高效液相色谱-串联质谱法同...乙胺和金刚烷胺药物残留研究_张美.pdf

2023年第45卷第2期China Poultry Vol.45，No.2.2023食品安全食品安全高效液相色谱高效液相色谱-串联质谱法同时检测鸡蛋中串联质谱法同时检测鸡蛋中金刚乙胺和金刚烷胺药物残留研究金刚乙胺和金刚烷胺药物残留研究张美1，朱莉莎1，徐飘飘1，向文婷1，袁园园2，陈玉霜2，梁继翔2，彭大鹏2*（1.武汉工控检验检测有限公司，湖北武汉430030；2.华中农业大学，湖北武汉430070）摘要：为建立一种同时检测鸡蛋中金刚乙胺和金刚烷胺药物残留的高效液相色谱-串联质谱法，试验样品采用1.0%乙酸乙腈提取后，以0.1%甲酸水和甲醇溶液作为流动相进行梯度洗脱，经Waters XBridge C18Column分离，正离子多反应监测模式检测。结果显示：两种药物在0.5100 g/L范围内均呈良好的线性关系（R20.997）；盐酸金刚乙胺和盐酸金刚烷胺检出限均为0.3 g/kg，定量限均为1.0 g/kg；盐酸金刚乙胺平均回收率为87.43%98.64%，批内和批间变异系数均0.45%，盐酸金刚烷胺平均回收率为96.60%102.13%，批内和批间变异系数均0.22%。研究表明，建立的高效液相色谱-串联质谱法简便、灵敏、准确，适用于鸡蛋中金刚乙胺和金刚烷胺药物残留检测。关键词：鸡蛋；金刚乙胺；金刚烷胺；药物残留；HPLC-MS/MS中图分类号：S859.84文献标识码：A文章编号：1004-6364（2023）02-71-06收稿日期：2022-06-04；修回日期：2022-07-26基金项目：湖北省重点研发计划项目（2020BBB079）；国家自然科学基金项目（31772074）作者简介：张美（1988-），女，硕士研究生，研究方向为食品安全检测，E-mail：*通讯作者：彭大鹏（1977-），男，博士，教授，主要从事兽药残留与食品安全研究，E-mail：doi：10.16372/j.issn.1004-6364.2023.02.012Simultaneous Determination of Rimantadine and Amantadine Residues in Eggs UsingHigh Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometric MethodZHANG Mei1,ZHU Lisha1,XU Piaopiao1,XIANG Wenting1,YUAN Yuanyuan2,CHEN Yushuang2,LIANG Jixiang2,PENG Dapeng2*（1.Wuhan Industrial Control Testing Co.,Ltd.,Wuhan,Hubei 430030；2.Huazhong Agricultural University,Wuhan,Hubei 430070）Abstract：To establish a high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometric method for simultaneousrapid detection of rimantadine and amantadine residues in eggs,the sample was separated by a Waters XBridge C18Column withthe gradient elution of 0.1%formic acid water and methanol solution as mobile phase after ultrasonic extraction with 1.0%aceticacid acetonitrile,then detected by electrospray ionization tandem mass spectrometry in positive ion multi reaction monitoringmode.The results showed that good linear relationships and high correlation coefficients(R20.997)were obtained in the massconcentration range of 0.5 to 100 g/L for the drugs.The limit of detection for rimantadine hydrochloride and amantadine hydrochloride were both 0.3 g/kg,and the limit of quantification was 1.0 g/kg.The average recoveries of rimantadine hydrochlorideranged from 87.43%to 98.64%,and the intra-assay and inter-assay coefficients of variation were both 0.45%.The average re-712023年第45卷第2期China Poultry Vol.45，No.2.2023食品安全食品安全金刚乙胺和金刚烷胺对流感病毒具有良好预防和治疗效果，曾被广泛应用于人类和畜禽流感防治1。长期在动物中使用此类药物将会导致其在动物源食品中残留，并通过食物链的富集进入人体，损害人类神经系统，严重威胁人体健康1。金刚烷胺和金刚乙胺药物在2005年12月我国农业部颁布的第560号公告被禁止使用1-2。然而，部分从业人员食品安全意识不强，加之受暴利驱使，违法使用金刚烷胺和金刚乙胺药物的现象屡见不鲜。孙海新等3采用高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）检测103份鸡肉样品中发现19份金刚烷胺药物残留，其残留量为5.525.3g/kg。