DB32T 4368-2022饲料中玉米赤霉烯酮的测定 时间分辨荧光免疫层析定量法.pdf

DB32/T4368-2022标记物浓度与样品中玉米赤霉烯酮的浓度无关。层析结束后，通过仪器检测计算试纸条T线和C线的时间分辨荧光强度比值和设定的标准曲线进行准确定量分析。5试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。5.1十二水磷酸氢二钠(NaHP012H0)。5.2磷酸二氢钾(KP01)。5.3氯化钾(KC1)。5.4氯化钠(NaC1)。5.5盐酸(HC1)。5.6甲醇(CH0H)。5.7蔗糖(C1H0)。5.8叶温-20(C5H102s)。5.9磷酸盐缓冲溶液：取2.178g磷酸氢二钠(5.1)入、0.144g磷酸二氢钾(5.2)、0.12g氯化钾(5.3)、4.8g氯化钠(5.4)，溶解于1L水中，用适量盐酸(5.5)调pH至6.87.2。5.10提取液：取800mL甲醇(5.6)用纯水定容至1L,用于样品提取。5.11稀释液：在1L磷酸盐缓冲溶液(5.9)中分别加入1.0g蔗糖(5.7)、2.0g叶温-20(5.8)混匀，用于样品上清的稀释。5.12玉米赤需烯酮标准溶液：浓度50mg/L。5.13玉米赤霉烯酮标准储备液：取玉米赤霉烯酮标准溶液(5.12)1mL于2L容量瓶中，用甲醇定容，混合均匀，制备成浓度为25mg/L的储备液。5.14ID卡：用于存储标准曲线和项目信息，直接插入荧光免疫定量分析仪使用。5.15玉米赤霉烯酮时间分辨荧光免疫层析定量试纸条（图1）：灵敏度不低于20g/kg。试纸条结构图如下：样只哲加样孔底板一加样孔样品垫结合垫结合垫T线T线NC膜NC谟C线C线-吸水垫吸水垫a)正视图b)侧视图图1玉米赤霉烯酮时间分辨荧光免疫层析定量试纸条结构示意图说明：结合垫包被荧光微球标记的玉米赤霉烯酮抗体，T线包被玉米赤霉烯酮封闭抗原，C线包被一抗。2