和枢消积丸对二甲基亚硝胺诱...的小鼠肝损伤的保护作用研究_张玉蓉.pdf

基金项目:西南医科大学附属中医医院自然科学项目(西南医大中医院 2019 119 号);西南医科大学应用基础重点项目(编号:2021ZKZD021);四川省科学技术厅重大科技专项(编号:2019YFS0018);西南医科大学附属中医医院科研团队(编号:2022-CXTD-04);中西医结合防治慢性肝病科技创新团队(泸组通 2021 162 号),四川省中医药管理局川派中医药学术传承和古籍文献整理研究课题(编号:2022CD3628)。第一作者:张玉蓉,医师,从事中西医结合防治慢性肝病研究,E-mail:641107975 ;通讯作者:汪静,教授,从事中西医结合防治慢性肝病研究,E-mail:lywj68 。和枢消积丸对二甲基亚硝胺诱导的小鼠肝损伤的保护作用研究张玉蓉1,朱晓宁1,张秀2,李晓媛2,蒲清荣1,汪静1,(1.西南医科大学附属中医医院,四川 泸州 646000;2.四川省中医药科学院,四川 成都 610000)摘要:目的:评价和枢消积丸对二甲基亚硝胺(DMN)诱导的小鼠肝损伤的保护作用。方法:连续腹腔注射DMN 10mg/kg 3 次诱导小鼠肝损伤的同时灌胃给予不同剂量的和枢消积丸,检测其体重、肝指数、肝功能及肝脏组织病理学等指标。结果:小鼠在注射 DMN 3 次后,其 TP 及 ALB 水平显著降低,ALT、AST、TBIL、DBIL 以及 TBA 水平显著升高,与对照组比较差异具有统计学意义。予以和枢消积丸灌胃后,和枢消积丸各剂量组均可显著性改善 DMN小鼠肝细胞坏死,降低其病理评分,且可显著性降低 DMN 小鼠血清 ALT 水平,与模型组比较差异具有统计学意义(P0.05)。且中剂量组可降低 DMN 小鼠血清 AST 水平(P0.01),高剂量组可降低 DMN 小鼠血清 AST、TBIL、DBIL以及 TBA 水平,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:和枢消积丸对 DMN 诱导小鼠肝损伤具有较好的保护作用。关键词:和枢消积丸;二甲基亚硝胺;肝损伤 中图分类号:R 285.5 文献标志码:A 文章编号:1000-3649(2023)02-0063-04 Protective Effect of Heshu Xiaoji Pills on Liver Injury Induced by Dimethylnitrosamine in Mice/ZHANG Yurong1,ZHU Xiaoning1,ZHANG Xiu2,et al./1.The Affiliated Traditional Chinese Medicine Hospital of Southwest Medical University(Luzhou Sichuan 646000,China);2.Sichuan Academy of Chinese Medicine Sciences(Chengdu Sichuan 610000,China)Abstract:Objective:To evaluate the protective effect of Heshu Xiaoji Pills on liver injury induced by dimethylnitrosamine(DMN)in mice.Methods:Continuous intraperitoneal injection of DMN(10 mg/kg)three times induced liver injury in mice,and different doses of Heshu Xiaoji Pills were given intragastrically.Then detect thebody weight,liver index,liver function,andliver histopathology of mice.Results:After injection of DMN 3 times,the levels of TP and ALB significantly decreased,while thelevels of ALT,AST,TBIL,DBIL,and TBA significantly increased,and the differences statistically significant compared with thecontrolled group.After intragastric administration of Heshu Xiaoji Pills,hepatocyte necrosis and the pathological score of DMNmice were significantly improved in all doses of Heshu Xiaoji Pills groups,and serum ALT level was significantly decreased inDMN mice,with statistical significance compared with the model group(P0.05).The levels of AST,TBIL,DBIL,and TBA inDMN mice were decreased in the medium-dose group(P0.01),and the levels of AST,TBIL,DBIL,and TBA in the high-dose group were decreased,the differences were statistically significant(P0.05).Conclusion:Heshu Xiaoji Pills has a goodprotective effect on liver injury induced by DMN in mice.Keywords:Heshu Xiaoji Pill;Dimethylnitrosamine;Liver injury原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤,因患者就诊时大多已发展至中晚期,失去根治性手术治疗机会,肝动脉化疗栓塞术、消融手术、放疗等成为常用治疗手段1,2,由于术中正常肝组织的血供被阻碍或药物副反应、放射性因素等影响,常造成患者术后不同程度的肝功能损伤,故围手术期保肝治疗对于原发性肝癌患者术后恢复至关重要3。