二代基因测序技术检测急性髓...T3及C-KIT突变的价值_常渊媛.pdf

临床医学研究与实践2023 年 3 月第 8 卷第 7 期Value of second-generation gene sequencing technology in detecting CRLF2,FLT3 and C-KIT mutation in patients with acute myeloid leukemiaCHANG Yuanyuan,YANG Yafeng*(Hematology Department,Yulin No.2 Hospital,Yulin 719000,China)ABSTRACT:Objective To explore the value of second-generation gene sequencing technology in detecting cytokinereceptor like factor 2(CRLF2),FMS-like tyrosine kinase 3(FLT3)and C-KIT mutation in patients with acute myeloidleukemia.Methods A total of 78 patients with acute myeloid leukemia treated in our hospital from January 2017 to January2020 were selected as the research objects.The CRLF2,FLT3 and C-KIT mutation were detected by second-generationgene sequencing technology.The clinical parameters of patients with different mutation types of CRLF2,FLT3 and C-KITwere compared;the complete remission rate after treatment for 2 courses and recurrence rate of patients with differentmutation types of CRLF2,FLT3 and C-KIT were compared.Results There were 11 cases of CRLF2 mutation in 78patients,with a mutation rate of 14.10%,the mutation rate of normal karyotype was higher than that of abnormal karyotype,and the difference was statistically significant(P0.05);there were 9 cases of FLT3 mutation,with a mutation rate of11.54%,the mutation rate of normal karyotype was higher than that of abnormal karyotype,and the difference wasstatistically significant(P0.05);there were 6 cases of C-KIT mutation,with a mutation rate of 7.69%,the mutation rate ofnormal karyotype was lower than that of abnormal karyotype,and the difference was statistically significant(P0.05).Therewere significant differences in age,white blood cell count and platelet count among patients with different mutation types ofCRLF2(P0.05);there was significant difference in white blood cell count among patients with different mutation types ofFLT3(P0.05);there was significant difference in hemoglobin level among patients with different mutation types of C-KIT(P0.05);the complete remission rate after treatment for 2 courses of FLT3 mutation positivepatients was lower than that of mutation negative patients,the recurrence rate was higher than that of mutation negativepatients,and the differences were statistically significant(P0.05);the二代基因测序技术检测急性髓系白血病患者 CRLF2、FLT3及 C-KIT 突变的价值常渊媛，杨亚锋*（榆林市第二医院血液内科，陕西 榆林，719000）摘要：目的 探讨二代基因测序技术检测急性髓系白血病患者细胞因子受体样因子 2（CRLF2）、FMS 样酪氨酸激酶 3（FLT3）及 C-KIT 突变的价值。方法 选择 2017 年 1 月至 2020 年 1 月在我院接受治疗的 78 例急性髓系白血病患者为研究对象，采用二代基因测序技术检测 CRLF2、FLT3 及 C-KIT 突变情况。