呋喃酚葡萄糖醛酸结合物在呋...体内的死后分布及死后再分布_文岩.pdf

法 医 学 杂 志 2022年 10月 第38卷 第5期呋喃酚葡萄糖醛酸结合物在呋喃丹染毒家兔体内的死后分布及死后再分布文岩1，2，韩昱哲1，龚铎1，解文凯1，吕晨曦1，孟宇珍1，张潮1，尉志文1，贠克明11.山西医科大学法医学院，山西 太原 030001；2.太原市公安局万柏林分局，山西 太原 030001摘要：目的 建立呋喃丹的家兔灌胃染毒致死模型，观察呋喃丹相代谢物呋喃酚葡萄糖醛酸结合物（carbofuran-7-phenyl glucuronic acid，Glu-7PH）在家兔体内的死后分布及死后再分布规律。方法 死后分布：对家兔使用 1/2LD50、LD50、2LD50呋喃丹灌胃染毒，染毒死亡家兔立即解剖，灌胃后 2 h仍未死亡家兔采用二氧化碳（CO2）吸入法处死后立即解剖，取心肌、心血、肝、脾、肺、肾、脑和右下肢肌肉。死后再分布：家兔用 4LD50呋喃丹灌胃染毒，仰卧位置于室温（15）条件下，分别于死后 0、12、24、48、72 h取心肌、心血、肝、脾、肺、肾、脑和右下肢肌肉。采用液相色谱-串联质谱（liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）法检测Glu-7PH含量。结果 死后分布结果显示，3个剂量组中，各组织中Glu-7PH含量差异存在统计学意义。死后再分布研究结果显示，心血、心肌、脾、肾、脑及右下肢肌肉中 Glu-7PH含量差异无统计学意义，肝、肺中Glu-7PH含量差异存在统计学意义。结论 家兔心肌、心血、肝、肺、肾、脑和下肢肌肉可作为Glu-7PH检测分析样本。Glu-7PH在家兔肝和肺中存在死后再分布现象。关键词：法医毒理学；呋喃酚葡萄糖醛酸结合物；死后分布；死后再分布；液相色谱-串联质谱；家兔中图分类号：DF795.1 文献标志码：A doi：10.12116/j.issn.1004-5619.2020.301204文章编号：1004-5619（2022）05-0601-05Postmortem Distribution and Postmortem Redistribution of Carbofuran-7-Phenyl Glucuronic Acid in RabbitsWEN Yan1,2,HAN Yu-zhe1,GONG Duo1,XIE Wen-kai1,L Chen-xi1,MENG Yu-zhen1,ZHANG Chao1,WEI Zhi-wen1,YUN Ke-ming11.School of Forensic Medicine,Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,China;2.Wanbailin Branch of Taiyuan Public Security Burean,Taiyuan 030001,ChinaAbstract：Objective To establish a carbofuran intragastric administration death model in rabbits,and to observe the postmortem distribution and postmortem redistribution of carbofuran-7-phenyl glucuronic acid（Glu-7PH）in rabbits.Methods The postmortem distribution:Rabbits were given an administration of 1/2LD50,LD50,2LD50 carbofuran.Dead rabbits were dissected immediately.Rabbits that had remained alive 2 hours were sacrificed by carbon dioxide（CO2）inhalation and dissected immediately.The myocardium,cardiac blood,liver,spleen,lung,kidney,brain and right hindlimb muscle were collected.The postmortem redistribution:After giving an administration of 4LD50 carbofuran,the myocardium,cardiac blood,liver,spleen,lung,kidney,brain,and right hindlimb muscle were collected at 0,12,24,48,and 72 h postmortem in supine position at 15 room temperature.The quantity of Glu-7PH was determined by LC-MS/MS.Results The postmortem distribution:Among the three dose groups,there were significant differences in the quantities of Glu-7PH in different tissues.The postmortem redistribution:There was no significant difference in the Glu-7PH quantities in cardiac blood,mycardium,spleen,kidney,brain and right hindlimb muscle,but there was a significant difference in the Glu-7PH quantities in