格雷夫斯病患者血清颗粒蛋白...17、IL-10相关性分析_宋秋玲.pdf

收稿日期2021-11-01修回日期2022-09-05第一作者简介宋秋玲，讲师，主要从事微生物和自身免疫性相关疾病诊治研究。*通信作者：代娇，实验师，E-mail：。格雷夫斯病（Graves disease，GD）是一类器官特异性自身免疫性甲状腺疾病，是甲状腺功能亢进的主要病因1。流行病学数据显示，GD 的发病率为0.50%2.30%，男性的发病率约为 0.50%，而女性的发病率则高达 3.00%左右2。GD 的主要特征为机体产生抗促甲状腺激素受体抗体（thyroid stimulatinghormone receptor antibody，TRAb），发挥类似促甲状腺素（thyroid stimulating hormone，TSH）的生物学效应，进而引发甲状腺功能亢进和弥漫性甲状腺肿3。虽然目前 GD 的发病机理并不清楚，但越来越多的研究证实促炎-抑炎免疫平衡的破坏可导致甲状腺淋巴细胞浸润以及 B 细胞活化，进一步分泌自身抗体，而这些自身抗体在 GD 病因学中扮演着重要的角色4。促炎-抑炎免疫平衡包括细胞因子和免疫细胞的失衡，其中细胞因子失衡包括白细胞介素-17（interleukin-17，IL-17）等促炎细胞因子异常上调，白细胞介素-10（interleukin-10，IL-10）等免疫抑制细胞因子异常下调；免疫细胞失衡包括近期研究较多的辅助性 T 细胞（helper T cell，Th）17/调节性 T 细胞（regulatory T cell，Treg）平衡破坏5。颗粒蛋白前体（progranulin，PGRN）是近期发现的一种免疫调控细胞因子，目前已有研究发现其在系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎及干燥综合征等多种自身免疫性疾病中存在异常表达6，机制学研究发现PGRN 可通过调控 Th17/Treg 以及促炎-抑炎细胞因子平衡参与机体免疫调控。据此推测 PGRN 可能在 GD 发生、发展中发挥着一定的作用，但目前关于PGRN 在 GD 中的研究报道甚少，本研究将探究 GD患者外周血中 PGRN 的表达变化及其与 IL-17、IL-10 的相关性。1对象与方法1.1研究对象将 2019 年 3 月至 2021 年 5 月于曲靖市第二人民医院内分泌科就诊且明确诊断为GD 的患者 39 例（GD 组）纳入研究，选取同期健康体检者 30 例作为健康对照（健康对照组）。GD 诊断主要依据甲状腺功能亢进的临床证据，临床典型症状为食欲增加但体质量下降、疲劳、热耐受不良、出格雷夫斯病患者血清颗粒蛋白前体表达情况及其与 IL-17、IL-10 相关性分析宋秋玲，代娇*（曲靖医学高等专科学校，云南曲靖655000）摘要目的：探究格雷夫斯病（GD）患者血清颗粒蛋白前体（PGRN）的表达情况及其与白细胞介素-17（IL-17）和白细胞介素-10（IL-10）的相关性。方法：采用酶联免疫吸附试验测定 GD 患者和同期健康体检者血清 PGRN、IL-17 和 IL-10 水平，并用Spearman 相关性分析法分析 PGRN 与 IL-17、IL-10 的相关性。结果：与健康体检者比较，GD 患者血清 PGRN、IL-17 水平显著升高，IL-10 水平显著降低，差异有统计学意义（P0.01）；Spearman 相关性分析结果显示，GD 患者血清 PGRN 水平与 IL-17 水平呈显著正相关，与 IL-10 水平呈显著负相关；接受131I 治疗的 GD 患者，与治疗前相比，血清 PGRN、IL-17 水平显著降低，IL-10 水平显著升高，差异有统计学意义（P0.01）。结论：GD 患者血清 PGRN 水平升高，且与 IL-17、IL-10 水平显著相关，提示其可能参与了疾病的发生、发展过程。