茯苓皮提取物对高尿酸血症小鼠的尿酸水平和肾脏的影响_赵梓童.pdf

海南医学院学报 2023，29（3）Journal of Hainan Medical University茯苓皮提取物对高尿酸血症小鼠的尿酸水平和肾脏的影响赵梓童1，年四辉1，孙绪强1，汪伟1，张青1，彭代银3，4，5，周凌云1，2（1.皖南医学院 药学院，安徽 芜湖 241002；2.皖南中草药活性成分筛选与再评价省工程实验室，安徽 芜湖 241002；3.安徽中医药大学药学院，安徽 合肥 230012；4.安徽道地中药质量提升协同创新中心，安徽 合肥 230012；5.安徽省中药方剂重点实验室，安徽 合肥 230012）摘要 目的：研究茯苓皮提取物对高尿酸血症（HUA）小鼠的降尿酸和肾脏保护作用。方法：用醇和水溶剂提取茯苓皮活性成分，用次黄嘌呤和氧嗪酸钾建立高尿酸血症模型，70只雄性昆明小鼠随机分为空白组、模型组（500 mg/kg次黄嘌呤+250 mg/kg氧嗪酸钾）、茯苓皮醇提物（PCE）高（388 mg/kg）、低（97 mg/kg）剂量组、茯苓皮水提物（PCW）高（96 mg/kg）、低（24 mg/kg）剂量组、苯溴马隆（BEN）组（7.5 mg/kg），分别给药治疗 16 d。末次给药后，收集 24 h尿量（UV），测定尿液中尿酸（UUA）、肌酐（UCr）；收集左右肾，观察左肾的形态及右肾的病理变化；测定血清中尿酸（SUA）、肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）；计算尿酸排泄分数（FEUA）和尿酸清除率（CUr）；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肾脏中阴离子转运蛋白 1（OAT1）、尿酸转运体 1（URAT1）、葡萄糖转运蛋白 9（GLUT9）、肿瘤坏死因子 （TNF-）和白介素 6（IL-6）含量。结果：与模型组比较，PCE 和 PCW 能增加 HUA 小鼠的 UUA、UCr、FEUA、CUr、OAT1（P0.05，P0.01）、降低HUA 小鼠的 SUA、SCr、BUN、URAT1、GLUT9、TNF-、IL-6（P0.05，P0.01）；改善 HUA 小鼠的肾脏形态及病理变化，且优于阳性药 BEN。结论：茯苓皮提取物对 HUA 小鼠具有降尿酸和肾脏保护作用，其作用可能与促进尿酸排泄，调节尿酸转运蛋白，降低炎症因子水平有关。关键词 茯苓皮；高尿酸血症；尿酸；肾损伤中图分类号 R285.5 文献标识码 A 文章编号 1007-1237（2023）03-0168-07Study on the effect of lowering uric acid and effect on the kidney of Poriae cutis in hyperuricemia miceZHAO Zi-tong1，NIAN Si-hui1，SUN Xu-qiang1，WANG Wei1，ZHANG Qing1，PENG Dai-yin3，4，5，ZHOU Ling-yun1，2（1.School of Pharmacy，Wannan Medicinal College，Wuhu 241002，China；2.Provincial Engineering Laboratory for Screening and Revaluation of Active Compounds of Herbal Medicines in Southern Anhui，Wuhu 241002，China；3.School of Pharmacy，Anhui University of Chinese Medicine，Hefei 230012，China；4.Synergetic Innovation Center of Anhui Authentic Chinese Medicine Quality Improvement，Hefei 230012，China；5.Anhui Province Key Laboratory of Chinese Medicinal Formula，Hefei 230012，China）Foundation Project：Anhui university collaborative project（GXXT-2019-043），Key project of Anhui university scientific research project（KJ2020A0608）Author：ZHAO Zi-tong，E-mail：.Correspondence to：ZHOU Ling-yun，Doctor，Associate Professor，E-mail：；PENG Dai-yin，Doctor，Professor，E-mail：.Received：2022-10-17 Revised：2022-11-28 JHMU，2023；29（3）：168-174View from specialist:It is creative,and of certain scientific and educational value.ABSTRACT Objective：To explore the pharmacodynamic and renal protective effects of Poriae cutis extract on hyperurice-mia（HUA）mice.Methods：The active components from the Poriae cutis were extracted with Alcohol solvent and aqueous sol-vent，HUA mice were established by hypoxanthine with potassium oxonate.Totally70 male Kunming mice were randomly divided DOI：10.13210/ki.jhmu.20221205.001网络出版地址：https：/ 安徽省高校协同项目（GXXT-2019-043），安徽省高校科学研究项目重点项目（KJ2020A0608）资助作者简介 赵梓童，E-mail：。