DB37T 3126-2018禽波氏杆菌免疫荧光检测技术规范.pdf

DB37/T31262018是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。它是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）。4试剂或材料4.1禽波氏杆菌禽波氏杆菌P5株，购自中国兽医药品监察所。4.2抗体异硫氰酸荧光素(FITC)标记羊抗兔IgG。4.3生化试剂邻苯二胺(OPD)、聚乙二醇辛基苯基醚(Tri-tonX-100)、考马斯亮兰G-250、牛血清白蛋白(BSA)、不完全弗氏佐剂、丙酮（分析纯）、乙醇（分析纯）、甘油（分析纯）。5仪器设备5.1超净工作台。5.2恒温培养箱。5.3超速冷冻离心机。5.4蛋白电泳仪。5.5微量移液器(20L100L)。5.6电子天平。5.7超声波破碎仪。5.8旋涡混合器。5.9分光光度计(380nm780nm)。5.10荧光显微镜。6禽波氏杆菌外膜蛋白(OMP)的提取6.1将保存的禽被氏杆菌株接种于200L肉汤培采基中，37振荡培养过夜后，离心收集过夜培养的细菌。肉汤培养基配制按附录A执行。6.2用10倍体积的含有10 mM MgC1z的Tris-HC1(100mMpi7.8)缓冲液悬浮，超声波破碎（功率为500W、破碎时间60s、间隙60s、反复破碎10次)。Tris-HC1缓冲很配制按附录A执行。6.3通过1000g低速离心去除细胞核，上清液高速离心，10000g,20min6.4含全膜蛋白的沉淀，用同体积的含2%Triton X-100的Tris-MgC1z缓冲液溶解，京温下孵育30min降解内膜蛋白后，再进行100000g,30min超速离心。6.5沉淀用缓冲液再悬浮，置-20保存备用。6.6SDS-PAGE电泳检测禽波氏杆菌外膜蛋白OMP的分子量。7禽波氏杆菌OMP含量测定2