寒湿困脾证动物模型研究进展_孟岩.pdf

48第25 卷 第 1 期 2023 年 1 月辽 宁 中 医 药 大 学 学 报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol.25 No.1 Jan.，2023寒湿困脾证动物模型研究进展孟岩1，吴威2，李威莹1，史晨旭1，刘莲宣1，丁子峻1，杨关林1，张会永3（1.辽宁中医药大学中医脏象理论及应用国家教育部重点实验室，辽宁 沈阳 110847；2.珠海科技学院，广东 珠海 519041；3.辽宁中医药大学附属医院，辽宁 沈阳 110032）基金项目：国家自然科学基金青年科学基金项目（81603513）；广东省自然科学基金面上项目（2021A1515011485）；沈阳市中青年科技创新人 才支持计划项目（RC190281）作者简介：孟岩（1995-），女，辽宁盘锦人，硕士在读，研究方向：经典方剂的临床应用与实验研究，中医药疗效评价方法。通讯作者：张会永（1983-），男，河北保定人，教授、主任中医师，硕士研究生导师，研究方向：中医古典方剂的文献整理研究与经典方剂的临床 应用与实验研究。吴威（1983-），女，辽宁沈阳人，教授，博士，研究方向：基于中医理论的传统中药和方剂药理学研究与中药及天然药物的活性化学成 分研究。摘要：寒湿困脾证因寒湿或阴寒内蕴，困阻脾阳所致，是常见的中医证候类型。建立科学规范的中医证候模型对中医研究具有重要意义。目前寒湿困脾证造模方法多从外因、内因入手或从病证结合角度出发进行造模，寒湿困脾证动物模型造模方法中的外感寒湿、苦寒泻下、饮食不节、劳倦过度等具有操作简单、可控性强等特点，但并不符合临床多因素致病机制，因此多因素造模法更加符合临床实际。关于模型的评价多采用动物的宏观体征、微观指标及反证方剂来验证模型是否成功。该文旨在对寒湿困脾证动物模型的造模方法及模型评价方法做出分析与探讨。关键词：寒湿困脾证；动物模型；模型评价；中医证候中图分类号：R332 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2023)01-0048-05Research Progress of Animal Model of Cold Dampness Trapped Spleen SyndromeMENG Yan1，WU Wei2，LI Weiying1，SHI Chenxu1，LIU Lianxuan1，DING Zijun1，YANG Guanlin1，ZHANG Huiyong3（1.State Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Imaging Theory and Application，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110847，Liaoning，China；2.Zhuhai University of Science and Technology，Zhuhai 519041，Guangdong，China；3.Affiliated Hospital of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110032，Liaoning，China）Abstract：The syndrome of cold dampness and stagnation of spleen is caused by cold dampness or Yin and cold accumulation，which is a common syndrome type of traditional Chinese medicine.Establishing a scientific and standardized TCM syndrome model is of great significance to the research of TCM.At present，the modeling methods of cold dampness trapped spleen syndrome mostly start with external and internal causes or from the perspective of the combination of disease and syndrome.The animal model of cold dampness trapped spleen syndrome has the characteristics of simple operation and strong controllability，such as exogenous cold dampness，bitter cold diarrhea，improper diet and excessive fatigue，but it does not accord with the clinical multifactorial pathogenesis.Therefore，multi factor modeling method is more in line with clinical practice.As for the evaluation of the model，the macro signs，micro indexes and counter evidence prescriptions of animals are used to verify whether the model is successful.This paper aims to analyze and discuss the modeling method and model evaluation method of animal model of cold dampness trapped spleen syndrome.Keywords：cold dampness trapped spleen syndrome；animal model；model evaluation；TCM syndrome 中医证候动物模型是把人类相关疾病原型的某些特征在动物身上通过施加某种因素加以模拟复制的一种模型。