生物技术进展生物技术进展2023年第13卷第1期83~89CurrentBiotechnologyISSN2095-2341■■■■■■■■■■■■研究论文研究论文Articles转基因抗虫作物鉴定质粒标准分子的构建与应用王颢潜1，黄炎2，3，石雨婷4，朱鹏宇2，5，谢宇宙2，黄春蒙2，卢小雨6，付伟2，5*1.农业农村部科技发展中心，北京100176；2.中国检验检疫科学研究院，北京100176；3.北京卫生职业学院，北京101149；4.中国标准化协会，北京100048；5.三亚中国检科院生物安全中心，海南三亚572025；6.深圳海关动植物检验检疫技术中心，广东深圳518038摘要：苏云金芽胞杆菌基因是转基因抗虫作物中通用的外源功能基因，在绝大多数抗虫转基因作物中均有存在，然而Bt基因检测标准样品的缺乏却限制了我国转Bt基因抗虫作物检测工作的发展。为了弥补传统基体标准样品的缺失，首先将Cry1Ab、Cry1Ac、Cry3A3种常用Bt外源基因克隆到pUC57质粒上，通过测序、酶切和qPCR等技术对质粒的序列和扩增功能进行了验证，然后对扩增效率和实际应用情况加以测试，评价其转基因检测的适用性，构建了质粒标准分子。结果显示，制备的质粒标准分子测序结果与靶标序列完全符合，酶切结果、qPCR扩增结果和扩增效率等均符合预期，在Cry1Ab、Cry1Ac、Cry3A基因特异性检测中的应用符合阳性对照要求，表明制备的阳性质粒标准分子能够作为转Cry1Ab、Cry1Ac、Cry3A基因qPCR基因特异性检测的阳性标准样品。关键词：转基因；Bt抗虫基因；质粒标准分子；基因特异性检测；qPCRDOI：10.19586/j.2095⁃2341.2022.0163中图分类号：S476.2，Q78文献标志码：AConstructionandApplicationofReferencePlasmidsforDetectionofTransgenicInsect-resistantCropsWANGHaoqian1，HUANGYan2，3，SHIYuting4，ZHUPengyu2，5，XIEYuzhou2，HUANGChunmeng2，LUXiaoyu6，FUWei2，5*1.DevelopmentCenterforScienceandTechnology，MinistryofAgricultureandRuralAffairs，Beijing100176，China；2.ChineseAcademyofInspectionandQuarantine，Beijing100176，China；3.BeijingHealthCenterAcadamy，Beijing101149，China；4.ChinaAssociationforStandardization，Beijing100048，China；5.ChineseAcademyofInspectionandQuarantineCenterforBiosafety，HainanSanya572025，China；6.AnimalandPlantInspectionandQuarantineTechnologyCentre，GuangdongShenzhen518038，ChinaAbstract：TheBacillusthuringiensisgeneisauniversalforeignfunctionalg...
