甘草减轻雷公藤多苷片所致肝损伤的作用机制_赵明洪.pdf

第 29 卷第 5 期2023年 3 月Vol.29，No.5Mar.，2023中国实验方剂学杂志Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae甘草减轻雷公藤多苷片所致肝损伤的作用机制赵明洪1，2，卢天明2，3，刘莉1，2，王启新2，杨通1，2，林娜2，邱崇2，钟田雨1*，郭秋岩2*，王继刚1，2，3（1.赣南医学院，赣州 341000；2.中国中医科学院 青蒿素研究中心，中药研究所，北京 100700；3.广西医科大学 公共卫生学院，南宁 530021）摘要 目的：探究肝脏药物代谢关键酶细胞色素 P4502D6（CYP2D6）、细胞色素 P4503A4（CYP3A4）在甘草水提物对急性肝损伤发挥保护作用的分子机制。方法：将健康雄性昆明种小鼠分为正常组、模型组、甘草水提物低、中、高剂量组（5、10、15 g kg-1d-1）及阳性药甘草酸二铵组（75 mg kg-1d-1），每组 10只。以预防给药 1周后采用雷公藤多苷片 270 mg kg-1单次灌胃诱导急性肝损伤模型，作用 18 h后采集样本。采用苏木素-伊红（HE）染色观察肝脏病理变化；生化法检测血清中肝功能指标丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、-谷氨酰转肽酶（-GT）、碱性磷酸酶（ALP）和总胆红素（TBIL）的含量及肝细胞氧化应激指标丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测肝脏药物代谢关键酶 CYP2D6、CYP3A4的 mRNA 及蛋白表达水平。结果：与正常组比较，模型组小鼠肝细胞出现显著水肿及炎性细胞浸润（P0.01），AST、ALT、-GT、ALP、TBIL 明显增高（P0.05），MDA 升高、SOD 降低（P0.01），CYP2D6和 CYP3A4的 mRNA 及蛋白表达量明显降低（P0.05）；正常组小鼠肝组织结构完整未见明显异常，与模型组比较，甘草水提物低、中、高剂量组和甘草酸二铵组可显著减轻肝细胞水肿程度及炎性细胞浸润程度（P0.01），AST、ALT、-GT、ALP、TBIL 的含量不同程度降低，MDA 降低（P0.01），SOD 升高（P0.01），CYP2D6和 CYP3A4的 mRNA 及蛋白的表达量不同程度升高。结论：甘草水提物对雷公藤多苷片所致急性肝损伤的保护作用，可能与降低血清中 AST、ALT、-GT、ALP、TBIL 的水平；抑制肝细胞中 MDA 升高，增加 SOD 酶活力；提高肝脏药物代谢关键酶 CYP2D6和 CYP3A4 的活性进而加速毒性物质代谢有关。关键词 雷公藤多苷片；肝损伤；甘草；细胞色素 P450中图分类号 R2-0；R33；R289；S859.82 文献标识码 A 文章编号 1005-9903（2023）05-0024-08doi 10.13422/ki.syfjx.20222039 网络出版地址 https:/ 2022-08-12 13:54:18Mechanism of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Alleviating Tripterygium wilfordii Polyglycoside Tablets-induced Liver InjuryZHAO Minghong1，2，LU Tianming2，3，LIU Li1，2，WANG Qixin2，YANG Tong1，2，LIN Na2，QIU Chong2，ZHONG Tianyu1*，GUO Qiuyan2*，WANG Jigang1，2，3（1.Gannan Medical University，Ganzhou 341000，China；2.Artemisinin Research Center，Institute of Chinese Materia Medica，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100700，China；3.School of Public Health，Guangxi Medical University，Nanning 530021，China）收稿日期 2022-02-26基金项目 国家自然科学基金青年基金项目（82104480）；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项（ZZ14-YQ-060）；青年人才托举工程项目（2021-QNRC2-B29）；北京市自然科学基金青年基金项目（7214287）第一作者 赵明洪，在读硕士，从事疾病的分子诊断及药物作用机制研究，E-mail：通信作者 *郭秋岩，博士，从事抗炎免疫中药药理研究，E-mail：；*钟田雨，博士，从事临床疾病的分子诊断，E-mail：24第 29 卷第 5 期2023年 3 月中国实验方剂学杂志Chinese Journal of Experimental Traditional Medical FormulaeVol.29，No.5Mar.