高效液相色谱外标法检测人血...平及单羟奥卡西平的血药浓度_王亮.pdf

作者简介:王亮,男,技师,主要从事药物浓度监测及相关代谢基因研究。论 著D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 6 7 2-9 4 5 5.2 0 2 3.0 4.0 1 1高效液相色谱外标法检测人血清中拉莫三嗪、卡马西平及单羟奥卡西平的血药浓度王 亮郑州大学附属洛阳中心医院医学检验科,河南洛阳 4 7 1 0 0 0 摘 要:目的 建立同时检测人血清中卡马西平、拉莫三嗪及单羟奥卡西平浓度的高效液相色谱外标法。方法 采用高效液相色谱外标法进行血药浓度测定,血清样品用甲醇去除蛋白,用C 1 8色谱柱(4.6 mm2 5 0.0 mm,5.0 m)分析,流动相为甲醇水溶液(其比例为6 04 0),流速为1.0 m L/m i n,柱温为3 5,检测波长为2 4 0 n m。同时考察该方法的专属性、标准曲线及最低检测限、精密度与回收率、稳定性及重复 性。结果 卡马西平、拉莫三嗪、单羟奥卡西平浓度分别在0.2 54.0 0 g/m L(Y=1 5 0 3 2.4X+2 2 9 1 8.4,r=0.9 9 6),0.2 54.0 0 g/m L(Y=1 7 2 4 9.7X+5 2 9 5 4.8,r=0.9 9 2)及0.7 51 2.0 0 g/m L(Y=6 2 6 8.6 5X+2 8 6 3 1.3,r=0.9 9 5)线性关系良好。卡马西平、拉莫三嗪、单羟奥卡西平的方法回收率均为9 5%1 0 6%,日内和日间精密度均5%。结论 该方法操作简便、准确、灵敏度高,可用于卡马西平、拉莫三嗪及单羟奥卡西平血药浓度监测。关键词:拉莫三嗪;卡马西平;单羟奥卡西平;高效液相色谱外标法;血药浓度中图法分类号:R 9 1 7文献标志码:A文章编号:1 6 7 2-9 4 5 5(2 0 2 3)0 4-0 4 8 1-0 4D e t e r m i n a t i o n o f c o n c e n t r a t i o n s o f l a m o t r i g i n e,c a r b a m a z e p i n e a n d m o n o h y d r o x y o x c a r b a z e p i n e i n h u m a n b l o o d b y e x t e r n a l s t a n d a r d H i g h P e r f o r m a n c e L i q u i d C h r o m a t o g r a p h y m e t h o d o f H P L CWANG L i a n gD e p a r t m e n t o f C l i n i c a l L a b o r a t o r y,L u o y a n g C e n t r a l H o s p i t a l A f f i l i a t e d t o Z h e n g z h o u U n i v e r s i t y,L u o y a n g,H e n a n 4 7 1 0 0 0,C h i n aA b s t r a c t:O b j e c t i v e T o e s t a b l i s h a n e x t e r n a l s t a n d a r d H i g h P e r f o r m a n c e L i q u i d C h r o m a t o g r a p h y m e t h o d t o d e t e r m i n a t e t h e c o n c e n t r a t i o n s o f l a m o t r i g i n e,c a r b a m a z e p i n e a n d m o n o h y d r o x y o x c a r b a z e p i n e s i m u l t a n e-o u s l y i n h u m a n b l o o d.M e t h o d s T h e p r o t e i n s i n t h e s e r u m w e r e r e m o v e d w i t h m e t h a n o l,t h e i r c o n t e n t s w e r e d e t e r m i n e d b y u s i n g t h e e x t e r n a l s t a n d a r d H i g h P e r f o r m a n c e L i q u i d C h r o m a t o g r a p h y m e t h o d.T h e m e t h o d w a s p e r f o r m e d o n t h e C 1 8 c o l u m n(4.6 mm2 5 0.0 mm,5.0 m).T h e m o b i l e p h a s e c o n s i s t e d o f m e t h a n o l-w a t e r(6 04 0),t h e f l o w r a t e w a s 1.0 m L/m i n a n d t h e d e t e c t i n g w a v e l e n g t h w a s 2 4 0 n m.T h e m e t h o d w a s i n-s p e c t e d i n t h e a s p e c t s o f s p e c i f i c i t y,l o w e r l i m i t o f q u a n t i f i c a t i o n,p r e c i s i o n,r e c o v e r y r