二甲基亚硝胺(DMN)是一种潜在的肝毒素、致癌物和突变原,在动物模型中广泛用于研究肝纤维化和筛选肝保护候选药物4。和枢消积丸是全国优秀中医临床人才、四川省名中医汪静教授传承全国名中医孙同郊教授“和调”学术思想,以“和枢消积”立法,治疗原发性肝癌的经验方,临床观察能缓解患者乏力、纳差、腹胀、腹痛等症状,改善肝功能,延长患者生存期。本研究通过观察和枢消积丸对 DMN 诱导的小鼠肝损伤的影响来证实其肝保护作用。1材料与方法1.1 实验药物 和枢消积丸(批号20201105),每1 g粉末相当于原药材 1.604g,由西南医科大学附属中医医院提供,临用前用 0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液配成所需浓度的混悬液备用。双环醇片(批362023 年第 41 卷第 2 期Vol.41,No.2,2023四 川 中 医Journal of Sichuan of Traditional Chinese Medicine号 190301、200608),北京协和药厂,临用前用 0.5%CMC-Na 溶液配制成所需浓度的混悬液备用。1.2实验动物雄性 SPF 级昆明小鼠,体重 18-22g,由四川省中医药科学院实验动物中心提供,生产许可证号:SCXK(川)2018-19。小鼠饲养于四川省中医药科学院动物中心 SPF 屏障系统,室内温2022,相对湿度 50%左右,每天明暗交替 12h处理,环境使用许可证号为 SYXK(川)2018-100。所有小鼠自由饮水,全营养颗粒饲料由四川省中医药科学院实验动物中心提供。所有实验操作过程均符合实验动物伦理学要求。1.3实验试剂DMN(批号 P1274923),梯希爱(上海)化成工业发展有限公司,临用前用生理盐水配制 成 所 需 浓 度 溶 液 备 用;CMC-Na(批 号2014102701),成都市科龙化工试剂厂,用双蒸水配制成 0.5%CMC-Na 溶液。谷丙转氨酶(ALT)测定试剂盒(批号 909Q0),上海景源医疗器械有限公司;谷草转氨酶(AST)(批号 1020031)、白蛋白(ALB)(批号 1120041)、总胆红素(TBIL)(批号1020071)、直接胆红素(DBIL)(批号 1120081)测定试剂盒,四川新健康成生物股份有限公司;血清总蛋白(TP)测定试剂盒(批号 0320041),迈克生物股份有限公司;总胆汁酸(TBA)测定试剂盒(批号 308/200826),上海申索佑福医学诊断用品有限公司。上述检测指标均在全自动生化仪上按试剂制造商指南进行检测。1.4实验仪器生物显微镜,型号 CX21FS1C,奥林巴斯(广州)工业有限公司;立式压力蒸汽灭菌器,型号 LDZX-30FBS,上海申安医疗器械厂;全自动生化分析仪,型号日立 7180,日立诊断产品(上海)有限公司。1.5方法1.5.1动物分组、造模及给药取昆明小鼠 66 只,适应性喂养 1 天后,随机分为对照组、模型组、双环醇组(0.1 g/kg)、和枢消积丸低剂量组(3.0 g 原生药/kg)、和枢消积丸中剂量组(6.0 g 原生药/kg)、和枢消积丸高剂量组(12.0 g 原生药/kg)。分别灌胃给药,对照组和模型组予以等体积 0.5%CMC-Na 溶液 0.2 ml/10g,每日 1 次,连续 10 天。在第 3 天给药后 1 小时,除对照组腹腔注射生理盐水0.1 ml/10g 外,其余各组均腹腔注射 DMN 溶液 10mg/kg,隔天 1 次,连续 3 天。1.5.2大鼠体重及肝指数每周称重并登记各组小鼠体重。灌胃完成放血处死动物后,取肝脏称量肝湿重,计算肝指数。1.5.3生化指标检测末次给药后 24 h 后禁食不禁水 14 h,取血分离血清,根据试剂盒说明书操作用全自 动 生 化 仪 测 定 ALT、AST、TP、ALB、TBIL、DBIL、TBA 等生化指标。1.5.4组织病理学取肝大叶置于 10%甲醛固定,脱水包埋后切片,行 HE 染色通过肝组织病理学评分观察肝脏肝损伤程度。1.6统计学分析所有数据用平均值标准差(x-s)表示。采 用 单 因 素 方 差 分 析,组 间 差 异 采 用Student T 检验或秩和检验,应用 SPSS 统计软件进行分析,P0.05 具有统计学意义。2结果2.1和枢消积丸对 DMN 致肝损伤小鼠体重及肝指数的影响小鼠在注射 DMN 3 次后,体重显著降低,与对照组比较差异具有统计学意义(P0.01)(见表 1,图 1);和枢消积丸各剂量组及双环醇组对DMN 小鼠体重及肝指数均无明显影响,与模型组比较差异无统计学意义(见表 1,图 2)。表 1 和枢消积丸对 DMN 致肝损伤小鼠体重的影响(x-s)组别n药前体重(g)药后体重(g)肝指数(mg/10g)对照组1021.11.628.63.0481.528.9模型组1221.71.824.62.7463.336.7双环醇组1221.71.524.91.7493.543.1和枢消积丸低剂量组1021.91.224.62.3490.239.6和枢消积丸中剂量组1121.71.524.72.3488.154.3和枢消积丸高剂量组921.81.125.32.5469.4128.3 注:与模型组比较,P0.05,P0.01,P0.001(下同)。图 1 和枢消积丸对 DMN 致肝损伤小鼠体重的影响图 2 和枢消积丸对 DMN 致肝损伤小鼠肝指数的影响2.2和枢消积丸对 DMN 致肝损伤小鼠肝功能的影响小鼠在注射 DMN 3 次后