动物模型的正确复制是实验成功的前提与基础，也是还原疾病发生、发展规律的重要保障。“脾主运化”指运化水谷和水湿的生理功能，而运化失常经常表现为脾阳虚与脾气虚，湿浊不化，久病湿从寒化，进而形成寒湿困脾证。寒湿困脾证在临床上以脘腹胀闷，不渴，纳呆、食少，肠鸣作泻，或身目发黄而晦暗，舌淡苔白腻等为常见症状1。相关研究显示，寒湿困脾证在急性感染性腹泻的中医证型中占比4.52%2，并且与多种消化系统疾病息息相关，如溃疡性结肠炎、克罗恩病、肠易激综合征等。因此，寒湿困脾证的研究受到广大临床及科研工作者的普遍关注。现今寒湿困脾证造模方法较为繁杂，本质却多属于脾阳虚。本文就寒湿困脾证动物模型造模方法和模型评价进行总结与分析，为今后寒湿困脾证动物模型制备提供参考。1模型造模方法1.1 外感寒湿造模法寒为阴邪易损伤阳气，湿为阴邪易阻滞气机。DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2023.01.01149 25 卷 辽宁中医药大学学报 久居寒湿之地，易导致寒湿之邪损伤脾阳，寒湿中阻。谢俏俏3每天中午将大鼠放入温度为（40.5），湿度为（902）%的气候箱中4 h，连续造模21 d，大鼠出现精神萎靡、嗜睡、懒动、肛周秽浊、体质量减轻、毛发无泽并伴有舌上的瘀斑、瘀点等症状。王常松等4每天上、下午将Wistar大鼠分别置于自制寒湿气候箱中1.5 h，然后每晚用8 的面糊灌胃，连续造模21 d，造模后大鼠出现反应迟钝、精神萎靡、行动迟缓、拱背、眯眼、摄食量减少、肛温污秽及便溏等症状，并用胃苓汤治疗后大鼠症状明显缓解。寒湿困脾日久的患者会伴有身目发黄、皮肤晦暗等症状。曲长江等5每天将Wistar大鼠置于相对湿度为95%以上，温度812 的气候箱内，并每日上午给予2 mL/100 g大黄煎剂灌胃，造模后大鼠出现蜷缩、毛发晦滞、肛周秽浊、扎堆、耳背皮肤略有黄色等症状，符合寒湿困脾的表现。外用寒湿因素是常用的造模方法，但此造模方法对于外界条件要求较高，造模箱内的温度不易控制，如用冰块放入箱中模拟寒冷环境，冰块融化速度较快，需要人长期观察等待，大量浪费了人力。当实验动物长期生存在寒湿气候箱中，大鼠不仅会出现寒湿困脾的表现，还会出现关节僵硬等痹症的表现，夹杂症状较多，所以需要学者仔细斟酌实验方案，减少实验误差。1.2 苦寒泻下受“火热之邪”的影响，目前临床上多喜欢用苦寒泻火的药物治疗炎症，然而过度服用苦寒之品，易导致脾胃阳气受损，虚寒内生，进而寒湿困脾6。张发斌等7采用大承气汤对大鼠进行灌胃，造模后大鼠出现体质量减轻、嗜睡、蜷卧、畏寒、肛周有污物等表现，但造模结束后大鼠的表现逐渐恢复，并接近于正常。樊慧杰等8用大黄煎剂按照20 g/kg的剂量进行灌胃，造模18 d，大鼠出现毛黄无泽、大便稀溏、行动缓慢、蜷缩、消瘦等症状。目前大黄灌胃是苦寒泻下法最常用的造模方法，除此之外番泻叶也是常用药物之一。孟静一9用番泻叶按0.4 g/d的剂量对小鼠进行灌胃，连续5周，小鼠出现稀便、嗜卧、懒动、消瘦、毛无泽等症状。苦寒泻下法建立脾虚寒湿证动物模型具有操作简单、可重复性好的特点，但模型自我恢复时间难以确定，致使模型的稳定性差，而且寒湿困脾证是一个长期的演变过程，虽通过强制的药物干预可在短时间内出现脾虚湿困的表现，但却忽略了疾病的发展演变过程，与传统的中医理论不符。1.3 饮食不节脾胃后天之本，饮食不节，脾胃乃伤。黄炳山等10首次根据“饮食自倍，胃肠乃伤”的理论建立了脾虚证动物模型，每日采用甘蓝喂小鼠，喂猪脂2 d 1次，连续9 d，小鼠出现畏寒蜷缩、行动迟缓、肛温低、便溏等症状。麦楚填等11自制高蛋白饲料喂养大鼠，造模后大鼠出现皮毛色黄、大便黏腻、扎堆等症状。此造模方法与现代人平素饥饱无度，暴饮暴食，或过食肥甘厚味，碍胃伤脾的饮食习惯相符合。而饮食偏嗜法也属于饮食不节的一种，因此也有学者采用食醋、白酒灌胃来模拟饮食不节12-13，但此方法不符合临床致病特点，因此不建议使用。饮食不节具有简单快速、可重复性强、成本低且不需要特殊设备及条件的优点，但存在饲料用量不易精确掌握、造模周期长、饲料不易长期保存、动物易出现厌食症状等缺点。1.4 劳倦过度法济生方 云：“劳伤脾胃，脾胃既寒，积寒化水也”，所以劳倦过度也是导致脾阳虚寒湿内生的重要原因。靳荃等14将小鼠每日上午在水温（14.00.5）水中力竭游泳，下午将其置于温度（4 0.5），湿度为90%95%的气候箱中4 h，连续15 d，小鼠出现了寒湿证的表现。薛晓倩等15采用改良的疲劳法进行造模，每日将大鼠放入水池中游泳15 min，再用4 的蒸馏水灌胃，连续6 d，大鼠出现脱毛、便溏、体质量下降等症状，经藿香正气散治疗后明显好转。劳则耗气法是目前动物造模最常用的方法之一，此方法符合中医理论的发病原理，但仍存在一定的局限性，实验动物游泳力竭时间难以评判，主观性强，有学者仅以大鼠下沉作为标准，也有学者用大鼠下沉15 s或3 s来说明大鼠力竭。但大鼠下沉时间过久会使大鼠出现呛水导致肺脏的病变，进而造成模型的准确性差，因此要严格规范动物造模时间并摸索最佳造模时间。1.5 复合因素造模法复合因素造模法是目前最常用，也是最符合临床实际的造模方法，模型成功性高，稳定性强16。刘敏等17使用母子分离+束缚+番泻叶灌胃的方法，大鼠出现反抗力弱、自主活动少、耳廓色淡、稀便等症状，并经四神丸治疗后症状明显缓解。祝赫等18采用相似的方法用醋酸结合母婴分离及束缚的方法进行造模，造模后通过粪便含水量检测法验证模型成功与否。但以上两种造模方法并不符合伦理，母婴分离过于残忍，并不推荐使用。因此，孙羽中