狗头赤芍质量标准的提升研究_蔡远东.pdf

药物研究作者简介:蔡远东(1984)，男，汉族，本科，主管中药师，研究方向为中药检验和质量标准研究。E mail:425125976 通信作者:薛朝金(1975)，男，汉族，本科，副主任药师，研究方向为中药检验和质量标准研究。E mail:489089339 狗头赤芍质量标准的提升研究蔡远东薛朝金*李天佑何羽贵州省毕节市市场监督管理局检验检测中心，贵州毕节551700【摘要】目的:高效液相色谱(HPLC)法同时测定狗头赤芍中没食子酸和芍药苷的含量，为狗头赤芍质量标准的提升提供依据。方法:采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相为乙腈 0.1%磷酸溶液，梯度洗脱，流速为1 mL/min，检测波长为 230 nm，柱温为 30，进样量为 10 L。结果:线性和范围分别为，没食子酸:Y=22472X+2118.9，r=0.9999(n=5)，在 4.237 33.884 g 范围内线性关系良好;芍药苷:Y=13583X 12485，r=0.9999(n=5)在 5.197 41.578 g 范围内线性关系良好。没食子酸的平均回收率为 99.58%，SD 为 1.17%;芍药苷的平均回收率为99.84%，SD 为 0.45%。结论:建立的方法简便快捷、重复性良好、准确度较高、分离度较好，可用于狗头赤芍中没食子酸和芍药苷的含量测定。【关键词】狗头赤芍;HPLC 法;没食子酸;芍药苷;质量标准【中图分类号】927.2【文献标志码】A【文章编号】1007 8517(2023)02 0016 03esearch on the Improvement of Quality Standard of adix Paeoniae MaireiCAI YuandongXUE Chaojin*LI TianyouHE YuBi jie Inspection and Testing Center of Administration for Maeket Superrvision，Bijie 551700，ChinaAbstract:Objective Simultaneous determination of gallic acid and paeoniflorin in adix Paeoniae Aairei by high performance liq-uid chromatography(HPLC)，Provide a basis for the improvement of the quality standard of adix Paeoniae Aairei Methods Columnsusing octadecylsilane bonded silica as filler，The mobile phase is acetonitrile 0.1%phosphoric acid solution，gradient elution，The flow rate is 1mL/min，Detection wavelength is 230nm，The column temperature is 30，The injection volume is 10 L esultsLinear and range are，Gallic acid:Y=22472X+2118.9，r=0.9999(n=5)，The linear relationship is good in the range of 4.23733.884 g;Paeoniflorin:Y=13583X 12485，r=0.9999(n=5)，The linear relationship is good in the range of 5.197 41.578 g The average recovery rate of gallic acid was 99.58%，and the SD was 1.17%;The average recovery of paeoniflorin was99.84%，and the SD was 0.45%Conclusion The established method is fast，simple，with good repeatability，high accuracy andgood separation It can be used for the quality control of gallic acid and paeoniflorin in Padix Paeoniae AaireiKey words:adix Paeoniae Aairei;HPLC method;Gallic Acid;Paeoniflorin;Quality Standard狗头赤芍为毛茛科植物美丽芍药 Paeoniamairei Lvl.、草芍药 Paeonia obovata Maxim 的干燥根。春、秋二季采挖，除去根茎、须根及杂质，干燥。其功能为活血化瘀，凉血调经。用于瘀滞胸胁疼痛、腹痛、目赤、痛经、经闭、衄血、跌扑损伤1。美丽芍药主要分布于贵州毕节、威宁等地，草芍药主要分布在贵州麻江、锦屏、威宁、赫章、水城、遵义等地2 3。根据相关报道4，狗头赤芍主要化学成分为芍药苷、羟基芍药苷、苯甲酰芍药苷、芍药内酯苷(白芍苷)、芍药新苷、芍药苷元酮等。芍药苷具有保肝、保护神经细胞、保护缺血性的脑损伤及神经损伤的作用，还具有抗抑郁作用、抑制炎症作用5。没食子酸具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒等活性6。狗头赤芍收载于 贵州省中药材、民族药材质量标准(2003 年版)，标准只对其粉末进行了显微鉴别，不能全面反映药材整体质量。本文采用 HPLC 法同时测定狗头赤芍中没食子酸和芍药苷的含量，为61中国民族民间医药2023 年1 月第32 卷第2 期Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy，2023，Vol.32，No.2质量标准的提升提供依据。