反向高效液相色谱法同时测定...烷胺片中三种主要组分的含量_杨旭.pdf

中国当代医药2023年1月第30卷第3期CHINA MODERN MEDICINE Vol.30 No.3 January 2023药物研究复方氨酚烷胺片是临床常用的感冒药物，主要由马来酸氯苯那敏、对乙酰氨基酚、咖啡因、盐酸金刚烷胺以及人工牛黄等多种成分制成的复方制剂1。研究显示，复方氨酚烷胺片对于感冒造成的头痛头晕、流涕鼻塞等临床症状有着较好的改善作用，此外对于流感病毒引发的流行性感冒也有着一定的缓解作用2-3。但是复方氨酚烷胺片也存在一定的不良反应，可能引发中毒，因此做好药品的质量控制对于保证用药疗效和安全有着重要意义4-5。目前针对复方氨酚烷胺片中的对乙酰氨基酚、咖啡因等成分主要采用亚硝酸银滴定法以及紫外分光光度法进行测定，但是测定的操作繁琐，且准确性不佳6-8。本次研究建立了复方氨酚烷胺片中三种主要组分（马来酸氯苯那敏、对乙酰氨基酚、咖啡因）的含量测定的反向高效液相色谱（reverse phase反向高效液相色谱法同时测定复方氨酚烷胺片中三种主要组分的含量杨旭张蕊吉林省药品检验研究院化学室，吉林长春 130033摘要目的建立复方氨酚烷胺片中三种主要组分含量测定的反向高效液相色谱（RP-HPLC）法。方法色谱柱选用 ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱（4.6 mm150 mm，5 m），流动相选用8515的戊烷磺酸钠-甲醇溶液（0.05 mol/L），流速及柱温分别设置为1.0 ml/min、30，检测波长选取216 nm，进样量设定20 l，进样测定复方氨酚烷胺片中马来酸氯苯那敏、对乙酰氨基酚、咖啡因的含量，并进行方法学考察。结果马来酸氯苯那敏在2.2542.90 mg/L 浓度范围内呈良好的线性关系（r=0.997 1），对乙酰氨基酚在 30.10526.71 mg/L 浓度范围内呈良好的线性关系（r=0.998 3），咖啡因在 4.5096.82 mg/L 浓度范围内呈良好的线性关系（r=0.998 9）。马来酸氯苯那敏、对乙酰氨基酚、咖啡因的加样回收率为分别为 98.49%（RSD=0.844%）、99.39%（RSD=0.607%）、99.70%（RSD=0.159%）。结论应用 RP-HPLC 测定复方氨酚烷胺片中三种主要组分的含量，具有较好的准确性和重现性，且方法简单迅速，可用于其主要组分的含量测定及质量控制。关键词复方氨酚烷胺；反向高效液相色谱法；含量；马来酸氯苯那敏；对乙酰氨基酚；咖啡因中图分类号 R927.2文献标识码 A文章编号 1674-4721（2023）1（c）-0061-04Contents of three main components in compound aminphenamine tabletswere determined simultaneously by reverse phase high-performance liquidchromatographyYANG XuZHANG RuiChemical Room,Jilin Institute for Drug Control,Jilin Province,Changchun 130033,ChinaAbstract Objective To establish a reverse phase high-performance liquid chromatography(RP-HPLC)method fordetermining the content of three main components in compound aminophamine tablets.Methods ZORBAX EclipseXDB-C18column(4.6 mm150 mm,5 m),8515 sodium pentane-methanol solution(0.05 mol/L),flow rate and columntemperature were set to 1.0 ml/min,30,detection wavelength selected 216 nm,sample intake set 20 L.The contents ofChlorpheniramine Maleate,Acetaminophen and Caffeine in compound aminophenidamine tablets were determined andinvestigated methodologically.Results Chlorpheniramine Maleate showed a good linear relationship(r=0.997 1)rangingfrom 2.25-42.90 mg/L,Acetaminophen in the 30.10-526.71 mg/L concentration range(r=0.998 3),and Caffeine in the4.50-96.82 mg/L concentration range(r=0.998 9).The recovery rates of Chlorpheniramine Maleate,Acetaminophen andCaffeine were 98.49%(RSD=0.844%),99.39%(RSD=0.607%),99.70%(RSD=0.159%),respectively.Conclusion UsingRP-HPLC to determine the content of the three main components of good accuracy and reproducibility,and can be used forits content determination and quality control.Key words Compound aminamine;Reverse high-performance liquid chromatography;Content;Flupheniramine Maleate;Acetaminophen;Caffeine61药物研究中国当代医药2023年1月第30卷第3期CHINA MODERN MEDICINE Vol.30 No.3 January 2023high-performance liquid chromatography，RP-HPLC）法。