环状RNA_CCDC109...胞肺癌细胞增殖和迁移的影响_张叶.pdf

论著基础研究基金项目:辽宁省自然科学基金指导计划项目(20180550318)作者简介:张叶(1988 )，女，硕士，主治医师，研究方向:肺癌发生和发展的基础研究。通信作者:李霞(1963 )，女，本科，主任医师，研究方向:肺癌发生和发展的基础研究。环状 NA CCDC109B 对非小细胞肺癌细胞增殖和迁移的影响张叶李霞(辽宁省肿瘤医院放疗科，辽宁省沈阳市110042)【摘要】目的探讨环状 NA(circNA)CCDC109B(circCCDC109B)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达，以及其对 NSCLC 细胞增殖和迁移的影响。方法在 GEO 数据库中获取 NSCLC 相关数据集，应用 GEO2在线软件分析数据集中差异表达的 circNA，筛选倍数变化最为明显的 circNA 用于后续实验。收集 3 例NSCLC 患者的癌组织及癌旁组织标本，采用免疫荧光原位杂交检测 circCCDC109B 在两种组织中的表达情况。采用实时荧光定量 PC 检测 circCCDC109B 在 NSCLC 细胞系 A549 和 H1299 及人正常支气管上皮细胞系 16HBE中的表达水平。将 NSCLC 细胞系 A549 和 H1299 分别分为阴性对照小干扰 NA(siNA)转染组(siNC 组)、1#circCCDC109B siNA转染组(sicirc-1 组)和 2#circCCDC109B siNA 转染组(sicirc-2 组)，并给予转染相应的siNA。采用克隆形成实验和 Transwell 实验分别检测转染后各组 A549 细胞和 H1299 细胞的增殖和迁移能力。结果在 NSCLC 组织中表达上调的 circNA 有51 个，表达下调的 circNA 有4 个，其中 circCCDC109B 的倍数变化最为明显。circCCDC109B 在 NSCLC 癌组织中的表达水平高于癌旁组织，且在 NSCLC 细胞系 A549 和 H1299 中的表达水平均高于人支气管上皮细胞系16HBE(均 P 005)。下调 circCCDC109B 的表达后，A549 细胞和 H1299细胞的增殖和迁移能力均降低(均 P 0 05)。结论circCCDC109B 在 NSCLC 组织和细胞系中呈高表达，抑制circCCDC109B 的表达可以降低 A549 细胞和 H1299 细胞的增殖和迁移能力。【关键词】非小细胞肺癌;环状 NA;CCDC109B;细胞增殖;细胞迁移【中图分类号】342 2【文献标识码】A【文章编号】0253-4304(2022)23-2758-07DOI:10 11675/j issn 0253-4304 2022 23 11Effect of circular NA CCDC109B on cell proliferation and migration in non-small cell lung cancerZHANG Ye，LI Xia(Department of adiotherapy，Liaoning Cancer Hospital Institute，Shenyang 110042，Liaoning，China)【Abstract】ObjectiveTo explore the expression of circular NA(circNA)CCDC109B(circCCDC109B)in non-small cell lung cancer(NSCLC)and its effect on cell proliferation and migration of NSCLC MethodsThedataset related to NSCLC was obtained from the GEO database The differentially expressed circNAs in dataset wereanalyzed by the GEO2 online software，and circNAs with the most obvious fold change were screened forsubsequent experiment The samples of cancerous tissues and paracancerous tissues of 3 NSCLC cases were collectedThe expressions of circCCDC109B in the two aforesaid tissues were detected by the immunofluorescence in situ hybridizationThe real-time fluorescent quantitative PC was employed to detect circCCDC109B expressions in NSCLC cell linesA549 and H1299，and human normal bronchial epithelial cell line 16HBE NSCLC cell lines A549 and H1299 wereassigned to negative control small interfering NA(siNA)transfection group(the siNC group)，1#circCCDC109BsiNA transfection group(the sicirc-1 group)or 2#circCCDC109B siNA transfection group(the sicirc-2 group)，respectively，and the corresponding siNA was transfected The