东南大学学报(医学版)JSoutheastUniv(MedSciEdi)2023，Feb;42(1):32-40［收稿日期］2022-08-08［修回日期］2022-11-11［基金项目］广东省医学科研基金资助项目(B2021203)［作者简介］周敏华(1977－)，女，广东东莞人，副主任医师。E-mail:nanali1986@163．com［通信作者］朱咏瑶E-mail:Zhuyy417@163．com［引文格式］周敏华，吴颖，陈毅光，等．高糖条件下沉默LＲP6通过Wnt/β-catenin途径抑制大鼠视网膜Müller细胞的自噬与凋亡［J］．东南大学学报(医学版)，2023，42(1):32-40．·论著·高糖条件下沉默LＲP6通过Wnt/β-catenin途径抑制大鼠视网膜Müller细胞的自噬与凋亡周敏华，吴颖，陈毅光，陈庆隆，李文翀，刘枘岢，朱咏瑶(东莞市松山湖中心医院内分泌科，广东东莞523326)［摘要］目的:探究在高糖作用下大鼠视网膜Müller细胞中低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LＲP6)的表达及其对高糖条件诱导的Müller细胞自噬与凋亡的作用和机制。方法:体外培养大鼠视网膜Müller细胞，采用ＲT-PCＲ与Westernblotting检测高糖条件下Müller细胞中LＲP6mＲNA和蛋白的表达水平;利用siＲNA干扰技术沉默Müller细胞中的LＲP6，并分别在葡萄糖浓度为5．6mmol·L－1(NG)与35mmol·L－1的DMEM培养液(HG)中进行培养，按处理方式的不同将Müller细胞分为葡萄糖浓度为5．6mmol·L－1的DMEM培养的正常葡萄糖组(NG组)、葡萄糖浓度为35mmol·L－1的DMEM培养的转染si-NC组(HG+si-NC组)和si-LＲP6的Müller细胞组(HG+si-LＲP6组);采用Westernblotting检测各组Müller细胞中自噬相关蛋白P62的表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ之值、Beclin1与Atg12-Atg5复合体的表达;共聚焦显微镜观察ＲFP-GFP-LC3串联质粒转染后各组Müller细胞中自噬通量的变化;TUNEL染色检测各组Müller细胞的凋亡率，Westernblotting法检测细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax与cleavedCaspase-3及Wnt/β-catenin途径中β-catenin蛋白的表达。结果:与NG组相比，HG组Müller细胞中LＲP6mＲNA和蛋白的表达水平明显增高(P＜0．01);与NG组比较，HG+si-NC组、HG+si-LＲP6组Müller细胞中除P62和Bcl-2蛋白表达显著降低外(P＜0．05)，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ之值、Beclin1与Atg12-Atg5复合体、细胞中自噬通量、TUNEL阳性细胞率及细胞中Bad、cleavedCaspase-3蛋白表达水平均明显升高(P＜0．05);而与HG+si-NC组比较，HG+si-LＲP6组中除P62、Bcl-2蛋白明显升高外(P＜0．05)，其他检测指标均显著降低;此外，与NG组比较，HG+si-NC组中β-catenin...