通讯作者 周凌云，博士，副教授，E-mail：；彭代银，博士，教授，E-mail：。收稿日期 2022-10-17 修回日期 2022-11-28 网络出版时间：2022-12-05 16：51：31168赵梓童等.茯苓皮提取物对高尿酸血症小鼠的尿酸水平和肾脏的影响into normal，model（500 mg/kg hypoxanthine+250 mg/kg potassium oxonate），Poriae cutis ethanol（PCE）and water extract（PCW）with high and low dose（388 mg/kg and 97mg/kg），benzbromarone（BEN）groups（7.5 mg/kg），all mice were adminis-tered with corresponding medication for 16 d.After the last administration，collected the 24 h urine volume，the urine uric acid（UUA）and urine creatinine（UCr）were determined.The morphological changes of the left kidney were viewed and the pathologi-cal changes in right kidneys were observed by hematoxylin-eosin（HE）staining.The serum contents of uric acid（SUA），creati-nine（SCr）and urea nitrogen（BUN）were measured.Uric acid excretion index include fractional uric acid excretion（FEUA）and uric acid clearance rate（CUr）were calculated.The contents of OAT1，URAT1，GLUT9，TNF-and IL-6 in the kidney were detected by ELISA.Results：PCE and PCW could increase UUA，UCr，FEUA，CUr and OAT1（P 0.05，P 0.01），re-duce SUA，SCr，BUN，URAT1，GLUT9，TNF-and IL-6（P 0.05，P 98%）购于成都普思生物科技股份有限公司；尿酸、肌酐、尿素氮、试剂盒购自江苏南京建成生物技术研究所；小鼠阴离子转运蛋白 1（OAT1）、尿酸转运体 1（URAT1）、葡萄糖转运蛋白 9（GLUT9）Elisa试剂盒购自苏州卡尔文科技有限公司；小鼠肿瘤坏死因子 （TNF-）和白介素 6（IL-6）Elisa 试剂盒购自武汉爱博泰克生物技术公司。1.1.4动物SPF 级雄性昆明小鼠（2024 g），68周龄，购自河南斯克贝斯生物科技股份有限公司，169海南医学院学报 Vol.29 No.3 Feb.2023生产许可证编号：SCXK 2020-0005，动物被安置在（202）温度下，光照 12 h/d，并自由获取食物和水一周以适应实验环境。在本研究中，动物处理完全遵守国家科学技术委员会发布的 实验动物管理条例 和卫生部发布的 医学实验动物管理实施细则，且均按照皖南医学院伦理委员会的指导方针进行，并经皖南医学院研究伦理委员会批准，道德伦理编号：LLSC-2021-164。1.2方法1.2.1药物的制备取茯苓皮药材 2 900 g，加 12倍量 95%乙醇，65并加压条件下提取两次，每次两小时，合并两次滤液浓缩冻干，得 PCE，以土莫酸为对照品（纯度98%），高效液相色谱法测定含量为20.14%：精密称取土莫酸 2.00 mg，置于 5 mL 的容量瓶中，加入甲醇至刻度，超声摇匀，依次稀释成每毫升含土莫酸 0.4、0.32、0.26、0.21、0.17 mg 的对照品溶液，于 0.22 m 微孔滤膜过滤；精密称取冻干的茯苓皮醇提物粉末 0.10 g，置于 10 mL 的容量瓶中，加入甲醇定容，超声溶解，微孔滤膜 0.22 m 过滤，得 10 mg/mL 的供试品溶液；使用 Agilent ZORB-AX Eclise Plus C18column（2.1 mm 100 mm，1.8 m）色谱柱，Agilent UPLC guard 3PK（2.1 mm 5 mm，1.8 m）预柱，以 0.1%甲酸水和乙腈溶液为流动相，水相与有机相的比例见表 1，流速 0.3 mL/min，进样量 3 L，柱温 30，检测波长 210 nm；以土莫酸浓度为横坐标，峰面积为纵坐标得标准曲线方 程 为 y=8054.1x+28.396（R2=0.9991），将 茯 苓皮醇提物峰面积代入后并计算其含量，重复三次含量平均值为 20.14%。醇提后的茯苓皮烘干后称重 2 500 g，加 10倍量水，其他条件同醇提物的制备，得 PCW，采用苯酚-硫酸比色法测得茯苓皮水提物多糖含量为 30.40%：精密称定葡萄糖对照品 1.04 mg，加超纯水溶解并定容至 10 mL，混匀，即得 0.10 mg/mL 的标准葡萄糖溶液；精密称取茯苓皮水提物冻干粉末 1.50 mg，置于 10 mL 容量瓶中并用超纯水定容，混匀即得0.15 mg/mL的供试品溶液；稀释对照品溶液使其浓度分别为 100、80、60、40、20、10 g/mL，各取 200 L加入试管中，然后在每只试管中加入 5%苯酚溶液200 L，涡旋后加入浓硫酸 1 mL，混匀，冷却至室温