11期·3249·收稿日期：2022-04-28基金项目：国家自然科学基金项目（31960698，31760732）；贵州省科学技术基金项目（黔科合基础〔2020〕1Y134）；贵州省地方家禽产业联合攻关项目（黔财农〔2020〕175号）通讯作者：段志强（1985-），https://orcid.org/0000-0002-0033-3919，博士，副教授，主要从事家禽抗病育种与疫病防控研究工作，E-mail：zqduan@gzu.edu.cn第一作者：邢静如（1997-），https://orcid.org/0000-0002-7532-2763，研究方向为动物遗传育种与繁殖，E-mail：3471475801@qq.com鸡ANP32家族蛋白亚细胞定位及其在免疫器官中的表达特征分析邢静如，石海英，王燕碧，赵采芹，唐宏，段志强*（贵州大学动物科学学院/高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室/贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室，贵州贵阳550025）摘要：【目的】明确鸡ANP32家族蛋白的亚细胞定位及在不同月龄鸡免疫器官中的表达特征，为后续研究鸡ANP32家族蛋白与新城疫病毒（NDV）复制及其致病性的关系打下基础。【方法】分别构建鸡ANP32家族基因重组真核表达载体，转染HEK-293T细胞后进行诱导表达，利用Westernblotting检测融合蛋白表达情况，并通过荧光观察分析融合蛋白亚细胞定位；同时采用实时荧光定量PCR检测ANP32家族基因在1~6月龄鸡免疫器官（脾脏、胸腺和法氏囊）中的表达水平。【结果】成功构建了鸡ANP32家族基因重组真核表达载体pEGFP-C1-ANP32A、pEGFP-C1-ANP32B和pEGFP-C1-ANP32E，转染HEK-293T细胞后得到正确表达，获得携带EGFP标签的融合蛋白EGFP-ANP32A、EGFP-ANP32B和EGFP-ANP32E，其分子量分别为60.0、57.9和56.9kD。亚细胞定位分析结果表明，融合蛋白EGFP-ANP32A、EGFP-ANP32B和EGFP-ANP32E的荧光与细胞核荧光完全重合，即主要定位在细胞核。实时荧光定量PCR检测结果表明，ANP32家族基因在1~6月龄鸡免疫器官（脾脏、胸腺和法氏囊）中均有表达，且在不同免疫器官中的表达水平存在差异；ANP32A和ANP32E基因在1~6月龄鸡免疫器官中呈先上升后下降的表达趋势，且在2月龄免疫器官中的相对表达量达峰值；ANP32B基因的表达则呈下降趋势，以1月龄鸡免疫器官中的相对表达量最高。【结论】鸡ANP32家族蛋白主要定位于细胞核，且ANP32家族基因在不同月龄鸡免疫器官中均有表达，但这3个基因具有独特的表达特征，其表达差异与免疫器官发育及免疫功能间的关系有待进一步探究。关键词：鸡；ANP32家族蛋白；亚细胞定位；免疫器官；组织表达特征中图分类号：S831.2文献...