关键词颗粒蛋白前体；格雷夫斯病；白细胞介素-17；白细胞介素-10中图分类号R446文献标志码A文章编号2096-2266（2023）02-0042-04DOI10.3969/j.issn.2096-2266.2023.02.007大理大学学报JOURNAL OF DALI UNIVERSITY第8卷第2期2023年2月Vol.8No.2Feb.202342汗增多及颤抖等；实验室依据为血清 TSH 下降，游离三碘甲状腺原氨酸（free triiodothyronine，FT3）、游离四碘甲状腺原氨酸（free tetraiodothyronine，FT4）和 TRAb 升高，其中 TSH6.30pmol/L，FT424.50 pmol/L，TRAb30.00 IU/mL。所有患者均为初诊患者且已排除自身免疫性疾病、其他慢性炎症性疾病或肿瘤等。GD 组中，男性 10 例，女性 29 例；平均年龄（36.8911.67）岁。健康对照组中，男性 7 例，女性 23 例；平均年龄（35.0210.58）岁。2 组人群在性别、年龄等方面差异无统计学意义（P 0.05），具有可比性。1.2标本处理采集清晨空腹静脉血 6 mL 分装于2 管中，室温静置 20 min 后 4 000 r/min 离心 10 min分离血清，其中一管用于血清 F T3、F T4、TSH 和TRAb 水平的测定，另一管分离血清冻存于-80 冰箱，用于血清 PGRN、IL-17 和 IL-10 水平的测定。1.3血清标本测定采用电化学发光法测定血清FT3、FT4、TSH 和 TRAb 水平；采用酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）测定血清 PGRN、IL-17 和 IL-10 水平，ELISA 试剂盒均购自美国 R&D 公司，所有操作步骤严格按照试剂盒说明书执行。1.4统计分析采用 SPSS 20.0 软件对实验数据进行统计分析，计量资料用（xs）表示，组间比较使用独立样本 t 检验；采用 Spearman 相关性分析法分析PGRN 与 IL-17、IL-10 的相关性，P0.05 为差异有统计学意义。2结果2.12 组人群甲状腺功能指标比较甲状腺功能测定结果显示，GD 组患者血清 FT3、FT4和 TRAb 水平显著高于健康对照组，血清 TSH 水平显著低于健康对照组，差异有统计学意义（P0.01）。见表 1。表 12 组人群甲状腺功能指标比较（xs）2.22 组人群血清 PGRN、IL-17 和 IL-10 水平比较与健康对照组比较，GD 组患者血清 PGRN 水平和促炎细胞因子 IL-17 水平显著升高，抑炎细胞因子IL-10 水平显著降低，差异均有统计学意义（P0.01）。见表 2。表 22 组人群血清 PGRN、IL-17 及 IL-10 水平比较（xs）注：与健康对照组比较*P0.01。2.3GD 组患者血清 PGRN 与细胞因子 IL-17、IL-10 的关系Spearman 相关性分析结果显示，GD 组患者血清 PGRN 水平与 IL-17 水平呈显著正相关（r=0.508，P=0.008），与 IL-10 水平呈显著负相关（r=-0.314，P=0.021）。2.4治疗前后患者血清 PGRN、IL-17 及 IL-10 水平变化比较GD 组患者接受131I 治疗 3 个月时再次测量其血清 PGRN、IL-17 及 IL-10 水平，与治疗前相比，血清 PGRN、IL-17 水平显著降低，IL-10 水平显著升高，差异有统计学意义（P0.01）。见表 3。表 3GD 组患者治疗前后血清 PGRN、IL-17 及IL-10 水平变化比较（xs）注：与治疗前比较*P0.01；此表中治疗前各项指标数据仅纳入 GD 组中完成随访的 12 例患者数据，故与表 2 中各指标数据存在差异。3讨论GD 在中国人群中的发病率为 0.25%1.09%，但在女性中的发病率高达 3.00%左右7。目前 GD的病因学机理尚不十分清楚，虽然涉及环境因素，但有研究8-9表明免疫功能紊乱在其中扮演着重要的角色。