固相萃取结合LC_MS-MS法测定奶粉中四溴双酚A_綦艳.pdf

食品工业 2023 年第44卷第 2 期 324 分析检测固相萃取结合LC/MS-MS法测定奶粉中四溴双酚A綦艳，李锦清*，李聪，黄翠莉广东产品质量监督检验研究院（顺德 528300）摘要建立固相萃取(solid phase extraction,SPE)结合液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography tandem mass,LC-MS/MS)测定奶粉中四溴双酚A的分析方法。样品用碱性水溶液溶解,以乙腈提取和沉淀蛋白,提取液经水稀释后用磷酸调节pH5,用C18固相萃取柱净化。以甲醇和水为流动相,梯度洗脱,C18色谱柱分离,电喷雾(electrospray ionization,ESI)负离子多反应监测模式(multi-reaction monitoring mode,MRM)进行检测,采用基质匹配-同位素内标法定量。四溴双酚A在0.2150 g/L范围内呈良好线性关系(linear correlation coefficient,r)0.995;方法检出限(limit of detection,SLOD)为0.5 g/kg,方法定量限(limit of quantification,SLOQ)为1.5 g/kg;添加水平为1.5,3.0和15.0 g/kg,每个浓度水平平行测定6次,平均加标回收率为92.3%100.2%,相对标准偏(relative standard deviations,SRSD)为6.8%8.3%。该方法前处理简单、回收率高、准确可靠,适用于奶粉中四溴双酚A的定性定量检测。关键词固相萃取;液相色谱-串联质谱法;奶粉;四溴双酚ADetermination of Tetrabromobisphenol A in Milk Powder by Solid Phase Extraction Combined With Liquid Chromatography Tandem Mass SpectrometryQI Yan,LI Jinqing*,LI Cong,HUANG CuiliGuangdong Testing Institute of Product Quality Supervision(Shunde 528300)Abstract Aim to establish a method for the determination of tetrabromobisphenol A(TBBPA)in milk powder by solid phase extraction combined with liquid chromatography tandem mass(LC-MS/MS).The sample was dissolved in alkaline solution,and then extracted and precipitated with acetonitrile.The extract solution was diluted with water and adjusted to pH5 with phosphoric acid,and then purified by C18 solid phase extraction(SPE)column.The analyte was separated on C18 column using methanol and water as mobile phase for gradient elution.The samples were detected with negative electrospray ionization under multiple reaction monition mode,and quantified with matrix matching-isotope internal standard method.The calibration curve of TBBPA showed good linear relationships in the range of 0.2-150 g/L with the linear correlation coefficient not less than 0.995.The limits of detection and quantitation of the method were 0.5 g/kg and 1.5 g/kg,respectively.The average recoveries were in the range of 92.3%-100.2%at three spiked concentration levels of 1.5,3.0 and 15.0 g/kg.Each concentration level was measured 6 times(n=6).The relative standard deviations were in the range of 6.8%-8.3%.The method was simple,accurate and reliable,which was suitable for the qualitative and quantitative detection of tetrabromobisphenol A in milk powder.Keywords solid phase extraction;liquid chromatography tandem mass(LC-MS/MS);milk powder;tetrabromobisphenol A(TBBPA)四溴双酚A（tetrabromobisphenol A，TBBPA）是一种常见的溴类阻燃剂，被广泛应用于塑料、橡胶、纺织品、电子电气等工业产品中。