中药“阳发散”不同方法提取物的安全性与抗炎作用研究_葛雨秋.pdf

第 卷第 期 年 月广 州 化 工 .中药“阳发散”不同方法提取物的安全性与抗炎作用研究葛雨秋，沈 炀，侯 豹，韩佩宇（江南大学无锡医学院，江苏 无锡；南京中医药大学第二附属医院，江苏省第二中医院泌尿外科，江苏 南京）摘 要：探讨中药“阳发散”的抗炎消肿止痛的作用功效及不同提取物的安全性。本研究分别以水、乙醇和 乙醇提取“阳发散”粉末，采用 实验观察不同浓度“阳发散”对细胞活性的影响，并通过 实验检测不同浓度“阳发散”干预后细胞炎症因子表达水平的变化。结果表明，水提及 乙醇提“阳发散”不影响细胞活性；采用 构建阳性炎症模型后，发现水提“阳发散”可显著降低、以及 的 水平（.）。乙醇提“阳发散”可影响、和 的 水平（.）。本研究证实“阳发散”具有显著抗炎作用，为其临床应用提供实验室证据和理论依据。关键词：中药“阳发散”；提取方式；安全性；抗炎作用中图分类号：.文献标志码：文章编号：（）基金项目：无锡市科技发展资金项目（：）。第一作者：葛雨秋（），研究方向为预防医学。通讯作者：韩佩宇，研究方向为预防医学。“”，（，；，）：，“”.“”，.“”，.“”，.，“”（），.，“”（），.“”.：“”；我国在改革开放以前的制药水平较为落后，同时存在药品供给有限的问题。民间医生的中药制剂可以对市场上销售药品进行有效补充，发挥中医药的特色与优势。作为在江苏民间流传了几百年的“阳发散”药粉制剂，是江苏省非物质文化遗产，具有清热解毒、消肿止痛的功效，临床上可用于治疗红肿热痛等疮疡肿毒疾病，疗效确切。但“阳发散”的具体有效成分及相关作用机制尚不明确，亟需开展相关基础研究，探索其主要成分及作用机制，并进行安全性评价。本研究分别采用水、乙醇和 乙醇对“阳发散”进行提取，探究其有效成分的溶解性，并通过细胞实验，观察其安全性以及相关抗炎作用机制，为“阳发散”的临床应用提供实验室证据和理论基础。实 验.实验材料.中药复方“阳发散”包含芙蓉叶、雄黄、生黄柏、藤黄等中药。广 州 化 工 年 月.试剂 提取试剂盒、二甲基亚砜（），美 国 公司；培养基、胎牛血清、青霉素链霉素双联抗生素、.（质量分数）胰蛋白酶，美国 公司；试剂盒，日本 公司；试剂，北京索莱宝公司；其他常规试剂，无锡伟沃佰赛生物科技有限公司。.实验方法.“阳发散”干粉提取物的制备分别用水、乙醇和 乙醇对“阳发散”进行提取。具体提取流程如下：料液比为 ，药材浸泡 后，于 水浴回流 次进行提取，每次提取.，将提取液合并后过滤，减压旋蒸烘干获取“阳发散”水提取物干粉、乙醇提取物干粉和 乙醇提取物干粉。.“阳发散”溶液制备使用 溶解“阳发散”水提取物干粉配置成浓度分别为、的溶液；使用 分别溶解与 乙醇提取物干粉，均配置成浓度分别为.、.、的溶液，进行细胞实验。.细胞活力检测将稳定传代的小鼠单核巨噬细胞.细胞以 孔的密度接种于 孔板中，贴壁 后，加入不同提取方式的“阳发散”干粉溶液，处理 后，加入 试剂于 孵育 后，每孔加入 于 孵育 ，通过酶标仪于 波长处检测吸光度。.目的基因的 水平检测将.细胞以每孔.个接种于 孔板，贴壁 后，分别加入（）和不同浓度药物，处理 后提取总，进一步逆转录成，采用 法检测炎症因子相关基因、的 水平（引物序列见表）。.统计学分析每项实验重复进行 次，使用 .软件进行统计学分析。两组间比较采用 检验，多组间比较采用单因素方差分析（）。本研究以.判断差异有统计学意义。在图注中，我们使用或表示.，或表示.，或表示.，或表示.。表 目的基因的引物序列 基因名引物序列上游：下游：上游：下游：上游：下游：上游：下游：结 果.不同溶剂提取“阳发散”粉末后的溶解形态分别使用水、乙醇和 乙醇溶解“阳发散”粉末，结果如图 所示，三种溶剂均不能使粉末完全溶解，且溶解后呈现不同的颜色。图 不同提取方法溶解后“阳发散”形态.“”.不同提取方式的“阳发散”干粉溶液对细胞活力的影响将“阳发散”水提取物干粉、乙醇提取物干粉和 乙醇提取物干粉分别制成不同浓度的溶液后，采用 法检测细胞活性。结果显示，与阴性对照组相比，“阳发散”（水提）溶液对细胞活力无影响，低浓度“阳发散”（水提）可以促进细胞增殖（图）；浓度小于 “阳发散”（乙醇提）溶液不影响细胞活力（图）；此外，浓度小于 的“阳发散”（乙醇提）溶液对细胞活力也没有影响（图）。