proliferation and migration of A549 and H1299 cellsafter transfection in various groups were detected by the clone formation assay and Transwell experiment，respectivelyesultsThere were 51 circNAs with up-regulated expression in NSCLC tissues，and 4 circNAs with down-regulatedexpression，among which the fold change of circCCDC109B was the most obvious The expression of circCCDC109B8572Guangxi Medical Journal，Dec 2022，Vol 44，No 23in NSCLC cancerous tissues was higher than that in paracancerous tissues，and the expressions of circCCDC109B inNSCLC cell lines of A549 and H1299 were higher than those in human bronchial epithelial cell line 16HBE(allP 0 05)After down-regulated expression of circCCDC109B，the proliferation and migration of A549 and H1299cells declined(all P 0 05)ConclusionThe expression of circCCDC109B is up-regulated in NSCLC tissues andcell lines，and the inhibition of circCCDC109B expression can decrease proliferation and migration of A549 andH1299 cells【Key words】Non-small cell lung cancer，Circular NA，CCDC109B，Cell proliferation，Cell migration肺癌是呼吸系统最常见也是预后最差的恶性肿瘤，2020 年肺癌死亡病例数在所有癌症中位居首位1。肺癌根据病理学分型可分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)两大类，其中 NSCLC 占比超过 85%2。NSCLC 发病早期的临床表现具有多样性，故其早期诊断率不高，很多患者在就诊时已处于肿瘤晚期，预后不佳3。NSCLC的快速生长和远处转移是治疗的难点4。因此，寻找与 NSCLC 发生和发展密切相关的新型分子生物学标志物并明确其在 NSCLC 中的作用，具有十分重要的意义。环状 NA(circular NA，circNA)是目前研究的热点，由于其特殊的闭合环状结构和超高的稳定性，circNA在 NSCLC 发生和发展过程中发挥了重要的调控作用 5。例如，circFGF1 是一种circNA，circFGF1 在NSCLC 组织和细胞系中表达增高，circFGF1可通过吸附 mi-381-3p 的方式促进 C-X-C 趋化因子受体4 诱导NSCLC 细胞迁移、侵袭、增殖和免疫逃逸 6。本研究通过 GEO2 在线软件分析 GEO 数据库中 NSCLC 相关数据集 GSE158695 以筛选差异表达的 circNA，并选取其中倍数变化(fold change，FC)最为明显的 circNA，即circCCDC109B(circBase ID:hsa_circ_0070659;探针 ID:ASCP004014)进行初步研究，探讨其对 NSCLC 细胞增殖和迁移的影响。1材料与方法11材料人正常支气管上皮细胞株 16HBE、人NSCLC 细胞株 A549 和 H1299 均购自中科院上海细胞库。气道上皮细胞基础培养基(美国 ATCC 公司，批号:CAT NO YB-H010)，DMEM 及胎牛血清(Gibco 公司，批号:CAT NO11966-025、CAT NO16140-089)，TIzol 试剂盒及 LipofectamineTM3000 试剂盒(Invitrogen 公司，批号:CAT NO15596-026、CAT NO L3000-008)，GoscriptTM反转录试剂盒及 GoTaq qPC 试剂盒(美国 Promega 公司，批号:CAT NO A5003、CAT NO A6102)。引物由生工生物工程(上海)股份有限公司设计并合成;特异性circCCDC109B小干扰 NA sicirc-1 和 sicirc-2，以及阴性对照小干扰 NA siNC 均由广州市锐博生物科技有限公司设计并合成;6-羟基荧光素琥珀酰亚胺酯标记的特异性 circCCDC109B 寡聚核苷酸探针由上海吉玛制药技术有限公司设计并合成。1 2实验方法1 2 1GEO2 在线软件分析 GEO 数据库中 NSCLC相关数据集:以 circNA 和 NSCLC 为关键词，从 GEO数据库(https:/www ncbi nlm nih gov/geo/)中搜索 NSCLC 相关数据集文件，选定数据集 GSE158695(https:/www ncbi nlm nih gov/geo/query/acc cgi?acc=GSE158695)作为分析对象。按照 GEO2 在线软件的说明分别设定癌旁组织组(n=3)和 NSCLC组(n=3)并进行在线分析，下载差异表达的 circNA的表达文件，再以校正 P 值 001 且|log2FC|15 为筛选标准，筛选差异