工业产品释放的TBBPA容易通过水体、土壤等途径进入环境中1，通essential oil extracted at 130 degrees C using steam distillation methodJ.Spectrochim Acta A Mol Biomol Spectrosc,2017,182:168-174.17 DAFERERA D J,TARANTILIS P A,POLISSIOU M G.Characterization of essential oils from lamiaceae species by Fourier transform Raman spectroscopyJ.Journal of Agricultural and Food Chemistry,2002,50:5503-5507.18 SCHULZ H,BARANSKA M.Identification and quantification of valuable plant substances by IR and Raman spectroscopyJ.Vibrational Spectroscopy,2007,43:13-25.19 BARANSKA M,SCHULZ H,KRUGER H,et al.Chemotaxonomy of aromatic plants of the genus Origanum via vibrational spectroscopyJ.Anal Bioanal Chem,2005,381:1241-1247.20 BARANSKA M,SCHULZ H,REITZENSTEIN S,et al.Vibrational spectroscopic studies to acquire a quality control method of Eucalyptus essential oilsJ.Biopolymers,2005,78:237-248.食品工业 2023 年第44卷第 2 期 325 分析检测过迁移、扩散污染食物。据报道，环境样品2、动物源性食品3、人体内4均检出TBBPA。TBBPA具有生物蓄积性和持久性，可能会危害人类健康，据研究报道5-6，TBBPA能干扰人体甲状腺激素分泌，欧盟将其列为优先控制化学品之一，并开展危险性评估7。关于TBBPA的研究主要集中在环境水体8-9、土壤10-12、塑料包装材料13、电气产品14、食品15-18等方面，检测方法有气相色谱-质谱联用法、液相色谱-串联质谱法19、液相色谱法等。TBBPA极性较强20，在毛细管色谱柱中保留时间很短，GC-MS法测定前需衍生化，步骤繁琐。液相色谱法灵敏度较低，不适合痕量TBBPA检测。LC-MS/MS法无需衍生化，灵敏度高、结果准确，成为TBBPA检测的主要手段。牛奶经加工制成奶粉后，可能存在的TBBPA被浓缩富集，危害性增大。奶粉中TBBPA检测的标准或文献尚未见诸报道。食品中TBBPA的检测标准仅有DBS 42/0042014食品安全地方标准 动物性食品中六溴环十二烷和四溴双酚A的测定，其前处理方法采用索氏提取和自制硅胶柱净化，步骤繁琐、耗时长、有机溶剂消耗较大。试验旨在建立固相萃取结合LC-MS/MS法测定奶粉中TBBPA的分析方法，具有操作简单、有机溶剂消耗少，回收率高、准确可靠等优点。1材料与方法1.1材料与试剂乙腈（色谱纯，美国Fisher公司）；乙酸铵（色谱纯，上海安谱实验科技股份有限公司）；甲醇、乙酸乙酯（色谱纯，美国Tedia公司）；氢氧化钠（分析纯，广州化学试剂厂）；水（符合GB/T 66822008分析实验室用水规格和试验方法要求的一级水）；C18固相萃取柱（未封尾，规格1 g/12 mL，月旭科技有限公司）；PTFE-Q针式滤头（规格0.22 m/13 mm，美国Agilent公司）；四溴双酚A标准品（纯度 99.4%，德国Dr.Ehrenstorfer公司）；四溴双酚A-D4（TBBPA-D4，纯度98%，加拿大C/D/N ISOTopes公司）。奶粉样品（包括婴幼儿配方奶粉1段15批次，2段10批次，3段10批次，中老年奶粉10批次；市售，随机购买）。1.2仪器与设备液相色谱-串联质谱仪（Exion LC AD/SCIEX Triple Quad 4500，美国AB SCIEX公司）；艾本德高速冷冻离心机（5804R，德国eppendorf公司）；多位涡旋振荡器（MV-3000，广东晋元科技有限公司）；全自动智能氮吹仪（FV64，广州得泰仪器科技有限公司）；去离子水发生器（Milli-Q，美国Millipore公司）；电子天平（JJ500Y，精度0.01 g，福州华志科学仪器有限公司）；电子天平MS105DU，精度0.1 mg，梅特勒托利多科技（中国）有限公司；超声波清洗机（JP-C300，广州市吉普超声波电子设备有限公司）；pH计（雷磁PHS-3C，精度0.01，上海仪电科学仪器股份有限公司）。1.3试验方法1.3.1标准溶液的制备精密称取四溴双酚A、四溴双酚A-D4各10 mg（精确至0.1 mg）分别置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，配得质量浓度均为100 mg/L的四溴双酚A、四溴双酚A-D4标准品储备液，于-20 保存。精密吸取0.1 mL四溴双酚A、四溴双酚A-D4标准品储备液，分别置于10 mL容量瓶中，用甲醇稀释定容，配得质量浓度均为1 mg/L标准品中间液。精密吸取1 mL四溴双酚A、四溴双酚A-D4标准品中间液，分别置于10 mL容量瓶中，用甲醇稀释，配得质量浓度均为0.1 mg/L标准品使用液。精密吸取适量四溴双酚A标准品中间液或标准品使用液及四溴双酚A-D4标准品使用液，用空白奶粉基质提取液稀释，配成四溴双酚A-D4质量浓度均为5 g/L及质量浓度范围为0.2150 g/L的四溴双酚A标准工作曲线，用LC-MS/MS测定，以基质匹配-同位数内标标准工作曲线法定量。1.3.2样品前处理1.3.