化学发光法和酶联免疫法在猪...病毒血清学检验中的对比研究_张军.pdf

2022年11月兽医科技摘要：为了比较化学发光法(CLIA)和酶联免疫法(ELISA)在猪瘟病毒血清学检验中的价值，笔者采集郑州市部分规模化养殖场的 219 份猪血清，采用 CLIA 和 ELISA 法检验猪血清中猪瘟抗体水平，从结果一致性、操作简便性和检测成本 3 个方面进行比较和分析。结果表明，CLIA 与 ELISA 在猪瘟病毒血清学检验中的应用效果相当，结果一致性高。CLIA 检验操作更加简便，并且可以对猪瘟抗体水平定量分析；ELISA 检验成本相对较低。检测机构可根据实际情况，选择恰当的检验方法。关键词：猪瘟病毒；血清学检验；抗体；化学发光法；酶联免疫法猪瘟(Classical swine fever，CSF)是由猪瘟病毒引起的重要猪病之一，给养猪业带来巨大的经济损失。近年来，种猪带毒、仔猪先天性感染、温和型猪瘟的出现，非典型猪瘟的增多，流行毒株变异与其他基因型毒株传入导致的疫苗有效性降低等现状，给我国 CSF 的根除和净化带来了巨大挑战1。目前，化学发光法作为一种新型技术，逐步运用于兽医诊断中，相比酶联免疫法具有检测线性范围宽、无放射性污染、灵敏度高、特异性强、快速简单、易于操作等优势2。为了比较二者在猪瘟抗体检测中的价值，笔者从结果一致性、操作简便性和检测成本 3 个方面进行了对比研究，为检测机构选择恰当的检验方法提供参考。1试验材料1.1血清样品笔者对郑州市部分规模化猪场不同饲养阶段猪只采血：仔猪 67 份，育肥猪 112 份，生产母猪 40 份，共计 219 份。离心获得血清后，-20储存备用。1.2主要仪器设备化学发光免疫分析仪购自现代生物；酶标仪购自 Thermo 公司；洗板机购自郑州安图生物工程股份有限公司；电热恒温培养箱购自上海精宏实验设备有限公司；微量移液器购自 Eppendorf 公司；微量振荡器购自金坛市医疗器械厂。1.3试剂猪瘟病毒抗体检测试剂盒由 IDEXX 生物科技有限公司生产；猪瘟病毒化学发光抗体检测试剂盒由洛阳莱普生信息科技有限公司生产。化学发光法和酶联免疫法在猪瘟病毒血清学检验中的对比研究张 军刘 炜贾松涛郭会娟郑州市动物疫病预防控制中心(河南郑州 450052)中图分类号：S854.4+3文献标识码：B文章编号：1002-2996(2022)11-0024-03Comparative Study of CLIA and ELISA in Serological Detection ofClassical Swine Fever VirusZHANG Jun，LIU Wei，JIA Song-tao，GUO Hui-juan(Zhengzhou Animal Disease Prevention and Control Center，Zhengzhou，Henan 450052，China)Abstract：In order to compare the value of chemiluminescence(CLIA)and enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)in the serolog-ical test of classical swine fever virus，219 pig sera from some large-scale farms in Zhengzhou were selected.The antibody level of clas-sical swine fever in pig sera was tested by CLIA test and ELISA.The results were compared and analyzed from three aspects：consistencyof results，simplicity of operation and detection cost.The results show that the application effect of CLIA and ELISA in the serologicaltest of classical swine fever virus is equivalent，the consistency of the results is high，the operation of CLIA test is more simple，and theantibody level of classical swine fever can be quantitatively analyzed.The cost of ELISA test is relatively low，and the detection organi-zation can choose the appropriate test method according to the actual situation.Key words：swine fever virus；serological detection；antibody；CLIA；ELISA242022年11月2试验方法2.1CLIA 检验血清稀释板中，校准品 16 孔各 80 L，样品孔为 80 L 稀释好的样品，以上各孔加入 80 L 发光酶结合物，震荡混匀，每孔 100 L 移入包被板中，37温育 30 min，洗涤 5 次包被板后，每孔加入发光底物 A、B 各 50 L，室温避光 5 min，反应结束后利用化学发光仪进行检测。2.2ELISA 检验取出抗原包被板，向对照孔和检测孔中加入 50L样品稀释液，分别将 50 L 阴性对照、阳性对照和待检样品加入对应孔中。震荡混匀后室温下孵育2 h。洗涤包被板 3 次后，将 100 L 酶标二抗加入各反应孔中，室温下孵育 30 min。洗涤包被板 3 次后，各孔加入 100 L 底物液，室温避光 10 min。