DB32T 3802-2020南美白对虾肝肠胞虫巢式聚合酶链式反应(PCR)检测方法.pdf
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DB32T
3802-2020南美白对虾肝肠胞虫巢式聚合酶链式反应PCR检测方法
3802
2020
南美
对虾
肝肠
胞虫巢式
聚合
链式反应
PCR
检测
方法
DB32/T38022020表1巢式第一步PCR反应预混物组成及反应条件25L体系50L体系试剂(L)(L)10PCR缓冲液（无Mg2)2.55MgCl(25mmol/L)24DNA模板0.51dNTP(10 mmol/L)12100ngL引物FI:5-TTGCAGAGTGTTGTTAAGGGTTT-312100 ng/HLR1:5-CACGATGTGTCTTTGCAATTTTC-32Tag DNA聚合酶(SUL)0.250.5火菌双蒸水16.7533.5扩增程序：95预变性5mim:9530s、5830s、6845s,30次循环：68终延伸5min。4保温产物人小：514bp7.3.2巢式第二步PCR的反应模板为稀释1000倍后的第一步PCR产物，反应预混物组成及反应条件见表2。表2巢式第二步PCR反应预混物组成及反应条件25L体系50L体系试剂(L)(L)10PCR缓冲液（无Mg2)2.55MgCl2(25mmol/L)24DNA模板（第一步PCR产生稀释1000倍）0.51dNTP(10 mmolL)12100ngL引物F2:5TGGCGGCACAATTCTCAAACA-312100 ng/HLR2:5-GCTGTTTGTCTCCAACTGTATTTGA-312Tag DNA聚合酶(5U/uL0.250.5火菌双蒸水16.7533.5扩增程序：95预变性5min:9530、645、6820s,20次循环：68终延伸5min。4保温。产物人小：148bp7.3.3甲壳类动物内参基因PC的反应模板为抽提的南美白对r样品DNA,其反应预混物组成及反应条件见表3。3