a t e,s t a b i l i t y a n d r e p e a t-a b i l i t y.R e s u l t s T h e l i n e a r r a n g e o f l a m o t r i g i n e,c a r b a m a z e p i n e a n d m o n o h y d r o x y o x c a r b a z e p i n e w e r e f r o m 0.2 5 t o 4.0 0 g/m L(Y=1 5 0 3 2.4X+2 2 9 1 8.4,r=0.9 9 6),0.2 5 t o 4.0 0 g/m L(Y=1 7 2 4 9.7X+5 2 9 5 4.8,r=0.9 9 2)a n d 0.7 5 t o 1 2.0 0 g/m L(Y=6 2 6 8.6 5X+2 8 6 3 1.3,r=0.9 9 5)r e s p e c t i v e l y.T h e r a n g e o f e x t r a c-t i o n r e c o v e r y r a t i o n s w e r e a l l b e t w e e n 9 5%a n d 1 0 6%.T h e i n t r a a n d i n t e r-d a y p r e c i s i o n w e r e a l l l e s s t h a n 5%.C o n c l u s i o n T h e m e t h o d i s s h o w n t o b e s i m p l e,a c c u r a t e a n d s e n s i t i v e,w h i c h c o u l d b e a p p l i e d i n t h e d e-t e r m i n a t i o n o f c o n c e n t r a t i o n o f l a m o t r i g i n e,c a r b a m a z e p i n e a n d m o n o h y d r o x y o x c a r b a z e p i n e i n h u m a n b l o o d.K e y w o r d s:l a m o t r i g i n e;c a r b a m a z e p i n e;m o n o h y d r o x y c a r b a z e p i n e;e x t e r n a l s t a n d a r d H i g h P e r f o r m-a n c e L i q u i d C h r o m a t o g r a p h y m e t h o d;b l o o d d r u g c o n c e n t r a t i o n 癫痫俗称“羊角风”或“羊癫疯”,是由于大脑神经元高度同步化异常放电而导致短暂的大脑功能障碍的一种慢性疾病,临床表现具有发作性、短暂性、重复性和刻板性的特点。由于异常放电的起始部位、波及范围和传递方式的不同,癫痫发作的临床表现复杂多样,可表现为发作性运动,以及感觉、自主神经、意识、精神障碍,或兼有之。引起癫痫的发病原因多种多样,据统计,中国约有9 0 0万癫痫患者,其中5 0 0万至6 0 0万是活动性癫痫患者,该病已成为神经科仅次于头痛的第2大常见病1。拉莫三嗪是新型广谱抗癫184检验医学与临床2 0 2 3年2月第2 0卷第4期 L a b M e d C l i n,F e b r u a r y 2 0 2 3,V o l.2 0,N o.4痫药物,临床常用于顽固性癫痫的治疗。卡马西平主要通过降低细胞膜对N a+、C a2+的通透性,从而使细胞兴奋性下降,并增加氨基丁酸的抑制功能,阻止脑部异常电位活动向周围脑组织扩散,能阻止癫痫的发作,是临床常用的抗癫痫药物。奥卡西平是卡马西平的衍生物,在体内迅速转化为具有生物活性的代谢产物单羟奥卡西平而发挥作用2-4。由于上述3种药物口服吸收慢,药物代谢易受年龄、合并用药等因素的影响,导致治疗效果不佳或产生不良反应。因此,临床上需要监测药物浓度,并根据药物浓度进行药物疗效的评价,确定个体化给药方案。本研究建立了简便的高效液相色谱外标法可同时监测上述3种药物的血药浓度,现报道如下。1 材料与方法1.1 仪器与药品、试剂 L C-2 0 1 0 AHT高效液相色谱仪购自日本岛津公司。高速冷冻离心机5 4 2 4 R购自美国E p p e n d o r f公司;大容量S T 1 6-4 0离心机购自美国T h e r m o F i s h e r公司;旋涡混合器购自上海医科大学仪器有限公司;微量加样器购自美国E p p e n d o r f公司;KQ-3 0 0 D E数控超声波发生器购自昆山超声仪器有限公司;ME 1 0 4 E型分析天平购自梅特勒托利多集团。色谱级甲醇购自天津科密欧化学试剂有限公司。拉莫三嗪、卡马西平和单羟奥卡西平标准品由中国食品药品检定研究院提供。1.2 测定条件及标本处理1.2.1 色谱条件 色谱柱:岛津C 1 8色谱柱(4.6 mm2 5 0.0 mm,5.0 m);流动相:甲醇水=6 04 0;柱温:3 5;流速:1.0 m L/m i n;检测波长:2 4 0 n m;进样量:2 0 L。1.2.2 溶液配制 称取卡马西平、拉莫三嗪对照品各4 m g,加甲醇1 0 0 0 m L溶解,得到4 g/m L的卡马西平及拉莫三嗪标准液;称取单羟奥卡西平对照品1 2 m g,加甲醇1 0 0 0 m L得到1 2 g/m L的单羟奥卡西平标准液。标准液于4 下保存。1.2.3 标本处理 取血清标本2 0 0 L放置于1.5 m L离心管中,加入6 0 0 L甲醇(漩涡充分混匀后加入),1 5 0 0 0 r/m i n离心1 0 m i n,取上清液4 0 0 L