黄芪提取物对DR模型大鼠眼...L-6和VEGF水平的影响_仪立群.pdf

J 中国新药杂志，2020;29(19):2178-84.9熊婉媛，侯怀晶，于晓辉，等.肝细胞癌的发生、发展与 p38MAPK信号通路关系的研究进展 J 肝脏，2018;23(8):736-9.10Wang YC，Hu BH，Zhang WW，et al Linc00601 upregulation pro-motes hepatocellular carcinoma development by activating MAPKsignaling pathway J Eur ev Med Pharmacol Sci，2020;24(11):6039-45.11Lin B，He H，Zhang Q，et al Long non-coding NA00844 inhibitsMAPK signaling to suppress the progression of hepatocellular carci-noma by targeting AZGP1 J Ann Transl Med，2020;8(21):1365.12Llovet JM，Montal，Sia D，et al Molecular therapies and precisionmedicine for hepatocellular carcinomaJ Nat ev Clin Oncol，2018;15(10):599-616.13朱思聪，谭文亮，商昌珍，等.分子靶向药物治疗肝细胞癌的临床应用进展 J 中华实验外科杂志，2018;35(9):1775-7.14Chi Y，Wang D，Wang J，et al Long non-coding NA in the patho-genesis of cancers J Cells，2019;8(9):1015.15Liu J，Wang WM，Zhang XL，et al Effect of downregulated lncNANBAT1 on the biological behavior of glioblastoma cells J Eur evMed Pharmacol Sci，2018;22(9):2715-22.16Xue S，Wang S，Li J，et al LncNA NBAT1 suppresses cell prolifer-ation and migration via mi-346/GSK-3 axis in renal carcinomaJ IUBMB Life，2019;71(11):1720-8.17Lei T，Lv ZY，Fu JF，et al LncNA NBAT-1 is down-regulated inlung cancer and influences cell proliferation，apoptosis and cell cycleJ Eur ev Med Pharmacol Sci，2018;22(7):1958-62.18Zhang Q，Cheng S，Cao L，et al LINC00978 promotes hepatocellularcarcinoma carcinogenesis partly via activating the MAPK/EK path-way J Biosci ep，2020;40(3):BS20192790.19Sun J，Guo Y，Bie B，et al Silencing of long noncoding NA HOXD-AS1 inhibits proliferation，cell cycle progression，migration and inva-sion of hepatocellular carcinoma cells through MEK/EK pathwayJ J Cell Biochem，2020;121(1):443-57.20Duan，Li C，Wang F，et al The long noncoding NA ZFAS1 po-tentiates the development of hepatocellular carcinoma via the mi-croNA-624/MDK/EK/JNK/P38 signaling pathwayJ OncoTargets Ther，2020;13:4431-44.21Yan CS，JiangY，Wan YC，et al Long noncoding NA NBAT-1 sup-presses tumorigenesis and predicts favorable prognosis in ovariancancer J Onco Targets Ther，2017;6(10):1993-2002.2022-03-15 修回(编辑张艳利)黄芪提取物对 D 模型大鼠眼部血流动力学的干预效果及对血清IL-6 和 VEGF 水平的影响仪立群王淼林琳仲苏鄂王庆海(三峡大学第二人民医院眼科，湖北宜昌443000)摘要 目的研究黄芪提取物对糖尿病视网膜病变(D)模型大鼠眼部血流动力学的干预效果及对血清中白细胞介素(IL)-6、血管内皮生长因子(VEGF)水平的影响。方法选取 50 只健康雄性 SD 大鼠，随机选取 10 只为正常组，其于 40只制作 D 模型，全部建模成功，随机分为模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组各 10 只。正常组及模型组给予生理盐水灌胃，低剂量组、中剂量组、高剂量组分别使用 40、60、80 mg/kg 黄芪提取物溶液进行灌胃处理。取各组大鼠视网膜组织，进行HE 染色观察，对总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白固醇(HDL-C)、IL-6、VEGF、空腹血糖、收缩期峰值血流速度(Max)、舒张末期流速(Min)、平均血流速度(TAMx)进行检测。结果高剂量组 TC、TG、LDL-C、IL-6、VEGF、空腹血糖水平明显低于低剂量组、中剂量组，HDL-C，Max、Min、TAMx 水平明显高于低剂量组，中剂量组(均 P0.001)。