the liver and lung.Conclusion The mycardium,cardiac blood,liver,lung,kidney,brain and hindlimb muscle of rabbits can be used as appropriate samples for Glu-7PH detection.However,it should be noted that Glu-7PH was redistributed postmortem in rabbit liver and lung.Keywords：forensic toxicological;carbofuran-7-phenyl glucuronic acid;postmortem distribution;postmortem redistribution;liquid chromatography-tandem mass spectrometry（LC-MS/MS）;rabbits 论著 基金项目：国家重点研发计划资助项目（2017YFC0803504，2018YFC0807403）；国家科技基础专项资助项目（SQ2015FY11400）；科技强警基础工作专项资助项目（2021JC33）作者简介：文岩（1981），男，硕士研究生，主要从事法医毒物动力学研究；E-mail：通信作者：贠克明，男，教授，博士研究生导师，博士后合作导师，主要从事法医毒理学和法医毒物分析研究；E-mail：引用格式：文岩，韩昱哲，龚铎，等.呋喃酚葡萄糖醛酸结合物在呋喃丹染毒家兔体内的死后分布及死后再分布J.法医学杂志，2022，38（5）：601-605.To cite：WEN Y，HAN Y Z，GONG D，et al.Postmortem distribution and postmortem redistribution of carbofuran-7-phenyl glucuronic acid in rabbitsJ.Fayixue Zazhi，2022，38（5）：601-605.601Journal of Forensic Medicine,October 2022,Vol.38,No.5呋喃丹是一种氨基甲酸酯类农药，中高毒性，主要通过呼吸道、消化道吸收入体，在体内可以与胆碱酯酶可逆性地结合，产生类胆碱能样反应1。呋喃丹还可作为干扰剂影响生物体内生殖激素及其他内分泌激素分泌水平2。呋喃丹入体后在肝细胞色素P450（cytochrome P450,CYP450）催化下发生相代谢反应，生成呋喃酚（carbofuran-7-phenol，7PH）、3-羟基呋喃丹（3-hydroxy carbofuran）、3-酮基呋喃丹（3-keto carbofuran）等相代谢产物3-4。7PH等相代谢物又会与内源性葡萄糖醛酸及硫酸等物质结合，生成相代谢产物，通过肾排出体外4-5。呋喃酚葡萄 糖 醛 酸 结 合 物（carbofuran-7-phenyl glucuronic acid，Glu-7PH）是呋喃丹的相代谢物6。呋喃丹常见于自杀或投毒案件7-8，在法医学实践中有时需要对呋喃丹是生前服毒还是死后染毒进行鉴定，而法医毒物动力学是解决毒物生前或死后入体难题的重要手段。目前，关于呋喃丹的研究主要集中在特异性生物降解菌株的筛选鉴定和对环境中呋喃丹原体及代谢物新型检测手段的建立上9-10，本课题组前期已经建立了生物检材中 Glu-7PH 的液相色谱-串 联 质 谱（liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）检测法11。本研究拟建立呋喃丹灌胃染毒的家兔动物模型，观察呋喃丹不同染毒剂量下 Glu-7PH 在大鼠体内的死后分布及死后再分布特点，为呋喃丹中毒案件的检材采集和法医学鉴定提供科学实验依据。1材料与方法1.1 仪器和试剂Agilent 1260 Infinity 高效液相色谱串联 6460 Triple Quad MS/MS（美国 Agilent公司），ET3301全自动氮吹浓缩仪欧陆科仪（远东）有限公司，Vortex-Genie 2涡旋振荡器（美国Scientific Industries公司），SC-3610低速离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司），A10 Milli-Q超纯水系统（美国Millipore公司）。乙腈（色谱纯，美国Sigma-Aldich公司），甲酸（色谱纯，上海阿拉丁生化科技股份有限公司），Glu-7PH标准品（上海美迪西生物医药股份有限公司）。超纯水由 A10 Milli-Q 超纯水系统制得，10%呋喃丹悬浮种衣剂（临汾海兰实业有限公司）。1.2 仪器分析条件1.2.1 色谱条件色谱柱为ZORBAX HILIC Plus（4.6 mm100 mm，3.5 m，美国 Agilent公司），柱温 20；流动相 A相为水，B相为乙腈（含0.1%甲酸溶液）；梯度洗脱0 min时V水 V乙腈=20 80，5 min内梯度递增至V水 V乙腈=40 60，保持1 min后，2 min内梯度递减至V水V乙腈=20 80；扫描时间为8 min；流速0.2 mL/min；进样5 L。1.2.2 质谱条件电喷雾离子源（electrospray ion source，ESI）采用负离子模式下多反应监测（multiple reaction monitoring，MRM）模式，Glu-7PH母离子m/z 339，碎裂能量94 V；子离子m/z 163，碰撞池能量（collision energy，CE）28 V；定量子离子m/z 113，CE 10 V。1.3 样品处理移取心血 1 mL 或称取器官组织 1 g，加入 1 mL水、6 mL 乙腈，涡旋混匀 1 min，4 放置 20 min 后，4 472g 离心 20 min，取上清液于 45 下氮气吹干，100 L水复溶，0.2 m