GB 23200.112-2018 食品安全国家标准 植物源性食品中9种氨基甲酸酯类农药及其代谢物残留量的测定 液相色谱-柱后衍生法.pdf

GB23200.112-2018食品安全国家标准植物源性食品中9种氨基甲酸酯类农药及其代谢物残留量的测定液相色谱-柱后衍生法1范围本标准规定了植物源性食品中9种氨基甲酸酯类农药及其代谢物（参见附录A)残留量的液相色谱柱后衍生测定方法。本标准适用于植物源性食品中9种氨基甲酸酯类农药及其代谢物残留量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试样用乙腈提取，提取液经固相萃取或分散固相萃取净化，使用带荧光检测器和柱后衍生系统的高效液相色谱仪检测，外标法定量。4试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用分析纯的试剂，水为GB/T6682规定的一级水。4.1试剂4.1.1乙腈(CHCN,CAS号：75-05-8)。4.1.2甲醇(CHOH,CAS号：67-56-1)：色谱纯。4.1.3二氯甲烷(CHzC2,CAS号：75-09-2)色谱纯。4.1.4甲苯(CH8,CAS号：108-88-3)：色谱纯。4.1.5氯化钠(NaCl,CAS号：7647-14-5)。4.1.6邻苯二甲醛(C8HO2,CAS号：643-79-8)。4.1.72-二甲胺基乙硫醇盐酸盐(CH2CNS,CAS号：13242-44-9)，或相当者。4.1.8无水硫酸镁(MgS04,CAS号：7487-88-9)。4.1.9醋酸钠(CH3 COONa,CAS号：6131-90-4)。4.1.10氢氧化钠(NaOH,CAS号：1310-73-2).4.1.11十水四硼酸钠(NaB,O10H20,CAS号：1303-96-4).4.2溶液配制4.2.1甲醇-二氯甲烷溶液(1十99，体积比)：量取10mL甲醇加人990mL二氯甲烷中，混匀。4.2.2乙腈-甲苯溶液(3十1，体积比)：量取100mL甲苯加入300mL乙腈中，混匀。4.2.3氢氧化钠溶液(0.05mol/L):称取2.0g氢氧化钠，用水溶解并定容至1000mL,混匀。1GB23200.112-20184.2.4十水四硼酸钠溶液(4g/L):称取4.0g十水四硼酸钠，用水溶解并定容至1000mL,混匀。4.2.5OPA试剂：称取50.0mg邻苯二甲醛，溶于5mL甲醇中，混匀；再称取1.0g2-二甲胺基乙硫醇盐酸盐，溶于5mL十水四硼酸钠溶液(4.2.4)，混匀；将上述2种溶液倒入490L十水四硼酸钠溶液(4.2.4)，混匀。4.3标准品9种氨基甲酸酯类农药及其代谢物标准品参见附录A,纯度95%。4.4标准溶液配制4.4.1标准储备溶液(1000mg/L):准确称取10mg(精确至0.1mg)各农药标准品，用甲醇溶解并分别定容到10mL。标准储备溶液避光一18保存，有效期1年。4.4.2混合标准溶液：准确吸取一定量的单个农药储备溶液于10L容量瓶中，用甲醇定容至刻度。混合标准溶液，避光04保存，有效期1个月。4.5材料4.5.1固相萃取柱1：氨基填料(NH2)500mg,6mL。4.5.2固相萃取柱2：石墨化炭黑填料(GCB)500mg,氨基填料(NH2)500mg,6mL。4.5.3乙二胺N-丙基硅烷硅胶(PSA):40m60m。4.5.4十八烷基甲硅烷改性硅胶(C18):40m60m。4.5.5陶瓷均质子：2cm(长)1cm(外径)。4.5.6微孔滤膜（有机相）：0.22mX25mm。5仪器设备5.1液相色谱仪：配有柱后衍生反应装置和荧光检测器(FLD)。5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。5.3高速匀浆机：转速不低于15000r/min。5.4高速离心机：转速不低于4200r/min。5.5组织捣碎机。5.6旋转蒸发仪。5.7氯吹仪：可控温。5.8涡旋振荡器。6试样的制备6.1试样制备蔬菜和水果的取样量按照相关标准的规定执行，食用菌样品随机取样1kg。样品取样部位按照GB2763的规定执行。对于个体较小的样品，取样后全部处理；对于个体较大的基本均匀样品，可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处理：对于细长、扁平或组分含量在各部分有差异的样品，可在不同部位切取小片或截成小段后处理；取后的样品将其切碎，充分混匀，用四分法取样或直接放入组织捣碎机中捣碎成匀浆，放入聚乙烯瓶中。取谷类样品500g,粉碎后使其全部可通过425m的标准网筛，放入聚乙烯瓶或袋中。取油料作物、茶叶、坚果和香辛料各500g,粉碎后充分混匀，放入聚乙烯瓶或袋中。植物油类搅拌均匀，放入聚乙烯瓶中。6.2试样储存试样于一18条件下保存。2GB23200.112-20187分析步骤7.1提取和净化7.1.1蔬菜、水果和食用菌称取20g试样（精确至0.01g)于150mL烧杯中，加入40mL乙腈，用高速匀浆机15000r/min匀浆提取2min,提取液过滤至装有5g7g氯化钠的l00mL具塞量筒中，盖上塞子，刷烈振荡1min,在室温下静置30min。准确吸取10mL上清液，80水浴中氨吹蒸发近干，加人2mL甲醇溶解残余物，待净化。