比较 CRLF2、FLT3 及 C-KIT 不同突变类型患者的临床参数；比较 CRLF2、FLT3 及 C-KIT 不同突变类型患者治疗2 个疗程的完全缓解率和复发率。结果 78 例患者中 CRLF2 突变 11 例，突变率为 14.10%，正常核型突变率高于异常核型，差异具有统计学意义（P0.05）；FLT3 突变 9 例，突变率为 11.54%，正常核型突变率高于异常核型，差异具有统计学意义（P0.05）；C-KIT 突变 6 例，突变率为7.69%，正常核型突变率低于异常核型，差异具有统计学意义（P0.05）。CRLF2 不同突变类型患者的年龄、白细胞计数、血小板计数比较，差异具有统计学意义（P0.05）；FLT3 不同突变类型患者的白细胞计数比较，差异具有统计学意义（P0.05）；C-KIT 不同突变类型患者的血红蛋白水平比较，差异具有统计学意义（P0.05）。开展随访跟踪共计 76 例患者可评价干预效果，CRLF2 不同突变类型患者治疗2 个疗程的完全缓解率和复发率比较，差异无统计学意义（P0.05）；FLT3 突变阳性患者治疗2 个疗程的完全缓解率低于突变阴性患者，复发率高于突变阴性患者，差异具有统计学意义（P0.05）；C-KIT 不同突变类型患者治疗2 个疗程的完全缓解率比较，差异无统计学意义（P0.05）；C-KIT 突变阳性患者复发率高于突变阴性患者，差异具有统计学意义（P0.05）。结论 急性髓系白血病患者 CRLF2、FLT3 及 C-KIT突变较为常见，利用二代基因测序技术开展上述基因突变检测有助于指导临床治疗及预后评估。关键词：二代基因测序技术；急性髓系白血病；细胞因子受体样因子 2；FMS 样酪氨酸激酶 3；C-KIT中图分类号：R733.71文献标志码：A文章编号：2096-1413(2023)07-0097-04DOI:10.19347/ki.2096-1413.202307027作者简介：常渊媛（1989），女，主治医师，硕士。研究方向：血液病学。*通讯作者：杨亚锋，E-mail:.临床医学97-临床医学研究与实践2023 年 3 月第 8 卷第 7 期急性髓系白血病是一种造血干细胞恶性克隆性疾病，发病时患者骨髓中的异常原始细胞以及幼稚细胞会大量增殖，积蓄于骨髓中抑制个体的正常造血，还会广泛浸润肝、脾、淋巴结等髓外脏器，患者的临床表现包括贫血、出血、感染以及浸润等1-4。儿童和成人均可发生急性髓系白血病，如得不到及时有效的治疗，预后较差5-6。近年来，随着遗传学、分子生物学等技术的应用，对急性髓系白血病的遗传学和生物学特性有了进一步的理解，为急性髓系白血病的诊断、治疗方案选择提供了依据。随着研究的深入，发现急性髓系白血病在发生、发展过程中存在包括细胞表面分子异常表达、基因突变和基因异常甲基化等多种细胞分子遗传学及表观遗传学方面的异常，其中基因突变在急性髓系白血病进展中发挥的作用尤为重要7-8，已有研究指出，遗传学特征是影响急性髓系白血病患者预后的最重要的独立因素，如果能够在发病初期筛查出患者基因突变类型，对后续治疗的开展将具有巨大的指导意义9-10。细胞因子受体样因子2（cytokine receptor like factor 2,CRLF2）、FMS 样酪氨酸激酶 3（FMS-like tyrosine kinase 3,FLT3）及C-KIT 突变都是成人急性髓系白血病最常见的基因突变类型：CRLF2 编码一个型细胞因子受体家族成员，编码蛋白是胸腺基质淋巴生成素的受体。FLT3 又称胎肝激酶 2或人干细胞激酶 1，表达于早期髓系/粒系祖细胞、胎盘、脑和性腺中，是型受体酪氨酸激酶家族成员之一。FLT3 配体在造血干/祖细胞的增殖和分化过程中起重要调节作用。C-KIT 是酪氨酸激酶受体蛋白家族的重要成员之一，其可通过一系列信号通路参与造血干细胞的增殖、分化调控11。当前对于以上基因在临床上的研究较少。本研究旨在探究急性髓系白血病患者上述基因突变情况，并探究二代基因测序对基因突变的检测价值，以期为指导急性髓系白血病患者治疗和评估预后提供参考，现将具体内容报道如下。1资料与方法1.1 一般资料选择 2017 年 1 月至 2020 年 1 月在我院接受治疗的78 例急性髓系白血病患者为研究对象，其中男性 39 例，女性 39 例；年龄 4559 岁，平均年龄（48.393.29）岁；FAB分型12：M02 例，M14 例，M2a31 例，M2b17 例，M411 例，M510 例，M62 例，M71 例。本研究经医院伦理协会批准；患者均签署知情同意书。1.2 纳入及排除标准纳入标准：确诊为急性髓系白血病且出现相应临床症状13；无严重肝、肾功能损害；无器官衰竭；无败血症；意识清晰能够配合调研。排除标准：并发精神疾患；并发其他恶性肿瘤；参与其他未结题临床研究；对本研究所用药物过敏。1.3 方法1.3.1 染色体核型分析。采集患者骨髓 56 mL，使用肝素抗凝后按照 2106/L 的密度接种到 3 个培养液中，经短期培养后制备染色体，并进行核型分析，染色体核型异常参考 人类细胞遗传学国际命名体制 进行描述。1.3.2 基因组脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid,DNA）制备及聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增。使用 DNA 提取试剂盒（厂家：济南新美康生物技术有限公司）对患者骨髓单个核细胞 DNA 基因组进行提取，确定DNA 产物浓度后使用去离子水稀释至 50150 ng/L。分别选择 CRLF2、FLT3 及 C-KIT 试剂盒厂家：天根生化科技（北京）有限公司对上述基因开展 PCR 扩增，并使用测序部分检测试剂盒（厂家：安捷伦科技有限公司）对扩增良好的 PCR 产物开展测序和纯化，分析 CRLF2、FLT3 及C-KIT 基因突变情况。1.4 临床治疗方案对患者采取标准