广东紫珠标准汤剂制备及质量评价_向燕芬.pdf

基金项目:广东省中医药局科研项目(No.20202267)。作者简介:向燕芬(1987)，女，汉族，本科，副主任中药师，研究方向为药物分析与质量评价。E mail:273043585 通信作者:甘国兴(1984)，男，汉族，硕士，副主任中药师，研究方向为中药民族药研究与开发。E mail:guox-广东紫珠标准汤剂制备及质量评价向燕芬1，2邓桂珠1，2甘国兴1，2*卢泳1，2龙国斌1，2朱卫星1，21 广东省清远市中医院，广东清远511500;2 广东省鲜药民族医药工程技术研究中心，广东清远511500【摘要】目的:制备广东紫珠标准汤剂并评价其质量。方法:收集 10 批广东紫珠药材制备标准汤剂，测定标准汤剂的 pH 和出膏率，建立标准汤剂的指纹图谱并采用化学计量学方法进行评价。结果:10 批广东紫珠标准汤剂的 pH 为 4.45.3，出膏率为 11.9%26.1%，指纹图谱有 10 个共有峰，且 10 批广东紫珠标准汤剂指纹图谱与对照指纹图谱的相似度均大于 0.90。结论:制备的广东紫珠标准汤剂具有一定的代表性，建立的指纹图谱方法可行。【关键词】广东紫珠;标准汤剂;指纹图谱【中图分类号】284.1【文献标志码】A【文章编号】1007 8517(2023)02 0024 05Preparation and Quality Evaluation of Standard Decoction of Callicarpa KwangtungensisXIANG Yanfen1，2DENG Guizhu1，2GAN Guoxing1，2*LU Yong1，2LONG Guobin1，2ZHU Weixing1，21 Qingyuan Hospital of Traditional Chinese Medicine，Qingyuan 511500，China;2 Engineering Technology esearch Center of Fresh Medicine and National Medicineof Guangdong Province，Qingyuan 511500，ChinaAbstract:Objective To prepare standard decoction of Callicarpa kwangtungensis and evaluate its quality Method 10 batches ofCallicarpa kwangtungensis were collected and prepared for standard decoctionsThe pH and extraction rate were determinedThestandard decoction fingerprint was established with HPLC and evaluated with chemo metrics method esult The pH in 10 batches ofCallicarpa kwangtungensis standard decoction were from 4.4 to 5.3，the extraction rates were from 11.9%to 26.1%10 peaks wereidentified in the HPLC fingerprint，and the similarity was higher than 0.90 between the fingerprints of 10 batches of standard decoctionand the control finger print Conclusion The Callicarpa kwangtungensis standard decoction was represent ative，and the fingerprintmethod was feasibleKey words:Callicarpa Kwangtungensis;Standard Decoction;Fingerprint广东紫珠是马鞭草科植物广东紫珠 Callicarpakwangtungensis Chun 的干燥茎枝和叶，具有收敛止血、散瘀、清热解毒的功效 1。目前有关于广东紫珠化学成分、药理作用、质量标准等方面的研究报道 2 7，但是没有关于广东紫珠标准汤剂的研究报道。本研究制备广东紫珠标准汤剂并评价其质量，为广东紫珠不同的饮片用药形式之间剂量换算提供参考，提高临床用药的准确性和疗效的一致性。1材料1.1仪器设备e2695 高效液相色谱仪(美国沃特世公司)，XS205 型电子分析天平(瑞士梅特勒 托利多公司)，FE28 型 pH 计(上海梅特勒 托利多仪器有限公司)，E 2000A 旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)，电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)，等。1.2试剂与药材连翘酯苷 B 对照品(成都曼斯特生 物 科 技 有 限 公 司，纯 度 98.46%，批 号:MUST 20111105)，色谱纯磷酸为上海麦克林生化科技有限公司产品;色谱纯乙腈及分析纯甲醇均为广州化学试剂厂产品;超纯水(广州屈臣氏食品饮料有限公司);广东紫珠药材在集贸市场42中国民族民间医药2023 年1 月第32 卷第2 期Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy，2023，Vol.32，No.2收集。2方法与结果2.1广东紫珠标准汤剂制备收集 10 批广东紫珠药材，参考 中药饮片标准汤剂研究策略8 的方法，分别称取广东紫珠药材 100 g，置于 3000 mL圆底烧瓶中，加入 10 倍量水，浸泡 30 min，加热回流提取 30 min，趁热用 200 目筛过滤，药渣加 8倍量水，加热回流提取 20 min，趁热用200 目筛过滤，合并 2 次滤液，旋转蒸发仪 60 减压浓缩至500 mL，即得 0.2 gmL1的广东紫珠标准汤剂。