将固相萃取柱1(4.5.1)用4m甲醇-二氯甲烷溶液(4.2.1)预淋洗，当液面到达柱筛板顶部时，立即加入上述待净化溶液，用10L离心管收集洗脱液，用2m山更醇二氯甲烷溶液(4.2.1)涮洗烧杯后际取0g只心浴政文二人过柱，并重复一次，收集的洗脱液于50,50mL甲醇，涡旋混匀，用微孔滤膜(4.5.6)过滤，待测7.1.2谷物0L具塞锥形瓶中，加,混匀后，静置30min,再加入50mL乙腈，用振荡器20r/mn振提取30min,提取液过滤至装有57名氯化钠的100mL具塞量筒中，盖上塞子剧烈振)1min,在温下静0 min准确吸取10卫清液，80水浴中氮吹蒸发近干，加入2m,甲醇溶解残余物将固相萃取柱14.1)用4m伊醇氯甲容液(42D预淋洗，当液面到达柱循板顶部时，立即加入上述待净化溶液，用10mL离心管收集洗脱液，用？mL甲醒二氯甲烷溶报(4,2.1)涮洗烧杯后过柱，并重复一次，集的洗脱液于水浴中氨吹蒸发近于，准确加入2.50醇，涡旋混匀，用微孔滤膜(4.5.6)过滤，待7.1.3茶叶和香料称取5g试样（精确0,01g)于150mL烧杯中，加mIn.再加入50ml乙腈，用高速匀浆机1500r/min匀浆提取2min,提取液滤至装有100mL具塞量筒中，盖上塞子，刷银粉min,在室温下静30min确吸取10C水浴中氮吹蒸发近千，加人2mL乙将固相萃取柱2(青甲苯溶潮.2.2)预淋洗，当液面到达主筛板顶部时，立即加入上述待净化溶液，用100瓶收集洗脱液用2mL乙睛-甲苯溶液(4.2.2)涮洗烧杯后过柱，并重复一次，再用5L乙溶液4.22洗脱柱子，收集的洗脱液于40C水浴中旋转蒸发近干，用5mL甲醇冲洗旋转蒸发瓶并车移到10mL离心管中，50水浴中氮吹蒸发近干，准确加入1.00L甲醇，涡旋混匀，用微孔滤膜4.5.6)过滤，待测。7.1.4油料和坚果称取10g试样（精确至0.01g)于150m烧杯中，加入20mL水，混匀后，静置30min,再加入50mL乙腈，用高速匀浆机15000r/min匀浆提取2min,提取液过滤至装有5g7g氯化钠的100mL具塞量筒中，盖上塞子，剧烈振荡1min,在室温下静置30min。准确吸取8mL上清液于内含1200mg无水硫酸镁、400 mg PSA和400mgC1s的15mL塑料离心管中，涡旋混匀1min,然后4200r/min离心5min,吸取5mL上清液于10mL离心管中，在50水浴中氨吹蒸发近干，准确加人2.00mL甲醇，涡旋混匀，用微孔滤膜(4.5.6)过滤，待测。7.1.5植物油称取3g试样（精确至0.01g)于50mL塑料离心管中，加人5mL水、15mL乙腈，并加人6g无水硫酸镁、1.5g醋酸钠及1颗陶瓷均质子，剧烈振荡1min,4200r/min离心5min准确吸取8mL上清液于内含1200mg无水硫酸镁、400 mg PSA和400mgCs的15mL塑料离心3GB23200.112-2018管中，涡旋混匀1min,然后4200r/min离心5min,吸取5mL上清液于10mL离心管中，在50水浴中氮吹蒸发近干，准确加人1.00mL甲醇，涡旋混匀，用微孔滤膜(4.5.6)过滤，待测。7.2测定7.2.1仪器参考条件a)色谱柱：C柱，250mmX4.6mm(内径)，5um(粒径)；b)柱温：42；c)荧光检测器：入.=330nm,入m=465nm;d)流动相及梯度洗脱条件，见表1；表1流动相及梯度洗脱条件(Va十V)时间流速min流动相（水）VmL/min流动相（甲醇）V0.001.085152.001.075256.501.0752510.501.0604028.001.0604033.001.0208035.001.0208035.101.0010037.001.0010037.101.08515e)柱后衍生：0.05mol/L氢氧化钠溶液，流速0.3mL/min;OPA试剂，流速0.3mL/min;水解温度，100；衍生温度，室温；f)进样体积：10L。7.2.2标准工作曲线精确吸取一定量的混合标准溶液，逐级用甲醇稀释成质量浓度为0.01mg/L、0.05mg/L、0.1mgL、0.5mg/L和1.0mg/L的标准工作溶液，供液相色谱测定。以农药质量浓度为横坐标、色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。7.2.3定性及定量7.2.3.1定性以目标农药的保留时间定性。被测试样中目标农药色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，相差应在士0.05min之内。阳性试样需更换C1s柱进行定性确认。7.2.3.2定量外标法定量。7.3试样溶液的测定将混合标准工作溶液和试样溶液依次注入液相色谱仪中，保留时间定性，测得目标农药色谱峰面积，根据式(1)，得到各农药组分含量。待测样液中农药的响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内，超过线性范围时，应根据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析。7.4平行试验按7.17.3的规定对同一试样进行平行试验测定。7.5空白试验除不加试料外，按7.17.4的规定进行平行操作。4