归芪白术方联合奥沙利铂通过...路保护胃癌荷瘤小鼠肠道屏障_董焕成.pdf

第 29 卷第 5 期2023年 3 月中国实验方剂学杂志Chinese Journal of Experimental Traditional Medical FormulaeVol.29，No.5Mar.，2023归芪白术方联合奥沙利铂通过调节VIP/cAMP/PKA/AQPs信号通路保护胃癌荷瘤小鼠肠道屏障董焕成1，2，苏韫1，2，3，4*，龚红霞1，2，3，4，曹旺杰1，2，3，和建政1，2，3，刘永琦1，2，3，张晗1，2，曾元丁1，2，李从艺1，2，康倩1，2（1.甘肃中医药大学 基础医学院，兰州 730000；2.甘肃省高校重大疾病分子医学与中医药防治研究省级重点实验室，兰州 730000；3.甘肃省中医药防治慢性疾病重点实验室，兰州 730000；4.国家卫生健康委胃肠肿瘤诊治重点实验室，甘肃省人民医院，兰州 730000）摘要 目的：探讨归芪白术方联合奥沙利铂通过血管活性肠肽（VIP）/环磷酸腺苷（cAMP）/蛋白激酶 A（PKA）信号通路调控下游水通道蛋白 3（AQP3）和水通道蛋白 4（AQP4）从而保护胃癌荷瘤小鼠肠道屏障的作用。方法：将密度为1107个/mL 的胃癌细胞株 MFC 制成细胞悬液，经荷瘤小鼠右腋下接种细胞悬液 0.2 mL，构建胃癌荷瘤小鼠模型，造模成功后 将 小 鼠 随 机 分 为 5 组，模 型 组、奥 沙 利 铂 组（10 mgkg-1）、奥 沙 利 铂 加 归 芪 白 术 方 高、中、低 剂 量 组（17.68、8.84、4.42 gkg-1），每组 10 只，另外余 10 只作为空白组。各组小鼠经灌胃或腹腔注射中药、奥沙利铂或生理盐水，治疗 14 d。末次给药后，次日眼球取血分离血清并取其结肠样本。苏木素-伊红（HE）染色观察组织形态的变化。酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中 D-乳酸（D-LA）、二胺氧化酶（DAO）含量；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测各组小鼠结肠组织中 VIP、cAMP、PKA、AQP3 和 AQP4 mRNA 及蛋白的表达。结果：与正常组比较，模型组黏膜下层水肿，黏膜层中肠腺排列紊乱，杯状细胞缺失，可见大量炎性细胞浸润及绒毛脱落的现象。而各给药组均有不同程度的改善；与正常组比较，模型组血清中 DAO 和 D-LA 水平均显著上升（P0.01），与模型组比较，联合用药高剂量组 DAO 和 D-LA 水平及联合用药中剂量组 D-LA 水平均有所下降（P0.05，P0.01），与奥沙利铂组比较，联合用药高、中剂量组 D-LA 水平有所下降（P0.05），其余组 DAO 和 D-LA 表达水平也有所下降，但差异无统计学意义；与正常组比较，模型组小鼠的 VIP、cAMP、PKA、AQP3 和 AQP4 mRNA 及蛋白表达水平明显降低（P0.05，P0.01）；与模型组比较，各给药组小鼠的 VIP、cAMP、PKA、AQP3 和 AQP4 mRNA 及蛋白表达水平均有所升高，其中联合用药高剂量组 VIP、cAMP、PKA、AQP3 和 AQP4 mRNA 及蛋白表达水平明显升高（P0.05，P0.01），联合用药中剂量组 cAMP 蛋白表达水平升高（P0.05）；与奥沙利铂组比较，联合用药高剂量组 cAMP 蛋白表达水平明显升高（P0.05），其余组 mRNA 及蛋白表达也有所升高，但差异无统计学意义。结论：归芪白术方联合奥沙利铂通过 VIP/cAMP/PKA 信号通路调节 AQP3 和 AQP4 达到保护胃癌荷瘤小鼠肠道屏障的作用。关键词 归芪白术方；胃癌；肠道屏障损伤；血管活性肠肽（VIP）/环磷酸腺苷（cAMP）/蛋白激酶 A（PKA）信号通路；水通道蛋白 3（AQP3）；AQP4中图分类号 R2-0；R22；R285.5；R289；R33 文献标识码 A 文章编号 1005-9903（2023）05-0129-08doi 10.13422/ki.syfjx.20222103 网络出版地址 https:/ 2022-11-19 15:57:46收稿日期 2022-08-25基金项目 甘肃省“双一流”科研重点项目（GSSYLXM-05）；中国医学科学院中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目（2019PT320005）；甘肃省高效中（藏）药化学与质量研究重点实验室开放基金项目（zzy-2022-06）；甘肃省中医药研究中心专项（zyzx-2020-zx18）第一作者 董焕成，在读硕士，从事中西医结合防治肿瘤相关研究，E-mail：通信作者 *苏韫，硕士，教授，硕士生导师，从事中西医结合防治肿瘤基础研究，E-mail：129第 29 卷第 5 期2023年 3 月中国实验方剂学杂志Chinese Journal of Experimental Traditional Medical FormulaeVol.29，No.5Mar.