免疫细胞及相关细胞因子已成为 GD 致病机制领域研究的热点，本研究发现相较于健康人指标治疗前治疗后PGRN/（ng/mL）57.988.3528.729.45*IL-17/（pmol/L）9.924.724.722.62*IL-10/（pmol/L）7.933.8212.054.78*注：与健康对照组比较*P0.01。指标健康对照组GD 组FT3/（pmol/L）4.341.1231.8211.17*TSH/（IU/mL）2.211.040.010.01*FT4/（pmol/L）15.282.6765.6239.92*TRAb/（IU/mL）7.212.0242.954.67*指标健康对照组GD 组PGRN/（ng/mL）5.612.3456.6710.38*IL-10/（pmol/L）16.097.237.984.67*IL-17/（pmol/L）2.840.729.785.47*宋秋玲，代娇格雷夫斯病患者血清颗粒蛋白前体表达情况及其与 IL-17、IL-10 相关性分析总第 86 期第 8 卷43群，GD 患者血清 IL-17、IL-10 等细胞因子的表达水平存在异常现象。此外，Yao 等10的研究已证实GD 中异常的 Th2 细胞反应非常重要，但 Th2 细胞反应理论并不能完全解释 GD 展现出的所有现象。Li 等11的研究发现 CD4+T 淋巴细胞其他亚群（如Th17、Treg 及相关细胞因子）在自身免疫性甲状腺疾病中均存在异常现象，其中 Th17/Treg 免疫平衡紊乱已被证实在 GD 的致病机理中非常重要。Qin等12的研究结果发现 Th17 及其转录因子 RORt和效应细胞因子 IL-17 在 GD 患者中异常上调，Treg 细胞频率显著下降，在本研究中同样发现 IL-17 在 GD 患者中表达水平异常上调，而本研究中的IL-10 是 Treg 的直接效应细胞因子，故可间接表明GD 患者存在 Treg 细胞反应下调现象。GD 患者接受131I 治疗后，其促炎细胞因子 IL-17 水平较治疗前显著下降，抑炎细胞因子 IL-10 显著上调，这也提示经过治疗后患者 IL-17/IL-10 作用轴平衡有所恢复，免疫功能有所改善，然而何种因素参与调控Th17/Treg 免疫平衡紊乱尚不清楚。PGRN 是一类新发现的免疫调控性细胞因子，有研究13证实其可参与多个免疫信号通路的调控过程，它对 Th17/Treg免疫平衡的调控也引发了学者的关注。本研究在GD 中发现 PGRN 与 IL-17 呈正相关，与 IL-10 呈负相关，这也提示其可能通过调控 IL-17/IL-10 作用轴参与了 GD 的发病。这在既往研究中也有所证实，如 Wang 等14发现在椎间盘退行性病变患者中PGRN 异常增加且可调控 IL-17/IL-10 作用轴，进而抑制炎症；Li 等15在柯萨奇病毒 B3 感染患者中发现 PGRN 水平增加且可下调 Th17 细胞分化并抑制细胞因子 IL-17 的分泌；Wei 等16在结肠炎动物模型中发现 PGRN 可诱导 Treg 细胞分化及 IL-10 分泌发挥保护作用，这些结果都表明 PGRN 可能通过调控 IL-17/IL-10 作用轴进而在包括 GD 在内的多种自身免疫性炎症性疾病中发挥抑制炎症的生物学效应。本研究发现 PGRN 在 GD 患者中异常上调，与既往在多种自身免疫性疾病患者中发现的 PGRN表达异常的研究结果类似，如 Tanaka 等17在类风湿性关节炎患者中发现血清 PGRN 显著升高且与患者的临床疾病活动度密切相关，PGRN 可中和患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclearcell，PBMC）分泌白细胞介素-6 的能力18。体外实验也证实异常上调的 PGRN 在这些疾病中发挥抑炎效应，而之所以 PGRN 出现高表达可能是机体出现了代偿效应，治疗后 PGRN 显著下调的结果则提示其或可作为评估疾病严重程度以及预后评估的生物学标志物。本研究并未分析 PGRN