麸炒白术水提液对实验性功能...Cl--、K-+转运的影响_张敏.pdf

中华中医药杂志(原中国医药学报)2023年2月第38卷第2期 CJTCMP,February 2023,Vol.38,No.2 593 论著通信作者：唐旭东，北京市东城区东直门内南小街16号中国中医科学院，邮编：100700，电话：010-62835641，E-mail：麸炒白术水提液对实验性功能性腹泻脾虚证 大鼠结肠上皮Cl-、K+转运的影响张敏1，王凤云1，唐旭东2，薛红1，马金鑫3（1中国中医科学院西苑医院，北京 100091；2中国中医科学院，北京 100700；3北京大学医学部，北京 100191）摘要：目的：观察实验性功能性腹泻（FDr）脾虚证大鼠黏膜上皮离子转运的情况，及白术水提液对其上皮离子转运的影响途径。方法：将Wistar大鼠随机分为正常组和模型组，采用高乳糖饲料喂养叠加小平台站立的复合因素的方法造模，通过体外应用尤斯灌流装置，观察正常组和模型组大鼠的短路电流变化和白术水提液对大鼠远端结肠上皮离子转运所产生的短路电流的作用机制。结果：正常组与模型组的基础电生理特性没有显著性差异；60 mg/mL白术水提液能够引起两组大鼠黏膜上皮短路电流显著下降（P0.05），分别加入Na+通道阻断剂amiloride、Cl-/HCO3-交换体抑制剂DIDS后，两组大鼠的短路电流没有明显改变；采用非选择性Cl-、K+通道阻断剂，Na+-K+-2Cl-转运体抑制剂DPC、TEA、bumetanide后，两组大鼠的短路电流均显著受到抑制（P0.05）；在无Cl-、无Cl-/HCO3-的KHS中，白术水提液引起的短路电流均减小（P0.05），但在无HCO3-的KHS液中，短路电流差异无统计学意义。结论：白术水提液对FDr大鼠上皮离子转运的影响是通过调控顶膜侧上的Cl-通道、K+通道及基底膜侧Na+-K+-2Cl-转运体，影响Cl-的吸收、K+的分泌，从而调节结肠上皮的水和电解质的平衡。关键词：白术；功能性腹泻；离子转运；吸收分泌；短路电流基金资助：国家自然科学基金重点项目（No.81830118），国家自然科学基金面上项目（No.81873297），中国中医科学院中医药科技重大成果引导项目（No.ZZ13-ZD-02）Effects of Atractylodes macrocephala aqueous extract on colonic epithelial Cl-and K+ion transport in rats with experimental functional diarrhea in spleen deficiency syndromeZHANG Min1,WANG Feng-yun1,TANG Xu-dong2,XUE Hong1,MA Jin-xin3(1Xiyuan Hospital,China Academy of Chinese Medical Sciences,Beijing 100091,China;2China Academy of Chinese Medical Sciences,Beijing 100700,China;3Peking University Health Science Center,Beijing 100191,China)Abstract:Objective:To investigate the changes of mucosal epithelial ion transport in rats with functional diarrhea(FDr)spleen deficiency syndrome and the effect of Atractylodes macrocephala aqueous extract on its epithelial ion transport.Methods:The Wistar rats were randomly divided into a normal group and model group.The rat model was made by feeding high lactose feed with compound factors superimposed on small platform.Using Ussing chamber device in vitro,the changes of short-circuit current(Isc)in normal group and model group and the effect of Atractylodes macrocephala aqueous extract on ion transport in distal colonic epithelium of the two groups were observed.Results:There was no significant difference in basic electrophysiological characteristics between normal group and model group.The aqueous extract of Atractylodes macrocephala 60 mg/mL could significantly reduce the short-circuit current of mucosal epithelium in the two groups(P0.05).After adding Na+channel blocker,Cl-/HCO3-exchanger inhibitor amiloride and DIDS respectively,there was no significant change in Isc in the two groups.After