，2023Guiqi Baizhu Prescription Combined with Oxaliplatin Protects Intestinal Barrier of Tumor-bearing Mice with Gastric Cancer by Regulation of VIP/cAMP/PKA/AQP Signaling PathwayDONG Huancheng1，2，SU Yun1，2，3，4*，GONG Hongxia1，2，3，4，CAO Wangjie1，2，3，HE Jianzheng1，2，3，LIU Yongqi1，2，3，ZHANG Han1，2，ZENG Yuanding1，2，LI Congyi1，2，KANG Qian1，2（1.School of Basic Medicine，Gansu University of Chinese Medicine，Lanzhou 730000，China；2.Provincial Key Laboratory of Molecular Medicine and Traditional Chinese Medicine（TCM）Prevention and Treatment of Major Diseases in Colleges and Universities of Gansu Province，Lanzhou 730000，China；3.Key Laboratory of TCM Prevention and Treatment of Chronic Diseases in Gansu Province，Lanzhou 730000，China；4.NHC Key Laboratory of Diagnosis and Therapy of Gastrointestinal Tumor，Gansu Provincial Hospital，Lanzhou 730000，China）Abstract Objective：To investigate the protective effect of Guiqi Baizhu prescription combined with oxaliplatin on the intestinal barrier of tumor-bearing mice with gastric cancer by regulating downstream aquaporin 3（AQP3）and aquaporin 4（AQP4）through the vasoactive intestinal peptide（VIP）/cyclic adenosine monophosphate（cAMP）/protein kinase A（PKA）signaling pathway.Method：The gastric cancer cell lines MFC with a density of 1107/mL were prepared into cell suspension.The tumor-bearing mouse model of gastric cancer was established by inoculating 0.2 mL cell suspension under the right axilla of mice.After successful modeling，mice were randomly divided into 5 groups，namely，model group，oxaliplatin group（10 mg kg1），and high，medium，and low-dose oxaliplatin+Guiqi Baizhu prescription groups（17.68，8.84，4.42 g kg1），with 10 mice in each group，and the remaining 10 mice were set as a blank group.Mice in each group were treated with Chinese medicine，oxaliplatin，or normal saline by gavage or intraperitoneal injection for 14 d.The next day after the last dose，blood was taken from the eyeball to separate serum and take colonic samples.Hematoxylin-eosin（HE）staining was used to observe the changes in tissue morphology.The content of D-lactate acid（D-LA）and diamine oxidase（DAO）in the serum was determined by enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）.The mRNA and protein expressions of VIP，cAMP，PKA，AQP3，and AQP4 were detected by Real-time quantitative polymerase chain reaction（Real-time PCR）and Western blot，respectively.Result：Compared with the blank group，the model group showed edema in the colonic submucosa，disordered arrangement of intestinal glands in the mucosal layer，loss of goblet cells，infiltration of inflammatory cells，and villus shedding.However，there were different degrees of improvement in each administration group.As compared with the blank group，the serum levels of DAO and D-LA in the model group were significantly increased（P0.01）.As compared with the model group，the levels of DAO and D-LA in the high-dose oxaliplatin+Guiqi Baizhu prescription group