齐刚等4采用建立的液相色谱串联质谱法检测12批鸡蛋样品中发现有2批鸡蛋样品存在金刚烷胺药物残留。加强鸡蛋中金刚乙胺和金刚烷胺药物的残留检测，有助于彻底有效地实现该类药物的管控。目前，单独检测鸡肉5-8和鸡蛋9-12样品中金刚烷胺残留方法已被广泛报道。并且，在检测鸡肉和鸡蛋样品中金刚乙胺残留的方法大多能够同时检测金刚烷胺残留13-20。目前金刚乙胺和金刚烷胺的残留检测方法大多针对鸡肉组织，对于鸡蛋中金刚烷胺残留的检测方法报道相对较少，尤其鸡蛋中金刚乙胺药物残留的检测方法。本研究通过建立一种可同时检测鸡蛋中金刚乙胺和金刚烷胺药物残留的高效液相色谱-串联质谱法，为鸡蛋食品安全监测和相关研究提供了检测工具。1材料与方法1.1主要试剂与仪器盐酸金刚烷胺标准品、盐酸金刚烷胺D15（内标物）和盐酸金刚乙胺标准品购自中国兽医药品监察所。鸡蛋样品购于本地超市。固相萃取柱：混合阳离子固相萃取柱OasisMCX 60 mg/3 mL；色谱柱：Waters Acquity UplcBEH C18，150 mm 2.1 mm，1.7 m 和 WatersXBridge C18Column，2.1 mm 150 mm，3.5 m；0.22 m滤膜。LCMS-805型高效液相色谱-串联质谱仪（配置LC20ADXR2输液泵，DGU-20A3R在线脱气机，SIL20AXR自动进样器，CTO-20AC柱温箱，CBM-20A系统控制器，LCMS-8050三重四极杆质谱仪，LabSolutions Ver.5.91 色谱工作站），日本Shimadzu公司产品；CPA225D型分析天平，赛多利斯科学仪器有限公司产品；TGL-16B型冷冻高速离心机，上海菲恰尔分析仪器有限公司产品；KQ3200型超声波清洗机，昆山市超声仪器有限公司产品；N-EVAPTM111型氮吹仪，美国路易公司产品。1.2主要溶液配制1%乙酸乙腈溶液：量取1 mL乙酸于100 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度线，现配现用。2%盐酸水溶液：先量取50 mL的水置于100 mL容量瓶中，再缓慢加入2 mL盐酸后用水定容至刻度线。5%氨水甲醇溶液：先量取50 mL的甲醇置于100 mL容量瓶中，再缓慢加入5 mL氨水后用甲醇定容至刻度线。0.1%甲酸水溶液：先量取 500 mL 的水置于1 000 mL容量瓶中，再量取1 mL甲酸置于1 000 mL容量瓶中，用水定容至刻度线。0.1%甲酸水-甲醇溶液（9 1）：量取 90 mL0.1%甲酸水置于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度线。混合标准储备液（100 g/mL）：分别精密称取盐酸金刚烷胺和盐酸金刚乙胺标准品10 mg置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至100 mL容量瓶刻度线，上下颠倒混匀。混合标准中间液（100 ng/mL）：量取混合标准储备液100 L置于100 mL容量瓶，用甲醇溶解并定容至100 mL容量瓶刻度线，上下颠倒混匀。内标储备液（100 g/mL）：精密称量盐酸金刚烷胺D15对照品10 mg置于100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度线。内标工作液（1 g/mL）：精密吸取内标储备液1 000 L置于100 mL容量瓶，用甲醇溶解并定容coveries of amantadine hydrochloride ranged from 96.60%to 102.13%,and the intra-and inter-assay coefficients of variationwere both 0.22%.The results indicated that the established high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry method was simple,sensitive and accurate,and suitable for the detection of rimantadine and amantadine residues in eggs.Key words：egg;rimantadine;amantadine;drug residues;HPLC-MS/MS-722023年第45卷第2期China Poultry Vol.45，No.2.2023至100 mL容量瓶刻度线，上下颠倒混匀。1.3试验方法1.3.1检测样品的制备称取（20.02）g鸡蛋样品于50 mL离心管中，精确加入10 L的内标工作液，加入1%乙酸乙腈溶液10 mL，涡旋2 min混匀，10 000 r/min离心5 min，取上清液于新的50 mL离心管中。重复提取一次，合并两次上清液，加入正己烷 15 mL，涡旋1 min混匀，10 000 r/min离心10 min，弃去正己烷层后用于固相萃取柱净化。将固相萃取柱Oasis MCX固定在架子上，依次用3 mL甲醇和3 mL水过柱，然后将提取液流速控制在13滴/s，全部过滤；再依次用3 mL 2%盐酸水溶液和3 mL甲醇过柱，抽干3 min，用5 mL5%氨水甲醇洗脱，收集全部的洗脱液于10 mL离心管中；50 水浴条件下氮气吹干。加入1 mL0.1%甲酸水-甲醇溶液溶解，涡旋 30 s 混匀，过0.22 m滤膜后供HPLC-MS/MS测定。1.3.2仪器条件液相色谱条件：色谱柱为Waters XBridge C18Column（150 mm2.1 mm，3.5 m）；流动相：A：0.1%甲酸水溶液，B：甲醇；流动相梯度洗脱：01.0 min90%流动相A不变，1.02.5 min 90%的流动相A变化为 10%，2.55.0 min 10%的流动相 A 不变，5.05.5min10%的流动相A变化为90%，5.57.0min90%的流动相A不变。流速0.3 mL/min，进样量10 L；柱温40。质谱系统条件：电喷雾离子源ESI（+），雾化气流