DB32T 3762.10—2020新型冠状病毒检测技术规范 第10部分：微量血清中和试验.pdf

DB32/T3762.10-2020应符合新型冠状病毒实验室生物安全指南的要求，病毒培养包括病毒的分离、培养、滴定、中和试验等实验操作应当在生物安全三级实验室(B$L-3)的生物安全柜内进行。实验室开展相关活动前，应当报经国家卫生健康委批准，取得开展相应活动的资质。4.2操作人员资质及防护要求实验操作人员应经过生物安全培训并取得B$L3实验活动上岗证，在身体健康状态良好的情况下经实验室主任批准后方可开展活动。操作人员应根据新型冠状病毒实验室生物安全指南要求，按照BSL-3个人防护的要求进行防护。5设备与耗材5.1设备生物安全柜、离心机、倒置显微镜、涡旋器、冰箱、CO2培养箱等。5.2耗材N95及以上防护口罩、医用无纺布帽、护目镜、连体防护服、一次性PE手套、一次性于术衣、乳胶手套、防水靴套、微量移液器及各种配套带滤芯T即头、一次性半皿、离心管、96孔细胞培养板等。6试剂与材料6.1试剂6.1.1 Hanks溶液（每毫升含青霉素、链霉素各2000单位）6.1.2DMEM培养液（含10%胎牛血清）。6.1.3DMEM维持液（含2%胎牛血清）。6.1.4消化液(0.25%胰酶和0.025%EDTA-Na2混合液)。6.2材料6.2.1己滴定的新型冠状病春悬液.6.2.2阳性对照血清、阴性对照清（正常血清）及待检血清。6.2.3非洲绿猴肾传代细胞(VERO-E6)、入呼吸道上皮细胞、人肝癌细胞(Hh7)或其它敏感细胞。7试验技术要点7.1确定实验室质量控制标准的新型冠状病毒病毒株滴度，过少有三次独立的滴度水平测定结果，三次实验结果的滴度波动不应超过+/-0.5。7.2中和抗体滴度的判定是以比较病毒受免疫血清中和后的残存感染力为依活，因此没置对照实验十分重要。7.3采用固定病毒一稀释血清的方法进行微量中和试验。8操作步骤8.1实验前准备2