1仪器与试药1.1仪器选择安捷伦科技有限公司的 1200 型高效液相色谱仪及 1200 型可变波长检测器，上海越平科学仪器有限公司的 FA1004 型电子天平，G1314A 的自动进样器及沃特世科技（上海）有限公司（Waters）的 2695型 HPLC 色谱工作软件。1.2试药复方氨酚烷胺片由吉林省吴太感康药业有限公司提供（批号：20211112、20211203、20211210）。马来酸氯苯那敏、对乙酰氨基酚、咖啡因的对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号分别为 100047-201507、100018-201610、171215-201512）。甲醇为色谱纯，水为超纯水，戊烷磺酸钠等其余试剂为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱选用 ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱（4.6 mm150 mm，5 m），流动相选用 8515 的戊烷磺酸钠（磷酸调节 pH 至 3.0）-甲醇溶液（0.05 mol/L），流速及柱温分别设置为 1.0 ml/min、30，检测波长216 nm，进样量 20 l。2.2溶液制备2.2.1供试品溶液制备取 5 片复方氨酚烷胺片，先进行精密称定，然后将其研磨成细粉状，称取适量的细粉（相当于含 500 mg 的对乙酰氨基酚），加入 50 ml 的锥形瓶中，加入适量的流动相进行定容，搅拌均匀后量取 2 ml，并再加入适量的流动相定容至 50 ml 并摇匀即得最终的供试品溶液。2.2.2对照品储备液的制备先精密称取马来酸氯苯那敏 10.08 mg 置入 100 ml 量瓶中，加入流动相溶解定容，然后量取 20 ml 置入另一量瓶中，再加入对乙酰氨基酚、咖啡因各 253.12 mg、15.85 mg，使用流动相充分溶解后定容至 100 ml，制备成为对照品储备液。2.2.3阴性对照组溶液的制备根据复方氨酚烷胺片厂家的处方比例，精取除了三种测定组分以外的其他组分和辅料适量，按照供试品的制备方法制备成不含三种测定组分的阴性对照组溶液。3方法学考察3.1系统适应性考察取 20 l 的对照品溶液、复方氨酚烷胺片供试品溶液及阴性对照品溶液，按照上述“2.1”的条件分别注入色谱柱进行测定，经对三组溶液的色谱图进行比对分析，可见马来酸氯苯那敏、对乙酰氨基酚、咖啡因的色谱峰与复方氨酚烷胺片供试品溶液的其他组分能很好地分离，且阴性对照品溶液在马来酸氯苯那敏、对乙酰氨基酚、咖啡因的色谱峰的相应保留时间无色谱峰，提示其他组分及辅料对结果无干扰（图 1）。：阴性对照品溶液；：对照组溶液；：供试品溶液；a：马来酸氯苯那敏；b：对乙酰氨基酚；c：咖啡因图1色谱图分析3.2线性关系考察精密量取 0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 ml 的复方氨酚烷胺片对照品储备液，分别加入 50 ml 的量瓶中，加入适量 8515 的戊烷磺酸钠-甲醇溶液（0.05 mol/L）进行稀释定容。按上述制定的不同浓度对照品溶液分别量取 20 l按2.1中的色谱条件进样测定。根据测定成分的峰面积（Y）、浓度（Z）绘制标准曲线，结果显示马来酸氯苯那敏的线性回归方程为 Y=5.197Z+46.21，在 2.2542.90 mg/L 浓度范围内呈良好的线性关系（r=0.997 1），对乙酰氨基酚的线性回归方程为 Y=32.53Z+6.01，在 30.10526.71 mg/L 浓度范围内呈良好的线性关系（r=0.998 3），咖啡因的线性回归方程为Y=25.93Z+6.74，则在 4.5096.82 mg/L 浓度范围内呈良好的线性关系（r=0.998 9）。3.3精密度实验于 6 d 内，每天分别量取 2.0 ml 对照品储备液各1 份，加入 50 ml 量瓶经 8515 的戊烷磺酸钠-甲醇62中国当代医药2023年1月第30卷第3期CHINA MODERN MEDICINE Vol.30 No.3 January 2023药物研究溶液（0.05 mol/L）稀释定容。然后每次量取 20 l 对照品储备液按上述色谱条件进行重复进样测定，计算马来酸氯苯那敏、对乙酰氨基酚、咖啡因的含量。结果显示马来酸氯苯那敏、对乙酰氨基酚、咖啡因三种组分6 次测定的峰面积均比较接近（RSD 分别为 0.79%、0.37%、0.58%）。3.4重复性试验重复量取 6 份 20211112 批次的复方氨酚烷胺片供试品粉末，按照 2.2.1 方法制成 6 份复方氨酚烷胺片供试品溶液，分别量取 20 l 进行进样测定马来酸氯苯那敏、对乙酰氨基酚、咖啡因的峰面积，计算显示同批次复方氨酚烷胺片供试品 6 次重复测得的马来酸氯苯那敏、对乙酰氨基酚、咖啡因的峰面积均较为接近（马来酸氯苯那敏峰面积平均值为 25 934.17；对乙酰氨基酚峰面积平均值为 57 235.19；咖啡因峰面积平均值为 41 343.05，RSD 分别为 0.81%、0.57%、0.41%），具有较好的重复性。3.5稳定性试验量取 1 份 20211112 批号的复方氨酚烷胺片供试品粉末，按照 2.2.1 方法制备成复方氨酚烷胺片供试品溶液，然后放置于室温下，分别于放置的 0、2、4、6、8、12 h 时 6 个不同的时间点分别量取 20 l 复方氨酚烷胺片供试品溶液进行加样测定的马来酸氯苯那敏、对乙酰氨基酚、咖啡因的峰面积。结果 6 个不同的时间点的马来酸氯苯那敏、对乙酰氨基酚、咖啡因的峰面积均没有发生明显的变化（马来酸氯苯那敏峰面积平均值为