2.2广东紫珠标准汤剂 pH 测定采用 pH 计测定10 批广东紫珠标准汤剂的 pH，重复 3 次，取平均值为广东紫珠标准汤剂的 pH。10 批广东紫珠标准汤剂的 pH 为 4.4 5.3，平均 pH 为 4.6。结果见表 1。2.3广东紫珠标准汤剂出膏率精密量取广东紫珠标准汤剂 25 mL，置于已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，置于电热鼓风干燥箱中105 干燥3 h，移至干燥器中，冷却 30 min，迅速称定重量，计算广东紫珠标准汤剂的出膏率，重复 3 次，取平均值为广东紫珠标准汤剂的出膏率。10 批广东紫珠标准汤剂的出膏率为 11.9%26.1%，平均出膏率为 21.8%。结果见表 1。表 1广东紫珠标准汤剂 pH 和出膏率样品pH 值出膏率/%广西 14.525.5广西 24.424.4广西 34.525.1广西 44.426.1广西 54.425.2广西 64.622.6广西 74.524.7广东 15.213.5广东 25.311.9广东 34.618.52.4广东紫珠标准汤剂指纹图谱建立及评价2.4.1色谱条件Phenomenex Gemini C18色谱柱(4.6 mm 250 mm，5 m);乙腈为流动相 A，0.1%磷酸溶液为流动相 B，梯度洗脱，0 35min，5%A，95%B;35 40 min，5%9%A，95%91%B;40 55 min，9%10%A，91%90%B;55 80 min，10%A，90%B;80 81 min，10%11A，90%89%B;81 91 min，11%A，89%B;91 92 min，11%10%A，89%90B;92 130 min，10%A，90%B;130 131 min，10%12%A，90%88%B;131 151 min，12%13%A，88%87%B;151 175 min，13%14%A，87%86%B;柱温 25，流速1.0 mLmin1，检测波长 332 nm，进样量 5 L。2.4.2对照品溶液制备取连翘酯苷 B 对照品适量，精密称定，加 50%甲醇制成浓度 54.153 gmL1，过 0.45 m 的微孔滤膜，进样量 5 L。2.4.3供试品溶液制备取标准汤剂 10 mL，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇20 mL，称定重量，超声 30 min，放冷，再称定重量，用 50%甲醇补 足 减 失 的 重 量，摇 匀，滤 过，取 续 滤 液，即得。2.4.4精密度试验取同一供试品溶液，按2.4.1 项下色谱条件连续进样 6 次，记录色谱图，结果各色谱峰相对保留时间的 SD 均 1.0%，相对峰面积的 SD 均 4.5%，表明仪器具有良好的精密度。2.4.5稳定性试验取同一供试品溶液，按2.4.1 项下色谱条件分别在 0 h、4 h、8 h、12 h、20 h、24 h 测定，记录色谱图，结果表明各色谱峰相对保留时间的 SD 均 1.0%，相对峰面积的SD 均 4.5%，表明供试品溶液在 24 h 内稳定。2.4.6重复性试验取同一标准汤剂样品 6 份，按 2.4.3 项下方法制备供试品溶液，2.4.1 项下色谱条件测定，结果各色谱峰相保留时间的 SD 均1.1%，相对峰面积的 SD 均 4.8%，表明该方法的重复性良好。2.4.7指纹图谱分析将 10 批广东紫珠标准汤剂供试品按 2.4.1 项下色谱条件进样，记录色谱图。利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件”(2012 版)，采用中位数法和多点矫正法，时间宽度 0.9 min，生成相应的对照指纹图谱 1，其中共有峰 10 个，通过对照品指认出 8 号峰为连翘酯苷B。相似度分析结果表明，10 批广东紫珠标准汤剂与对照指纹图谱相似度均大于 0.90，符合标准汤剂指纹图谱相似度要求(大于 0.90)。结果见表2，如图 1。52中国民族民间医药2023 年1 月第32 卷第2 期Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy，2023，Vol.32，No.2表 210 批广东紫珠标准汤剂指纹图谱相似度GX1GX2GX3GX4GX5GX6GX7GD1GD2GD3GX11.0000.9980.9980.9980.9980.9980.9970.9090.9200.9500.998GX20.9981.0001.0001.0001.0001.0001.0000.9080.9180.9480.999GX30.9981.0001.0001.0001.0001.0001.0000.9090.9180.9501.000GX40.9981.0001.0001.0001.0001.0001.0000.9080.9180.9491.000GX50.9981.0001.0001.0001.0001.0001.0000.9100.9190.9460.999GX60.9981.0001.0001.0001.0001.0001.0000.9090.9180.9501.000GX70.9971.0001.0001.0001.0001.0001.0000.9070.9170.9480.999GD10.9090.9080.9090.9080.9100.9090.9071.0000.9970.8670.918GD20.9200.9180.9180.9180.9190.9180.9170.9971.0000.8750.927GD30.9500.9480.9500.9490.9460.9500.9480.8670.8751.0000.953A.广东紫珠标准汤剂 HPLC 指纹图谱;B.连翘酯苷 B 对照品色谱图;C.对照指纹图谱图 1HPLC 指纹图谱2.4.8指纹图谱聚类分析(HCA)采用 SPSS26.0 数据分析软件，对10 批广东紫珠标准汤剂共有峰的相对峰面积进行系统聚类，采用