡旋振荡器。5.6 旋转蒸发仪。5.7 固相萃取装置。5.8 鸡心瓶。5.9 离心管：50 mL。6 试料的制备与保存试料的制备与保存 6.1 试料的制备 取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎并使均质。取均质的供试样品，作为供试试料。取均质的空白样品，作为空白试料。取均质的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。6.2 样品的保存-20以下保存。GB31660.62019 3 7 测定步骤测定步骤 7.1 提取 取试料2 g（准确至20mg），于50 mL离心管中，加碳酸钠缓冲液5 mL，振荡混匀，加乙酸乙酯10 mL，充分振荡，于8000 r/min离心5 min，取上清液于鸡心瓶中，下层溶液中加乙酸乙酯10 mL重复提取一次，合并两次上清液。于55旋转蒸发至干，加甲酸-乙腈溶液4.0mL溶解残余物，备用。7.2 净化 MCX柱依次用甲醇、水各3 mL活化。取备用液过柱，用水3 mL、甲醇3 mL分别淋洗，挤干，氨水甲醇溶液6 mL洗脱，收集洗脱液，于60旋转蒸发至干，用甲酸-乙腈溶液1.0 mL溶解残余物，滤过，液相色谱-串联质谱测定。7.3 测定 7.3.1 色谱条件 a）色谱柱：C18（100 mm 3.0 mm，粒径 1.8 m），或相当者；b）柱温：30；c）进样量：10 L；d）流速：0.3 mL/min；e）流动相：A：乙腈；B：0.2甲酸溶液，梯度洗脱程序见表 1。表表1 梯度洗脱程序梯度洗脱程序 时间 min A：乙腈%B：0.2%甲酸溶液%0.0 10 90 3.0 30 70 4.0 30 70 4.5 80 20 5.5 80 20 5.6 10 90 7.3.2 质谱条件 a）离子源：电喷雾离子源；b）扫描方式：正离子扫描；c）检测方式：多反应监测；d）离子源温度：150；GB31660.62019 4 e）脱溶剂温度：500；f）毛细管电压：3.0 V；g）定性离子对、定量离子对及锥孔电压和碰撞能量见表 2。表 2 5 种 2受体激动剂类药物的质谱参数 被测物名称 定性离子对 m/z 定量离子对 m/z 锥孔电压 V 碰撞能量 eV 替扎尼定 254.144.1 254.144.1 38 22 254.1210.0 30 赛拉嗪 221.190.0 221.190.0 30 22 221.1164.0 26 溴莫尼定 292.2170.2 292.2212.3 40 35 292.2212.3 30 安普乐定 245.2174.2 245.2174.2 40 28 245.2209.2 20 可乐定 230.0160.0 230.0213.0 43 34 230.0213.0 24 7.4 测定法 7.4.1 定性测定 在同样测试条件下，试样液中 2-受体激动剂的保留时间与标准工作液中相应 2-受体激 动剂的保留时间之比，偏差在 5%以内，且检测到离子的相对丰度，应当与浓度相当的校正标准溶液相对丰度一致，其允许偏差应符合表 3 要求。表 3 定性确证时相对离子丰度的最大允许误差 相对离子丰度%50 2050 1020 10 允许的最大偏差%20 25 30 50 7.4.2 定量测定 取试样溶液和相应的标准工作液，按外标法以峰面积定量，标准工作液及试样溶液中的2受体激动剂类响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述条件下，2受体激动剂标准溶液特征离子质量色谱图见附录A。7.5 空白试验 除不加试料外，采用完全相同的步骤进行平行操作。8 结果计算和表述结果计算和表述 试料中待测药物的残留量按式（1）计算：GB31660.62019 5 mAVACXss（1）式中：X 供试试料中相应的2受体激动剂类药物残留量，单位为微克每千克（g/kg）；Cs标准溶液中相应的 2受体激动剂类药物浓度，单位为微克每升（g/L）；A试样溶液中相应的 2受体激动剂类药物的色谱峰面积；As 标准溶液中相应的 2受体激动剂类药物色谱峰面积；V 溶解残余物所用的溶液体积，单位为毫升（mL）；m供试试料质量，单位为克（g）；计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留两位有效数字。9 检测方法灵敏度、准确度和精密度检测方法灵敏度、准确度和精密度 9.1 灵敏度 本方法的检测限为0.5 g/kg，定量限为1 g/kg。9.2 准确度 本方法在1100 g/kg添加浓度水平上的回收率为60100。9.3 精密度 本方法批内相对标准偏差15%，批间相对标准偏差20%。GB31660.62019 6 附 录A（资料性附录）特征离子质量色谱图 图图 A.1 10 g/L2受体激动剂类药物标准溶液特征离子质量色谱图受体激动剂类药物标准溶液特征离子质量色谱图 1-赛拉嗪特征离子质量色谱图（221.190.0）2-可乐定特征离子质量色谱图（230.0213.0）3-替扎尼定特征离子质量色谱图（254.144.1）4-溴莫尼定特征离子质量色谱图（292.2212.3）5-安普乐定特征离子质量色谱图（245.2174.2）