第45卷第1期2023年2月海洋湖沼通报TransactionsofOceanologyandLimnologyVol.45№1Feb.,2023海洋生境间苯三酚高产菌株选育及其培养基优化马湘君1,2,王祥法1,侯仕营1,2,李银塔1*,田黎3(1.威海海洋职业学院,山东荣成264300;2.山东省海洋经济藻类资源开发与利用工程技术协同创新中心,山东荣成264300;3.自然资源部第一海洋研究所,山东青岛266100)摘要:本研究以一株分离筛选到的产间苯三酚的海洋生境假单胞菌LBF-96为基础,通过传统紫外诱变以及紫外微波复合诱变选育间苯三酚高产菌株,并采用响应曲面法优化突变株的发酵培养基。结果显示:经紫外照射60s、微波辐照20s复合诱变获得了一株间苯三酚高产菌YLM96-01,利用肉桂醛显色法测得其间苯三酚产量为0.599g/L,较原始菌株提高了159%,且产间苯三酚时间提前,降低了发酵培养的成本;经传代培养显示突变株YLM96-01具有良好的遗传稳定性。采用响应曲面法优化培养条件后,突变株YLM96-01间苯三酚的产量提高为0.784g/L,比优化前提高31%。通过紫外微波复合诱变选育出的间苯三酚高产菌YLM96-01,具有潜在生产应用价值。关键词:间苯三酚;假单胞菌;紫外微波复合诱变;响应面法中图分类号:Q93文献标志码:A文章编号:1003-6482(2023)01-067-07DOI:10.13984/j.cnki.cn37-1141.2023.01.010引言间苯三酚是一种应用广泛的大宗化学品,同时也是食品添加剂、化妆品和药物的通用前体,在国内外市场需求广阔[1-3]。化学合成法产间苯三酚存在环境污染等弊端,环境友好型的生物合成法广受关注[4]。例如Achkar等在大肠杆菌中导入合成间苯三酚的关键基因phlD,使表达的间苯三酚产物产量达到780mg/L[5];赵广等研究利用乙醇生产间苯三酚的重组菌的构建,实验菌株间苯三酚产量为0.38g/L[6]。本研究以筛选获得的一株产间苯三酚的芸薹假单胞菌(Pseudomonasbrassicacearum)LBF-96为基础,其在GenBank数据库中序列登录号为MT039637,利用紫外和紫外微波复合诱变育种来提高菌体间苯三酚的产量。紫外诱变育种是利用紫外线可直接作用于细菌DNA,阻碍碱基的正常配对,造成基因突变,提高筛选效率[7-8]。微波诱变作为一种非电离电磁辐射物理诱变育种技术,在提高药源微生物产量和拓展活性菌株新资源等方面具备较好前景,可减少突变率低、突变谱窄等弊端[9]。响应曲面法是微生物领域比较常用的实验设计方法,采用此法对各因素交互作用进行评价,可利用较少试验组数据确定最佳水平范围[10]。如何伟等通过对高效表达淀粉酶Bacilluskoreensis的培养基进行响应面优化,其优...
