DB13T 1127-2009中华鳖穿孔病防治技术规范.pdf

DB13/T1127-20096.2病理诊断6.2.1血细胞形态及生理指标病整血液中红细胞总数减少，低于4.510个/mm3,且形态不规则、破碎的、不成熟的红细胞增多。白细胞总数明显增多，高于1.510个/mm3,其中单核细胞明显增加，占白细胞总数的2%以上：嗜中性粒细胞明显增加，变形较大，部分细胞内特殊颗粒排列疏松，有的颗粒散落一边：部分淋巴细胞个体增大。6.2.2血液生化特性病鳖的血液中谷草转氨酶、葡萄糖、钙均值分别火于900IUL、5mmoL、2.2 mmol-L；血液氯、钠、尿素氮均值分别小于80mmoL、110mmoL、2.8mmoL。6.2.3器官组织显微观察特性6.2.3.1肺局部坏死，肺泡壁上皮细胞和毛细血管内皮细胞肿胀、变性，胞核固缩、碎裂乃至坏死解体。肺泡壁毛细血管破裂、出血。肺泡隔内血管充血，部分红细胞核消失、解体，仅留残骸：并有血浆渗出和嗜中性白细胞。肺泡内有许多组织渗出液、红细胞及嗜中性白细胞。肺组织间嗜中性白细胞人量浸润，核碎裂，坏死成脓细胞，肺组织呈局部化脓灶。6.2.3.2肝脏肝内黑色素增多，淤血；肝细胞混浊肿胀；肝血管充血，血浆渗出：进而细胞核碎裂，溶解，胞质水样变性，并有嗜中性白细胞浸润，白细胞核碎裂，坏死成脓细胞，形成化脓灶。6.2.3.3肾脏肾小管上皮细胞混浊肿胀。随着病情的发展，肾局部坏死，肾小管上皮细胞核碎裂、溶解，管腔内有嗜伊红的蛋白及红细胞。有大量红细胞从血管中渗出，嗜中性白细胞浸润，坏死，形成化脓灶。肾小球萎缩，囊腔相对扩大，并有嗜伊红的浆液渗出物。6.2.3.4脾脏脾包膜出血，脾小叶界限模糊，红髓扩大并聚集人量红细胞，白髓明显缩小。6.2.3.5肠肠壁充血、出血。肠腔内大量嗜中性白细胞浸润，核固缩、碎裂，变成脓细胞。6.2.3.6心心肌间有人量渗出液和红细胞；部分心肌纤维弯曲、断裂。6.3病原学诊断6.3.1嗜水气单胞菌6.3.1.1分离培养在无菌状态下，取病整的肺、脾、肝、血液等病料分别接种于普通肉汤培养基中（接种前加30gmL氨苄青霉素)，置2830培养6h8h,分别移植普通琼脂平板，再继续培养18h24h,挑选纯化单独大菌落分别移植厌氧培养基、M培养基、SS培养基、EMB培养基、RS培养基、血平板培养基，革兰氏染色，分离菌保存，按Bergeys系统细菌学分类鉴定和检索表程序对分离菌株进行鉴定。6.3.1.2鉴定菌体短杆状，直形略有弯，大小(0.60.9)m（1.02.0)m,两端钝圆，单个或两个相连，无英膜、无芽孢，极生单鞭毛，有运动性。结合生理生化特性鉴定分离菌为嗜水气单胞菌。6.3.1.3分离菌的人工感染将分离菌株用无菌生理盐水稀释到510个/ml5.510个/ml。之后取15g20g的健康幼鳖各10只进行腿部肌肉注射和腹甲划痕后涂抹，每只0.1ml,1h后分别置于不同的水族箱中，于(30士1)水温中饲养。对照组注射或涂抹相同剂量的生理盐水。67d后试验组幼整出现于自然病历相同的感染结果。并从其肝脏、肾脏、皮肤病灶分离出与接种菌相同的细菌。而观察期内对照整无异常表现。因此嗜水气单胞菌是穿孔病的致病菌。2