人类辅助生殖技术用医疗器械　培养用液中氨基酸检测方法 YYT 1695-2020.pdf

YY/T1695-2020前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家药品监督管理局提出。本标准由中国食品药品检定研究院归口。本标准起草单位：中国食品药品检定研究院。本标准主要起草人：柯林楠、黄元礼、赵丹妹、方玉、韩倩倩、王春仁、段晓杰。IYY/T 1695-2020人类辅助生殖技术用医疗器械培养用液中氨基酸检测方法1范围本标准规定了用氨基酸分析仪法、高效液相色谱串联三重四极杆质谱仪法、高效液相色谱柱前衍生法检测人类辅助生殖技术用培养用液中氨基酸成分。本标准适用于人类辅助生殖技术用培养用液中所含甘氨酸(GLY)、亮氨酸(LEU)、蛋氨酸(MET)、酪氨酸(TYR)、组氨酸(HIS)、苏氨酸(THR)、丙氨酸(ALA)、异亮氨酸(ILE)、色氨酸(TRY)、胱氨酸(CYS)、赖氨酸(LYS)、天门冬氨酸(ASP)、缬氨酸(VAL)、苯丙氨酸(PHE)、脯氨酸(PRO)、丝氨酸(SER)、谷氨酸(GLU)、精氨酸(ARG)、牛磺酸(TAU)19种氨基酸的定量分析。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法JJG1064-2011氨基酸分析仪检定规程YY/T0995人类辅助生殖技术用医疗器械语和定义3术语和定义YY/T0995界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1氨基酸分析仪法amino acid analyzer氨基酸分析仪中离子交换色谱柱将样品中不同的氨基酸分离，并以茚三酮做柱后衍生后，在570nm和440nm波长下测定以外标法进行定量。3.2高效液相色谱串联三重四极杆质谱仪法 high-performance liquid chromatography coupled to tan-dem mass spectrometry高效液相色谱将样品中的待测成分初步分离开，三重四级杆质谱仪对分开的待测成分通过筛选母离子质核比得到待测离子，待测离子经碰撞后碎裂成子离子，最后通过子离子的碎片强度定量待测成分。3.3高效液相色谱柱前衍生法 high-performance liquid chromatography pre-column derivatization andanalysis method待测组分先通过衍生化反应转化为衍生化产物，然后经过色谱柱与样品中的其他组分分离再通过外标法进行定量。YY/T 1695-2020程及仪器说明书，适当调整仪器操作程序及参数和洗脱用缓冲溶液试剂配比，确认仪器操作条件。4.6.2测试在上述测试条件下，取混合氨基酸对照品系列溶液和样品溶液（或供试液）20uL,分别注入氨基酸分析仪以各氨基酸对照品峰面积为纵坐标，氨基酸对照品浓度为横坐标，绘制各氨基酸标准曲线.计算回归方程。4.7结果计算与表示4.7.1样品中各氨基酸含量样品中各氨基酸含量按式(1)计算：X1=C1XK式中：X样品中氨基酸i含量单位为微克每毫升（g/mL);C根据回归方程计算样品测定液中氨基酸i含量单位为微克每毫升（g/mL);K试样稀释倍数。4.7.2结果表示以两个平行试样测定结果的算术平均值报告结果。4.8质量控制4.8.1分离度各氨基酸分离度85%。4.8.2空白分析每次分析至少做一个实验室空白，实验室空白中检出每个目标化合物的浓度不得超过方法的检出限。4.8.3校准每批样品应绘制标准曲线，相关系数应0.995否则应重新绘制标准曲线。每20个样品或每批次样品（少于20个样品）应测定一个标准曲线中间浓度点标准溶液，其测定结果与该点浓度的相对偏差应15%，否则应重新绘制标准曲线。4.8.4平行样测试每个样品需做平行双样，平行双样测定结果的相对偏差应15%。5方法二：高效液相色谱串联三重四极杆质谱仪法5.1原理通过乙腈沉淀人类辅助生殖技术用培养用液中的蛋白质，离心取得上清液后，通过高效液相色谱串联三重四极杆质谱仪分离检测，根据保留时间及特征离子质核比定性，外标法定量。3