呼吸道感染患儿血浆中12种...因子的变化特征及其临床意义_郑璐.pdf

东南大学学报(医学版)J Southeast Univ(Med Sci Edi)2023，Feb;42(1):79-85 收稿日期2022-09-06修回日期2022-11-04 基金项目江苏省卫生健康委科研资助项目(M2021025);江苏省自然科学基金青年基金资助项目(BK20210081);徐州市重点研发计划(社会发展)资助项目(KC20110);江苏省双创博士资助项目(2020SC01);彭城英才医学青年后备人才项目(XWCHT20220006)作者简介郑璐(1985 )，女，江苏徐州人，主管技师，医学硕士。E-mail:xsdzhenglu163 com 通信作者陈永强E-mail:chenyongqiang_163163 com;牛国平E-mail:xz70707163 com 引文格式郑璐，裴蕴锋，张玥，等 呼吸道感染患儿血浆中 12 种细胞因子的变化特征及其临床意义J 东南大学学报(医学版)，2023，42(1):79-85 论著 呼吸道感染患儿血浆中 12 种细胞因子的变化特征及其临床意义郑璐1，裴蕴锋1，张玥1，程星1，谢凯1，顾锋1，牛国平1，陈永强1，2，3(1 徐州市中心医院 检验科，江苏 徐州221000;2 徐州市医学科学研究所 检验科，江苏 徐州221000;3 东南大学医学院附属徐州医院，江苏 徐州221000)摘要目的:探讨 12 种细胞因子(IFN-、IFN-、TNF-、IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70和 IL-17)在常见呼吸道感染(急性上呼吸道感染、支气管肺炎和急性化脓性扁桃体炎)患儿血浆中水平的变化特征及其临床意义。方法:收集 2020 年 4 月至 2022 年 7 月徐州市中心医院收治的诊断为呼吸道感染疾病的 271 例患儿，采用多重微球流式免疫荧光法检测外周血血浆和血清中 12 种细胞因子水平。结果:在呼吸道感染患儿血清中 IL-6、IL-8、TNF-和 IFN-的水平显著高于血浆(P 0 05)。IFN-、IFN-、IL-1、IL-6、IL-8 和 IL-10 在儿童急性上呼道感染组中的水平显著升高(P 0 05);IFN-、TNF-、IL-1、IL-6、IL-8 和IL-10 在支气管肺炎患儿中的水平也显著升高(P 0 05);而在急性化脓性扁桃体炎患儿中 12 种细胞因子水平变化差异无统计学意义(P 0 05)。结论:儿童常见呼吸道感染发病过程中外周血血浆和血清中特定细胞因子谱会发生改变，可作为判断上述疾病病情严重程度的临床免疫学监测指标。关键词多重微球流式免疫荧光法;细胞因子;呼吸道感染;儿童 中图分类号446 62 文献标志码A 文章编号1671-6264(2023)01-0079-07doi:10 3969/j issn 1671-6264 2023 01 011Changes and clinical significance of 12 cytokines in plasma of childrenwith respiratory tract infectionsZHENG Lu1，PEI Yunfeng1，ZHANG Yue1，CHENG Xing1，XIE Kai1，GU Feng1，NIU Guoping1，CHEN Yongqiang1，2，3(1 Department of Clinical Laboratory，Xuzhou Central Hospital，Xuzhou 221000，China;2 Department of Clinical Laboratory，Xuzhou Institute of Medical Science，Xuzhou 221000，China;3 Xuzhou Central Hospital Affiliated to MedicalSchool of Southeast University，Xuzhou 221000，China)AbstractObjective:To study the changes and clinical significance of plasma IFN-，IFN-，TNF-，IL-1，IL-2，IL-4，IL-5，IL-6，IL-8，IL-10，IL-12p70，and IL-17 in children with respiratory tract infections of acuteupper respiratory tract infection，bronchopneumonia，or acute suppurative tonsillitis Methods:A total of 271 pa-97tients with respiratory tract infections admitted to the Xuzhou Central Hospital from April 2020 to July 2022 were se-lected The levels of 12 cytokines were analyzed by multiplex microsphere flow immunofluorescence methodesults:In children with respiratory tract infections，the serum levels of IL-6，IL-8，TNF-，and IFN-werehigher than those in plasma(P 0 05)The plasma levels of IFN-，IFN-，IL-1，IL-6，IL-8 and IL-10 inchildren with acute upper respiratory tract infection group were significantly