1仪器与试药1.1仪器Waters e2695 高效液相色谱仪，2998二极管阵列检测器。电子天平:MSE3.6P OCE DM，由赛多利斯科学仪器(北京)有限公司生产;电子天平:AY120、BX420H 由梅特勒 托利多仪器(上海)有限公司生产。洁康超声波清洗机(超声功率:360 W，超声频率:40 KHz)由东莞市洁康超声波设备有限公司生产。1.2试药没食子酸对照品(批号:110831 201602，含量以 90.8%计)、芍药苷对照品(批号:110736 202044，含量以 96.8%计)均由中国食品药品检定研究院提供。乙腈为色谱纯(美国 TEDIA 天地试剂公司)，实验用水为娃哈哈纯净水，稀乙醇:取乙醇(95%，天津市富宇精细化工有限公司)529 mL，加娃哈哈纯净水稀释至1000 mL，即得稀乙醇。1.3样品信息采集的样品经贵州省中药研究所陈德媛老师鉴定，为毛茛科植物草芍药 Paeoniaobovata Maxim。样品详见表 1。表 1样品信息表编号采集地收集方式01毕节市纳雍县张家湾镇采集加工，晒干02毕节市赫章县铁匠乡采集加工，晒干03六盘水钟山区大湾镇采集加工，晒干04毕节市威宁县小海镇采集加工，晒干05六盘水市水城区玉舍镇采集加工，晒干2方法与结果2.1色谱条件色谱柱:COSMOSIL Packed Column 5C18 MS II 4.6ID 250 mm;流动相为乙腈 0.1%磷酸溶液，梯度洗脱;流速为 1 mL/min;检测波长为 230 nm;柱温为 30;进样量:10 L。梯度洗脱程序见表 2，色谱图如图 1，各成分分离度皆大于 1.5。表 2梯度洗脱表T/min乙腈/%0.1%磷酸溶液/%0 25414968625 341418868234 351847825335 40475340 41474539641 554961.没食子酸;2.芍药苷;A.试剂空白;B.对照品溶液;C.供试品溶液图 1试剂空白、对照品、供试品高效液相色谱图2.2混合对照品溶液的制备精密称取对照品没食子酸、芍药苷适量，加稀乙醇制成每 1 mL 含没食子酸、芍药苷分别为 0.042 mg、0.052 mg 的混合对照品溶液，即得。2.3供试品溶液的制备取本品适量，粉碎，研细，取约0.5 g，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇 50 mL，称定重量，超声处理(功率:360 W，频率:40 KHz)30 min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得7。2.4线性关系考察精密量取“2.2”项下的混合对照品溶液1 mL、2 mL、4 mL、6 mL、8 mL，分别置10 mL 容量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度。分别精密吸取10 L，按“2.1”项下的色谱条件测定，每个样品进样2 次。以对照品浓度(X)为横坐标，峰面积积分值(Y)为纵坐标进行线性回归。得到没食子酸和芍药苷线性回归方程、相关系数，结果见表3。71中国民族民间医药2023 年1 月第32 卷第2 期Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy，2023，Vol.32，No.2表 3没食子酸和芍药苷线性范围及回归方程(n=5)分析物线性范围/g/mL线性方程相关系数/r没食子酸4.237 33.884Y=22472X+2118.90.9999芍药苷5.197 41.578Y=13583X 124850.99992.5精密度试验取“2.2”项下的混合对照品溶液，按“2.1”项下的色谱条件重复测定 5 次，分别计算 2 种成分的峰面积积分值。结果没食子酸、芍药苷峰面积的 SD 值分别为 0.5%、0.6%，表明仪器精密度良好。2.6重复性试验取毕节市赫章县铁匠乡采集的狗头赤芍药材，粉碎，研细，取粉末 5 份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，每份平行测定 2次，按“2.1”项下的色谱条件测定并计算各成分的含量。结果显示狗头赤芍中没食子酸、芍药苷的平均值分别为 0.31%，2.28%;SD 值分别为1.33%、1.84%。表明方法重复性良好。2.7稳定性试验取毕节市赫章县铁匠乡采集的狗头赤芍药材，粉碎，研细，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别在 0 h、2 h、4 h、8 h、12h、24 h、48 h 进样，按“2.1”项下的色谱条件测定并计算各组分峰面积的 SD 值，结果没食子酸、芍药苷峰面积的 SD 值分别为 0.50%、1.60%。说明供试品溶液在 48 h 内稳定性良好。2.8加样回收试验取毕节市赫章县铁匠乡采集的狗头赤芍药材，粉碎，研细，称取粉末6 份，每份约0.25 g，加入没食子酸、芍药苷浓度分别为 0.7258mg/mL、5.4015 mg/mL 的混合对照品溶液 1 mL，按“2.3”项下制备供试品溶液，按“2.1”项下测定并计算回收率。回收率平均值分别为99.58%、99.84%，SD 分别为1.17%、0.45%。结果见表4。表 4狗头赤芍中两种成分的回收率试验结果成分样品取样量/g样品量/mg加入量/mg测得量/mg回收率/%回收率平均值/%SD/%0.25100.72790.72581.4589100.720.25070.72700.72581.451599.82没食子酸0.25200.73080.72581.4597100.4399.581.170.25180.73020.72581.439597.730.25270.73280.72581.4598100.170.25420.73720.72581.452998.610.25105.35885.401510.7689100.160.25075.35245.401510.737899.70芍药苷0.25205.38025.401510.7898100.1599.840.450.25185.37595.401510.74259