图 “阳发散”处理后细胞活力水平变化.“”.不同提取方式的“阳发散”干粉溶液对细胞 水平的影响采用脂多糖（）构建阳性炎症模型，结果显示，可以诱导细胞中 显著升高，与 “阳发散”（水提）溶液可降低 诱导升高的 水平（图）；同样，.与 “阳发散”（乙醇提）溶液也可显著降低 诱导升高的 水平（图）；而.、.、“阳发散”（乙醇提）溶液不能降低 诱导升高的 水平（图）。第 卷第 期葛雨秋，等：中药“阳发散”不同方法提取物的安全性与抗炎作用研究 图“阳发散”处理后细胞 水平变化.“”.不同提取方式的“阳发散”干粉溶液对细胞 水平的影响同样采用 构建阳性炎症模型，我们发现在 诱导下，细胞中 明显上升。同时，与 “阳发散”（水提）溶液可显著抑制 诱导升高的 水平（图）；此外，.与 “阳发散”（乙醇提）溶液对 诱导升高的 水平也有显著的抑制作用（图）；而.“阳发散”（乙醇提）溶液反而提高了 诱导升高的 水平（图）。图“阳发散”处理后细胞 水平变化.“”.不同提取方式的“阳发散”干粉溶液对细胞 水平的影响采用同样的方法，探讨“阳发散”对炎症相关基因 的影响。结果表明，可以导致细胞中 水平显著升高。与 “阳发散”（水提）溶液可显著降低 诱导升高的 水平（图），“阳发散”（乙醇提）溶液与“阳发散”（乙醇提）溶液对 诱导升高的 水平的抑制效果没有显著的统计学意义（图，图）。图“阳发散”处理后细胞 水平变化.“”广 州 化 工 年 月.不同提取方式的“阳发散”干粉溶液对细胞 水平的影响除了上述三个指标，我们还检测了不同提取方式的“阳发散”溶液对 的影响。构建阳性炎症模型可诱导细胞中 显著升高，.与 “阳发散”（乙醇提）溶液可显著降低 诱导升高的 水平（图），但是未观察到“阳发散”（水提）与“阳发散”（乙醇提）溶液对 诱导升高的 水平的抑制（图，图）。图“阳发散”处理后细胞 水平变化.“”结 论阳发散为江苏省非物质文化遗产，方中采用了芙蓉叶、雄黄、生黄柏、藤黄等中药成分。其中，芙蓉叶散热解毒、消肿排脓，现代药理学研究显示其具有丰富的黄酮类、甾体类等化学成分，有着良好的抗炎、镇痛、抑菌作用。此外，雄黄、黄柏、藤黄都具有解毒燥湿的功效，是中医消肿敛疮的常用药对，在临床中有着广泛运用，。四味中药合用，有着显著清热解毒，消肿排脓，生肌敛疮的功效。本研究通过水、乙醇和 乙醇三种提取方式，对“阳发散”进行有效成分提取并探讨其有效成分的安全性。我们通过体外实验发现水提“阳发散”可以促进细胞增殖，低浓度的 乙醇提“阳发散”溶液对于细胞活力无显著影响，进一步证实了“阳发散”的安全性。从现代医学的角度来看，疮疡肿毒的发生是由血管病变、神经病变、局部炎症感染等多种危险因素共同作用的病理结果。其中，炎症反应是疮疡肿毒病程进展中的重要环节。炎症反应一方面会导致组织细胞的变性、坏死，组织受损；同时，炎症会驱使免疫细胞分化，以便清除炎症因子，促进机体的修复。本研究通过检测 个常用（、和）促炎因子水平指标发现，“阳发散”对促炎因子有着显著抑制作用。我们研究表明，“阳发散”（水提）可通过抑制、以及 的水平，从而发挥抗炎作用，且在 与 浓度时效果 最 佳，而“阳 发 散”（乙醇提）主要影响炎症因子、和，在.与 浓度时效果最佳。这进一步证实了阳发散对于炎性细胞表现出的亢进免疫反应有着显著的抑制作用。这对加速疮疡肿毒的修复，促使组织的愈合有着重要保护作用。本研究从细胞水平探究了“阳发散”发挥抗炎作用的可能机制，并证实了“阳发散”提取物的安全性，为“阳发散”的临床应用提供了科学依据。参考文献 杨恩品，张耀圣.中医疮疡病学北京：科学出版社，：，.沈秋平.浅析影响中药外治疗效的因素现代中西医结合杂志，（）：.徐力群，朱银花.中药消炎散外敷治疗阳证肿疡 例中国中医急症，（）：.万静，陈晓兰，董娜娜，等.木芙蓉叶研究进展湖北民族大学学报（医学版），（）：.杨艳君，邹俊波，张小飞，等.基于粒子设计技术改善中药散剂口感与均一性问题 以珠黄吹喉散为例中国中药杂志，（）：.马华民.“冰雄黄柏膏”治疗疮疡中国社区医师，（）：.周扬.传统中药药理的研究方法临床合理用药杂志，（）：.于天一，梁学威，赵钢.疮疡号外敷治疗湿热毒盛型糖尿病足部溃疡的临床观察中国中西医结合外科杂志，（）：.徐沙，李云芬，刘荣均，等.艾叶提取物对肺炎支原体感染小鼠模型血清、和 水平的影响检验医学与临床，（）：.，.，（）：.，.，（）：.