多指标成分测定筛选冰白含漱液提取工艺_高颖.pdf

第 39 卷第 2 期2023 年 2 月长春中医药大学学报Journal of Changchun University of Chinese MedicineVol.39 No.2Feb.2023156DOI:10.13463/ki.cczyy.2023.02.010多指标成分测定筛选冰白含漱液提取工艺高 颖1，刘 乐1，朱 明1，李旭辰2，韩文静2，杨 涛3，柳成林1*（1.联勤保障部队第 964 医院，长春 130021；2.长春中医药大学药学院，长春 130117；3.第 93313 部队，长春 130062）摘要：目的 建立冰白含漱液的多指标含量测定方法，并对其提取工艺进行考察。方法 采用 HPLC 测定冰白含漱液中黄柏碱、药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、4-（葡糖糖氧基）-肉桂酸葡萄糖氧基苄酯、dactylorhinA、1，4-二4-（葡萄糖氧）苄基-2-异丁基苹果酸酯的含量。色谱条件：由于指标成分极性不同，流动相分别为乙腈：0.05 molL-1磷酸二氢钾（50:50）每 100 mL 加十二烷基硫酸钠 0.4 g，pH=4（A）和水（B）梯度洗脱；0.1%磷酸水为（A），乙腈（B）梯度洗脱，流速 1.0 mLmin-1，进样量 10 L；采用 C18 色谱柱（4.6 mm250 mm，5 m），柱温为室温，检测波长为220 nm、283 nm、254 nm。通过正交实验设计考察提取次数、溶剂用量、提取时间对冰白含漱液中各指标提取工艺的影响。结果 冰白含漱液最佳的提取工艺为 6 倍量水，提取 3 次，每次 2 h。结论 本研究建立的冰白含漱液多指标含量测定方法简便、准确、重复性好；优选的提取工艺稳定可行。关键词：冰白含漱液；黄柏；白及；高效液相色谱法中图分类号：R284.2 文献标志码：A 文章编号：2095-6258(2023)02-0156-04Multi-index component determination and screening of the extraction process of Bingbai gargleGAO Ying1,LIU Le1,ZHU Ming1,LI Xuchen2,HAN Wenjing2,YANG Tao3,LIU Chenglin1*(1.The 964th Hospital of the Joint Logistic Support Force,Changchun 130021,China;2.School of Pharmacy,Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130117,China;3.The 93313rd Army,Changchun 130062,China)Abstract:Objective To establish a multi-index determination method for the content of Bingbai gargle and investigate its extraction process.Methods The contents of berberine,jatrorrhizine,palmatine hydrochloride,berberine hydrochloride,4-(glucosoxy)-glucosoxybenzyl cinnamate,dactylorhinA,1,4-bis4-(glucoseoxy)benzyl-2-isobutylmalate in Bingbai gargle were determined by HPLC.Chromatographic conditions:Due to the diff erent polarity of the index components,the mobile phases were acetonitrile:0.05 molL-1 potassium dihydrogen phosphate(50:50),added with 0.4 g sodium dodecyl sulfate per 100 mL,pH=4(A)and water(B),gradient elution;0.1%phosphoric acid water(A),acetonitrile(B),gradient elution at a fl ow rate 1.0 mLmin-1,with the sample size at 10L;C18 chromatographic column(4.6 mm250 mm,5 m),at the room temperature and the detection wavelength at 220 nm,283 nm and 254 nm.The eff ects of extraction times,solvent dosage and extraction time on the extraction process of each index in Bingbai gargle were investigated by the orthogonal experimental design.Results The best extraction process of Bingbai gargle was 6 times of water,for 3 times and 2 hours each time.Conclusion The multi-indicator content determination method of Bingbai gargle established in this study is simple,accurate and reproducible,which is stable and feasible as an optimized extraction process.Keywords:Bingbai gargle;amur cork-tree;common bletilla rubber;high performance liquid chromatography基金项目：吉林省中医药科技项目（2021104）作者简介：高 颖（1975），女，博士，副教授，主要从事口腔医学临床及基础研究*通信作者：柳成林，男，主治医师，电子信箱-第 39 卷第 2 期2023 年 2 月长春中医药大学学报Journal of Changchun University of Chinese MedicineVol.39 No.2Feb.2023157 随着人类生活水平不断提高，饮食结构发生改变的同时忽略了对口腔护理的关注，使得牙齿频繁出现问题，以及生活压力过大导致口腔溃疡等问题，都为人们的生活带来极大的不便。