using non selective Cl-,K+channel blockers,Na+-K+-2Cl-transporter inhibitors DPC,tea and bumetanide,the Isc of the two groups was significantly inhibited(P0.05);After replacing Cl-,Cl-/HCO3-from KHS solution,the Isc induced by Atractylodes macrocephala aqueous extract decreased(P0.05),but there was no significant difference in Isc after 内文1.indd 5932023/2/10 16:57:12中华中医药杂志(原中国医药学报)2023年2月第38卷第2期 CJTCMP,February 2023,Vol.38,No.2 594 replacing HCO3-from KHS solution.Conclusion:The effect of Atractylodes macrocephala aqueous extract on epithelial ion transport in and FDr rats may be through regulating Cl-channel,K+channel on parietal membrane and Na+-K+-2Cl-transporter on basement membrane,affecting Cl-absorption,K+secretion,so as to restore the banlance of water and electrolyte transport of colonic epithelium.Key words:Atractylodes macrocephala;Functional diarrhea;Ion transport;Absorption secretion;Short-circuit currentFunding:Key Program of National Natural Science Foundation of China(No.81830118),General Program of National Natural Science Foundation of China(No.81873297),Guided Program of Major Achievement in Science and Technology of Traditional Chinese Medicine of China Academy of Chinese Medical Sciences(No.ZZ13-ZD-02)功能性腹泻（funtional diarrhea，FDr）是指持续反复出现稀粪（糊状粪）或水样粪，不伴有腹痛或腹部不适症状的综合征1。胃肠动力异常、内脏高敏感、胃肠电生理紊乱、肠道微生态紊乱、胃肠激素分泌异常、遗传与环境因素、心理因素等2-3都可以导致疾病的发生，FDr虽然发病机制复杂，但最终都会导致肠道水电解质分泌和吸收的紊乱4-5，引起机体内外环境平衡的变化。目前，大部分的研究没有将FDr与肠易激综合征严格区分开，与肠易激综合征的发病机制研究相比，对于FDr的机制研究相对较少，仍需要研究者进一步深入探讨。在此基础上，本研究旨通过尤斯灌流装置，利用体外实验探讨白术水提液对FDr脾虚证大鼠结肠上皮离子转运的 作用。材料1.动物 SPF级雄性Wistar大鼠60只，89周龄，体质量220 g，由北京斯贝福实验动物科技有限公司提供，许可证号：SCXK（京）2018-0010。饲养条件：温度（232），湿度（655）%，12 h/12 h光暗循环（照明时间为8：00至20：00），自由饮食，所有动物实验程序均按照中国和国际指南和规定 进行。由中国中医科学院西苑医院伦理委员会（批号：No.2020XLA062-2）。2.药物与试剂 麸炒白术水提液（以下简称白术水提液），由中国中医科学院西苑医院药剂科制作，生药量为0.5 g/mL。阿米洛利（amiloride）（批号：101397945）、N,N-二甲基哌啶氯化物（DPC）（批号：10420372）、四乙基胺（TEA）（批号：78203474）、布美他尼（bumetanide）（批号：101532860）、4,4-二异硫氰酸基-2,2-二苯乙烯磺酸二钠（DIDS）（批号：1001958697）、NaCl（批号：101873395）、NaHCO3（批号：101386773）、KCl（批号：101872277）、MgCl2（批号：101440787）、KH2PO4（批号：101516358）、CaCl2（批号：101387197）、Glucose（批号：101516359）、Na-gluconate（批号：101863140）、K-gluconate（批号：1002472050）、MgSO4（批号：101440787）、Ca-gluconate（批号：1002312902），以上试剂均购自Sigma。50%高乳糖饲料由北京科澳协力饲料有限公司提供，合格证号：SCXK（京）2009-0012。3.仪器 尤斯灌流装置：VCC MC6型多道电压-电流钳装置（Physiologic Instruments公司）、Power Lab数据采系统（Physiologic Instruments公司）、HWS-24型电热恒温水浴槽（上海一恒）、TYXH-型漩涡混匀器（天悦电子）、PHBJ-260型手持式pH仪（上海仪电）。方法1.造模方法与分组 按随机数表法将60只Wistar大鼠分为正常组和模型组，每组30只。用50%高乳糖饲料喂养模型组大鼠14 d，同时每日18：00至次日8：00将大鼠