52|2023年第43卷第1期总第300期|禽业篇猪细小病毒VP2蛋白重组杆状病毒的猪细小病毒VP2蛋白重组杆状病毒的构建表达与鉴定构建表达与鉴定丁国伟，李甜甜，徐萍，潘晨，王设市，魏荣荣，荣雪路，范娟丁国伟，李甜甜，徐萍，潘晨，王设市，魏荣荣，荣雪路，范娟*(扬州优邦生物药品有限公司，江苏扬州225008)(扬州优邦生物药品有限公司，江苏扬州225008)猪细小病毒(porcineparvovirus，PPV)能导致初产母猪及血清学阴性的经产母猪发生流产、不孕以及产死胎、木乃伊胎和弱仔等[1]。断奶仔猪多系统衰竭综合征(porcinepostweaningmultisystemicwastingsyndrome，PMWS)的主要发病原因是仔猪混合感染PPV与猪圆环病毒2型所致[2-3]。PPV具有极强的感染性和传播性，一旦猪群中的某一头猪感染PPV，猪群中其他猪在3个月内都可能会感染。另外，PPV难以被清除，尤其是在该病毒流行的猪场，由其引发的母猪繁殖障碍能持续几年甚至十几年之久[4]。PPV在环境中具有极强的存活能力，对pH和温度不敏感。除了对养猪企业的危害外，PPV也会严重危害生产猪细小病毒病疫苗的企业，在疫苗生产过程中一旦出现散毒或消杀不彻底的情况，将会极大影响后续生产。PPV属于细小病毒科细小病毒属，无囊膜，病毒粒子呈二十面体对称，直径介于20～25nm。PPV的基因组为单股负链DNA，5000bp左右，负链上没有开放阅读框(openreadingframe，ORF)，正链有2个ORF。5′端编码三种非结构蛋白NS1、NS2和NS3，其中NS1蛋白与基因复制有关，其他两个非结构蛋白的功能尚不清楚[5-7]。3′端编码三种结构蛋白VP1、VP2、VP3，其中VP3蛋白由VP2蛋白水解产生，VP1蛋白与病毒复制有关，VP2蛋白在整个病毒衣壳中占据主要地位，拥有4个Loop环，抗原位点主要集中在这几个环上，位于蛋白表面。PPV很多重要的线性表位在VP2蛋白上，病毒能够利用VP2蛋白自我组装成没有核酸、不能自我复制的病毒样颗粒中图分类号：S855文献标志码：A文章编号：1001-0769(2023)01-0052-06摘要：为构建一种能够用于开发猪细小病毒病毒样颗粒疫苗的猪细小病毒VP2蛋白的重组杆状病毒。根据GeneBank数据库中的猪细小病毒全基因组序列设计并合成了１对能扩增VP2基因的引物，采用PCR扩增猪细小病毒BJ-2株的VP2基因，并将其克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTA中，获得阳性质粒pFastBac-PPVVP2；测序后将该质粒转化到大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中，获得含有VP2基因的重组杆状病毒质粒Bacmid-PPVVP2；最后将获得的重组杆状病毒质粒Bacmid-PPVVP2转...