口腔异味、牙龈出血、牙齿敏感、口腔溃疡等问题，近些年来已经成为一个较为严重的公共卫生问题1。冰白含漱液处方由黄柏、白及、冰片三味中药组成，主要用于抑制口腔内的细菌、抗过敏、预防口臭、清新口气等。现代药理学研究和临床研究证实黄柏的水煎液具有免疫调节作用2，其中小檗碱对真菌也有较强抑制作用；白及的有效成分具有促进伤口愈合、抗炎、抗菌等作用3。本研究对处方中的有效成分进行测定。1 仪器与试药1.1 仪器 高效液相色谱仪（型号：LC-20AT 日本岛津，SPD 检测器）、超声波清洗器 型号：TP-300 天鹏电子新技术（北京）有限公司。1.2 试药 标准品：黄柏碱、B12、DactylorhinA、B14 购于成都普思生物科技有限公司（规格：每支20 mg，批号：ps000447、ps012009、ps011099、ps012643）；药根碱、巴马汀、盐酸小檗碱购于中国食品药品生物制品检定院（规格：每支 20 mg，批号：0733-200005、0732-200005、110713-200911）。2 方法与结果2.1 黄柏多指标含量测定方法的建立2.1.1 色谱条件 1）色谱柱：采用C18色谱柱（4.6 mm250 mm，5 m）；2）流动相：乙腈：0.05 molL-1磷酸二氢钾（50:50）每 100 mL 加十二烷基硫酸钠 0.4 g，pH=4（A）和水（B），梯度洗脱（0 12 min，90%100%A；12 16 min，100%A；16 29 min，100%90%A；29 50 min，90%A；50 min，90%A），流动相 B 为 100%-A；3）检测波长：283 nm、254 nm；4）柱温：室温；5）流速：1.0 mLmin-1；6）进样量：10 L。2.1.2 溶液的配制2.1.2.1 对照品储备液 精密称取黄柏碱、药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱对照品分别为 2.66 mg、1.08 mg、8.29 mg、8.25 mg，甲醇制备浓度分别为 0.532 mgmL-1、0.216 mgmL-1、1.658 mgmL-1、1.650 mgmL-1储备液。2.1.2.2 混合对照品溶液 精密吸取黄柏碱、药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱对照品储备液，制成浓度分别为 133.0 gmL-1、54.0 gmL-1、414.5 gmL-1、412.5 gmL-1的混合对照品溶液。2.1.2.3 供试品溶液 按处方量，称取黄柏 15 g，白及 15 g，置于煎药锅中，煎煮 3 次，8 倍量水，每次 2 h，过滤得滤液，合并 3 次所得滤液，浓缩到适量体积，即得。2.1.3 黄柏多指标含量测定的方法学考察2.1.3.1 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL、10.0 mL、12.0 mL、14.0 mL、16.0 mL，液相色谱仪检测。绘制标准曲线，计算回归方程，结果见表 1。表 1 黄柏四个成分线性关系考察成分名称回归方程r线性范围/ug黄柏碱Y=928.82X+12 7490.999 9 532.8 2 131.2药根碱Y=3 151.6X+21 6910.999 8216.0 814.0盐酸巴马汀Y=2 566.5X+130 045 0.999 2 1 657.6 6 630.4盐酸小檗碱Y=2 430.5X+92 6140.999 4 1 651.2 6 604.82.1.3.2 仪器精密度试验 取同一对照品溶液，精密吸取 10 L，于不同时间、不同仪器、不同人员分别测定，连续进样 6 次，记录图谱。黄柏碱、药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱峰面积的 RSD 值分别为0.71%、0.69%、0.73%、0.77%。RSD 平均值都小于 1%。2.1.3.3 稳定性考察 精密吸取供试品溶液 10 L，按“2.1.1”条件在 0 h，2 h，4 h，6 h，8 h，10 h，12 h 进样，记录色谱图，测得峰面积。结果黄柏碱、药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱峰面积的 RSD 值分别为 2.50%，1.41%，0.65%，0.61%。2.1.3.4 重复性考察 同一批次药材按“2.1.2.3”制备供试品溶液，再按“2.1.1”色谱条件测定，记录色谱图，测定峰面积。结果黄柏碱、药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱峰面积的 RSD 值分别为 1.25%，2.55%，1.50%，1.20%。2.1.3.5 加样回收率考察 精密称取已知含量的样品 6 份，每份约 2.5 g，置 20 mL 量瓶中，加甲醇和对照品适量按“2.1.2.3”制备供试品溶液，再按“2.1.1”条件测定。结果黄柏碱、药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的平均回收率分别为 97.79%，107.7%，102.88%，104.99%，RSD 值分别为 1.17%，0.96%，1.41%，1.23%。第 39 卷第 2 期2023 年 2 月长春中医药大学学报Journal of Changchun Unive