结论黄芪提取物对 D 模型大鼠进行干预，能够有效改善大鼠血脂，降低血糖，通过调控 IL-6、VEGF 水平及视网膜中央动脉(CA)血流动力学，从而改善视网膜的超微结构，效果显著。关键词 黄芪提取物;糖尿病视网膜病变;空腹血糖中图分类号 587.2 文献标识码 A 文章编号 1005-9202(2023)03-0675-05;doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2023.03.043基金项目:宜昌市医疗卫生科研项目(A18-301-21)通信作者:王庆海(1968-)，男，硕士，硕士生导师，主任医师，主要从事心血管相关研究。第一作者:仪立群(1969-)，女，副主任医师，主要从事眼底病研究。糖尿病(DM)患者人数在我国截止到 2010 年以达到九千余万，每年呈上升趋势。DM 属于慢性全身疾病，2 型糖尿病(T2DM)患者占 DM 患者人数的 95%，患者的身体健康及生存质量已经严重受到威胁1。糖尿病视网膜病变(D)属于一种慢性低度炎症病变，是由 DM 引起的视网膜血管病变，导致DM 患者丧失视力的主要原因2。有学者研究表示，D 严重的可导致患者失明，视网膜微血管系统损伤是由于糖代谢紊乱，导致视网膜血管周细胞凋亡、血管舒缩调节功能失常及血管基底膜增厚等3。D 患者在早期并无明显症状，由于长期病变累积则会出现黄斑水肿、眼底出血、异常微血管瘤等，最终视力下降，严重者甚至失明4。本研究黄芪提取物对 D 模型大鼠的干预效果及对白细胞介576仪立群等黄芪提取物对 D 模型大鼠眼部血流动力学的干预效果及对血清 IL-6 和 VEGF 水平的影响第 3 期素(IL)-6、血管内皮生长因子(VEGF)水平的影响。1材料与方法1.1材料研究动物:选取 50 只健康雄性 SD 大鼠，8 12 个月，平均(10.61.2)个月，体重 350 480 g，平均(420.620.4)g。由北京科奥协力饲料有限公司提供，合格证号:京动(2000)第 015 号，所有大鼠放于无病原菌的干净笼子里喂养，饲养温度维持在(23.01.6)，饮用水和食物均进行高温及高压消毒。本研究获医院伦理委员会批准。主要药物及主要仪器:黄芪(甘肃野生黄芪)，链脲佐菌素(STZ，上海颖心实验设备有限公司)，免疫比浊法试剂盒(贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司)，酶联免疫试剂盒(北京维德维康生物技术有限公司)，血糖检测仪(德国罗氏)，兔抗大鼠 IL-6、VEGF 抗体(Sigma 公司)，小鼠抗大鼠总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)抗体(Dako 公司)，兔抗小鼠低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)抗体(Gibco 公司)。电子天平、pH 计(上海京孚仪器有限公司);蛋白垂直电泳仪(北京六一仪器厂);微量移液器(广州雷得生物技术有限公司);超纯水仪(中天光学仪器有限责任公司);磁力搅拌器(其林贝尔仪器制造有限公司);多功能酶标仪(Bio-rad 公司);离心机(Sigma 公司);80冰箱(日本三洋公司);紫外分光光度计(莫赛飞公司);恒温水浴箱(上海一凯仪器设备有限公司)。1.2方法1.2.1黄芪提取物制作称取黄芪片 20 g，加入100 ml 蒸馏水，冷浸过夜后，进行加热煮沸 30 min，倒出清液，使用小火进行浓缩到 10 ml，制成含生药2 g/ml 的药液，使用滤纸将凉后的药液过滤，使用一次性针头滤器过滤，分装灭菌放入安瓿瓶后放入冰箱备用。1.2.2D 模型建立选取 40 只大鼠制作模型，参考杨钦钦等5研究实验中 D 大鼠模型的建立方法并进行适当改动，建立 D 模型，均以高脂饲料喂养6 w 后禁止饮食饮水 12 h，建立 D 大鼠模型使用STZ 60 mg/kg 进行腹腔注射。3 d 后取大鼠尾尖血，测血糖16.7 mmol/L 则 DM 大鼠造模成功。将 DM 大鼠继续进行高脂饲料饲养 1 个月后以普通饲料喂养，DM 大鼠眼底有明显视网膜出血及渗出者为 D 大鼠建模成功。1.2.3用药及分组将建模成功的 40 只大鼠随机分为模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，各组10 只。低剂量组、中剂量组、高剂量组大鼠分别使用 40、60、80 mg/kg 黄芪提取物溶液进行灌胃处理，1 次/d，连续干预 2 w。正常组及模型组给予同等体积的无菌生理盐水灌胃治疗。治疗期间大鼠均自由饮食。1.2.4视网膜组织观察使用 10%水合氯醛对大鼠进行麻醉处理后处死，解剖快速取出新鲜大鼠双眼视网膜，放置于甲醛溶液中，固定24 h，常规脱水、透明、石蜡包埋，间距 5 m 做连续切片。将切片烤干后进行脱蜡处理，之后顺序置入 100%、95%、80%、75%浓度的酒精中各复水 3 min。使用苏木素染色 15 min 后清洗 3 次，使用盐酸-酒精分化处理30 s，再次清洗两次，使用 1%氨水泛蓝，充分清洗之后使用 1%伊红染色，使用酒精进行脱水处理后进行脱蜡处理，封片后使用显微镜进行观察。1.2.5血脂检测采取禁食 12 h 后的大鼠腹静脉抽取静脉血液 3 ml，离心后取血清，采用 CHOD-PAP 法检测 TC 水平，GPO-PAP 法检测 TG 水平，检测过程分别按照总胆固醇单试剂测定试剂盒、TG检测试剂盒操作说明书进行。采用直接法-过氧化物酶 清 除 法 检 测 LDL-C、HDL-C。酶 标 仪 预 热0.5 h，波长调节至 240 nm，将检测工作液 37 反应5 min，提取已采集的血清样本，加入 190 l 工作液，在酶标仪上振动 5 s 开始计时，记录 240 nm下初始吸光值 A1 和 1 min 后的吸光值 A2。计算公式 A=A1A2。1.2.6IL-6、VEGF取各组大鼠血清标本，使用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测 IL-6、VEGF 水平:对抗原进行