各孔加入 100 L 终止液，最后利用酶标仪进行检测。2.3统计方法通过计算 2 种血清学检验试验的 Kappa 值，衡量 CLIA 和 ELISA 检 验 结 果 的 一 致 性。如 果0Kappa0.40，说明试验结果一致性差；如果 0.40Kappa0.75，说明试验结果一致性中等；如果Kappa0.75，说明试验结果一致性高。3结果同批血清分别用两种试剂盒进行检测，检测结果分别见表 1、表 2 及图 1。从结果可以看出，用猪瘟病毒化学发光抗体检测试剂盒和猪瘟病毒抗体检测试剂盒酶联免疫法检测仔猪，育肥猪，生产母猪的抗体阳性数、阳性率以及抗体滴度分布情况等数据基本一致。通过对检验结果统计比较发现，CLIA 检验和 ELISA 检验结果的一致性高(Kappa=0.964)，说明用以上 2 种试剂盒检测猪瘟抗体的结果相差不大。4分析与讨论猪瘟是我国一类动物传染病，会引发猪只大量死亡，给养猪业造成严重损失。目前，预防猪瘟的有效措施是疫苗接种3。日常监测是衡量免疫效果的重要手段。监测方法的选择是监测工作的重中之重。下面，笔者从结果一致性、操作简便性和检测成本3 个方面进行讨论。4.1结果一致性比较CLIA 检验和 ELISA 检验结果的 Kappa 值为0.964，说明 2 种血清学检验的结果一致性高，在猪表 1CLIA 方法检测猪瘟抗体效价结果分组检测数阳性数阳性率/%不同抗体剂量值（N CU/m L）的血清份数20206060100100仔猪675886.579202810育肥猪1129080.3622294318生产母猪403997.5192010表 2ELISA 方法检测猪瘟抗体效价结果分组检测数阳性数阳性率/%不同抗体阻断率的血清份数303060609090仔猪675886.57919309育肥猪1128979.4623274517生产母猪403895.00272110图 1不同饲养阶段的猪群用不同血清学检验方法后的猪瘟抗体阳性数兽医科技252022年11月瘟抗体检测中应用效果相当。其中，CLIA 检验可以对猪瘟抗体水平定量分析。4.2操作简便性比较2 种方法中，化学发光法操作简单，获取结果时间短(40 min 左右)；酶联免疫法步骤多操作复杂，获取结果时间长(3 h 左右)。4.3检测成本比较2 种方法中，化学发光法成本较高；酶联免疫法成本相对较低。通过以上试验研究发现，化学发光法与酶联免疫法在猪瘟病毒血清学检验中的应用效果相当，结果一致性高。其中，化学发光法可以对猪瘟抗体水平定量分析。化学发光法检验操作更加简便，用时短；而酶联免疫法检验成本相对较低。检测机构可根据实际情况，选择恰当的检验方法。参考文献1姚文生，范学政，王琴，等.我国猪瘟流行现状与防控措施建议J.中国兽药杂志，2011，45(9)：44-47.2麻园，石正旺，罗俊聪，等.猪瘟病毒化学发光抗体检测方法的建立与应用J.畜牧兽医学报，2021，52(6)：1744-1752.3仇华吉，童光志，沈荣显，等.猪瘟兔化弱毒疫苗-半个世纪的回顾J.中国农业科学，2005(8)：1675-1685.第一作者简介：张军，1985 年出生，男，兽医师，硕士研究生，研究方向为动物疫病防控。摘要：为了鉴定从沐川乌骨黑鸡肠道内容物中分离出的 1 株细菌的种类以及检测其耐药基因携带情况，笔者采用革兰氏染色镜检、生化鉴定、16S rDNA 基因序列分析以及抗生素耐药性和耐药基因检测。结果表明，该分离株为欧文氏菌，并将其命名为 S21。药敏试验结果表明，环丙沙星、氧氟沙星、头孢氨苄表现为敏感；四环素表现为中介；其余抗生素为耐药，且只检出耐药基因 rmtA、tetE、pgi，其余所试耐药基因未检出，说明了该养殖场鸡源欧文氏菌的耐药情况较严重。关键词：沐川乌骨黑鸡；欧文氏菌；分离鉴定；16S rDNA；耐药性；耐药基因鸡 源 欧 文 氏 菌 的 分 离 鉴 定 及 耐 药 基 因 检 测马丽莎章文欣廖 娟*王 钢喻世刚吴 茜应慧惠何 瑶乐山师范学院川南地方品种鸡产业化四川省高等学校工程研究中心(四川乐山 614000)中图分类号：S854.4+3文献标识码：B文章编号：1002-2996(2022)11-0026-06Isolation，Identification and Detection of Antibiotics Resistance Genes ofErwinia from ChickenMA Li-sha，ZHANG Wen-xin，LIAO Juan*，WANG Gang，YU Shi-gang，WU Xi，YING Hui-hui，HE Yao(Engineering Research Center of Sichuan Province Higher School of Local Chicken Breeds Industrialization in Southern Sichuan，College of Life Science，Leshan Normal University，Leshan 614000，China)Aabstract：In order to identify the species of a bacterium isolated from Muchuan black-boned black chicken and detect its drug resis-tance gene carrying，Gram staining，microscopic examination，biochemical identification，16S rDNA gene sequence analysis and an-tibiotic susceptibility testing and resistance gene detection were used in the experiments.The results indicated that the isolate was