increased(P 0 05)In bronchopneu-monia group，the concentrations of plasma IFN-，TNF-，IL-1，IL-6，IL-8 and IL-10 were significantly higherthan those in the control group(P 0 05)However，the changes of 12 cytokines were not statistically significantin patients with acute suppurative tonsillitis(P 0 05)Conclusion:Our results indicate that specific plasma andserum cytokine profiles play important roles in the pathogenesis of respiratory tract infections，which may be an im-portant immunological monitoring index for identifying the severity of the disease Key wordsmultiplex microsphere flow immunofluorescence method;cytokines;respiratory tract infections;chil-dren细胞因子是主要由机体中固有免疫细胞和适应性免疫细胞合成、分泌的一类具有多种活性功能的小分子多肽或糖蛋白1。目前，细胞因子检测已用于临床患者免疫水平评估、疾病诊断和疗效监测，特别是在预警临床重症感染患者和嵌合抗原受体 T 细胞治疗患者发生细胞因子综合征方面具有重要的意义2-6。近年来细胞因子检测在临床中的应用越来越受到重视。呼吸道感染是临床儿科十分常见的疾病，主要以细菌、病毒及支原体感染为主，其发病过程中所引发的炎症反应会加剧对机体细胞造成损伤而导致疾病进一步恶化，严重威胁儿童的健康7-8。另外，血清中细胞因子水平高于血浆可能与凝血过程会刺激免疫细胞分泌细胞因子有关9。因此，本研究主要探讨在常见呼吸道感染(急性上呼吸道感染、支气管肺炎和急性化脓性扁桃体炎)患儿外周血血清和血浆中 12 种细胞因子(IFN-、IFN-、TNF-、IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70 和 IL-17)的表达水平以及临床表达特征，以期为今后临床及实验室规范细胞因子检测的标本类型和细胞因子组合提供实验依据。1资料与方法1 1一般资料选取 2020 年 4 月至 2022 年 7 月徐州市中心医院收治的经临床常规检查与专业医师确诊为呼吸道感染的 271 例患儿。其中急性上呼吸道感染 80 例(急性上呼吸道感染组)，男 43 例，女 37 例，年龄 0 5 10 岁;支气管肺炎 180 例(支气管肺炎组)，男 97 例，女 83例，年龄 0 5 10 岁;急性化脓性扁桃体炎11 例(急性化脓性扁桃体炎组)，男 6 例，女 5 例，年龄 0 5 10岁。所有入选患儿均符合呼吸道感染相关诊断标准，入选患儿均无肺结核、过敏及免疫功能低下疾病病史，无重要脏器疾病，无应用糖皮质激素和免疫调节剂。同期选择在该院儿童保健门诊体检的 80 例健康儿童作为对照组。各组儿童在年龄和性别上差异均无统计学意义(P 0 05)。本研究通过徐州市中心医院临床研究伦理委员会的审查与批准。1 2试剂与仪器CytoFLEX 流式细胞仪购自 Beckman Coulter 公司;12 种细胞因子检测试剂盒(IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、IL-17、IFN-、IFN-和 TNF-)购自青岛瑞斯凯尔生物科技有限公司，该检测试剂通过青岛市市场监督管理局第一类体外诊断试剂备案，各 项 性 能 指 标 均 符 合 规 定(最 低 检 测 限 2 44 pgml1，线性范围相关系数 r0 990，变异系数 CV15%，相对偏差 15%以内)，标本类型为血浆或血清。1 3标本采集所有入组患儿采用 EDTAK2抗凝管采集外周血2 ml，室温条件下以 1 000 g 离心 10 min，吸取上层血浆用于细胞因子检测;采用含有分离胶的促凝管抽取外周血收集血清标本。14多重微球流式免疫荧光技术检测分析外周血 12种细胞因子检测原理:利用两种粒径的聚苯乙烯微球和 APC的荧光强度编码出 12 个微球群，每群微球分别包被不同细胞因子的捕获抗体与生物素标记的细胞因子检测抗体和样本结合形成“三明治”复合物，再加入藻红蛋白标记的链霉亲和素(SA-PE)反应，最后通过流式细胞仪进行荧光发光强度检测。检测步骤:依次向流式管中加入 25 l 实验缓冲液、25 l 捕获微球抗体、25 l血浆或血清标本或预先配制好的标准品和 25 l检测抗体，室温避光振荡孵育 2 h;随后向反应管中加08东南大学学报(医学版)2023 年 2 月，42(1)入 25 l 的 SA-PE，继续室温避光振荡孵育 0 5 h 后向反应管中加入500 l 洗涤缓冲液，涡旋洗涤后以500 g离心 5 min，倾倒出洗涤液体并倒扣于吸水纸上;最后向管中加入 200 l 洗涤缓冲液涡旋重悬微球后上机检测;检测过程中，利用 FSC-Width 和 APC-A 两个参数将粘连的荧光微球剔除，然后通过 FSC-A 和 SSC-A两个参数设门圈出两个粒径的微球群，利用 APC-H 和PE-H 两参数分别检测标本中 12 种微球的平均荧光强度(图 1);最后将上述样本和标准品的检测结果利用BioLegend 分析软件分析出 12 种细胞因子的具体质量浓度并导出分析结果。图 1多重微球流式免疫荧光法检测与分析 12 种细胞因子的流程图Fig 1Schematic illustr