，2023Abstract Objective：To investigate the protective effect of cytochrome P4502D6（CYP2D6）and cytochrome P4503A4（CYP3A4），key enzymes of drug metabolism in liver，on acute liver injury in water extract of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma（WEOGRR）.Method：Healthy male Kunming mice were divided into normal group，model group，WEOGRR low-，medium-and high-dose groups（5，10，15 g kg-1d-1）and positive drug group（diammonium glycyrrhizinate，75 mg kg-1d-1），with 10 in each group.One week after preventive administration，acute liver injury model was induced by single intragastric administration of 270 mg kg-1 Tripterygium Glycosides tablets，and samples were collected after 18 h.The pathological changes of liver were observed by hematoxylin-eosin（HE）staining.Serum liver function indexes including alanine aminotransferase（ALT），aspartate aminotransferase（AST），-glutamyl transpeptadase（-GT），alkaline phosphatase（ALP），and total bilirubin（TBIL）as well as the levels of oxidative stress indexes including malondialdehyde（MDA）and superoxide dismutase（SOD）in hepatocytes were determined by biochemical method.Real-time polymerase chain reaction（Real-time PCR）and Western blot were performed to detect the mRNA and protein expression levels of CYP2D6 and CYP3A4，respectively.Result：Compared with normal group，model group had significant hepatocyte swelling and inflammatory cell infiltration（P0.01），increased AST，ALT，-GT，ALP and TBIL（P0.05），elevated MDA and decreased SOD（P0.01）as well as down-regulated mRNA and protein expression levels of CYP2D6 and CYP3A4（P0.05）.Compared with the model group，the normal group had intact liver structure without obvious abnormality，and the WEOGRR groups and positive drug group presented alleviated hepatocyte swelling and inflammatory cell infiltration（P0.01），reduced AST，ALT，-GT，ALP and TBIL（P0.01），lowered MDA and increased SOD（P0.01）as well as up-regulated expression levels of CYP2D6 and CYP3A4（P0.01）.Conclusion：The protective effect of WEOGRR on acute liver injury induced by Tripterygium glycosides tablets may be related to reducing the contents of AST，ALT，-GT，ALP and TBIL in serum，inhibiting MDA and increasing the activity of SOD in liver cells，and enhancing the activities of CYP2D6 and CYP3A4，thus accelerating the metabolism of toxic substances.Keywords Tripterygium wilfordii polyglycoside tablets；liver injury；Glycyrrhizae Radix et Rhizoma；cytochrome P450肝脏具有分泌胆汁、参与代谢、生物转化、免疫调节等功能，然而，在生物转化过程中容易遭受外源性有毒物质侵害而导致肝损伤1，其中，药物不良反应是造成损伤主要原因之一，在住院患者中发病率高达 10%30%2。药物及其代谢产物对肝脏造成的损害称为药物性肝损伤（DILI）3。引起 DILI的药物众多，包括对乙酰氨基酚（APAP）、曲格列酮、异烟肼、利福平，以及天然药物雷公藤、黄药子、何首乌等4-5。这些药物因其肝损伤及其他脏器损伤危害而使用受限甚至退出市场。APAP 引起的肝毒性占美国所有急性肝衰竭病例的 46%6。糖尿病药物曲格列酮因肝损伤相继退出了欧美和日本市场，而异烟肼、甲氨蝶呤等因可能诱发 DILI等被美国食品药品管理局提出安全性警告7。近年来中草药引起肝损伤的报道屡见不鲜，如急性肝炎和肝融合性坏死8。中药引起的肝损伤中雷公藤位居前列，药物毒性和不良反应成为了其临床普遍使用的主要限制因素9。中药雷公藤是卫矛科植物，具有抗炎、抗肿瘤、免 疫 调 节、神 经 保 护 等 作 用10。雷 公 藤 多 苷 片（TGT）是