恩诺沙星可溶性粉在北京油鸡体内残留消除规律研究_孙红洋.pdf

2023年第45卷第2期China Poultry Vol.45，No.2.2023食品安全食品安全恩诺沙星可溶性粉在北京油鸡体内恩诺沙星可溶性粉在北京油鸡体内残留消除规律研究残留消除规律研究孙红洋1，2，白玉惠1，尹晖1，沈昕1，王亦琳1，朱馨乐1，王鹤佳1，黄耀凌1*（1.中国兽医药品监察所，北京100081；2.中国农业科学院饲料研究所，国家饲料药物基准实验室，北京100081）摘要：为研究恩诺沙星可溶性粉在北京油鸡体内的残留消除规律，以确定休药期，试验采用推荐剂量（75 mg/L）和2倍推荐剂量（150 mg/L）恩诺沙星自由饮水方式连续对北京油鸡给药5 d，在最后一次给药后0（停药后4 h）、1、3、5、7、9、12和15 d，采集北京油鸡肝脏、肾脏、肌肉和脂肪，采用高效液相色谱串联质谱法测定各组织中的恩诺沙星及其代谢物环丙沙星的残留量，并用WT1.4软件计算休药期。结果显示，推荐剂量5%恩诺沙星可溶性粉在北京油鸡各组织的休药期分别为肝脏7.1 d、肌肉3.8 d、肾脏5.2 d、脂肪4.4 d，2倍推荐剂量的休药期分别为肝脏9.6 d、肌肉4.2 d、肾脏6.4 d和脂肪8.4 d。结果表明，恩诺沙星在北京油鸡的休药期可设置为8 d。关键词：恩诺沙星；北京油鸡；残留消除；休药期中图分类号：S859.84文献标识码：A文章编号：1004-6364（2023）02-65-06收稿日期：2022-05-19；修回日期：2022-08-14基金项目：国家农产品质量安全风险评估专项（GJFP2019024）作者简介：孙红洋（1994-），女，硕士，兽医师，主要从事兽药残留检测研究，E-mail：*通讯作者：黄耀凌（1975-），男，博士，研究员，主要从事兽药残留检测研究，E-mail：doi：10.16372/j.issn.1004-6364.2023.02.011Residue Depletion Rule Study of Enrofloxacin Soluble Powder inBeijing-You ChickenSUN Hongyang1,2,BAI Yuhui1,YIN Hui1,SHEN Xin1,WANG Yilin1,ZHU Xinle1,WANG Hejia1,HUANG Yaoling1*（1.China Institute of Veterinary Drug Control,Beijing 100081；2.National Feed Drug Reference Laboratory,Feed Institute of Chinese Academy of Agricultural Sciences,Beijing 100081）Abstract：To study the residue depletion rule of enrofloxacin soluble powder in Beijing-You chicken，the recommendeddose(75 mg/L)and the double recommended dose(150 mg/L)were administered consecutively for 5 days in Beijing-You chickens.Chicken liver,kidney,muscle and fat were collected at 0(4 h after drug withdrawal),1,3,5,7,9,12 and 15 day after the lastadministration.The concentrations of residues including enrofloxacin and ciprofloxacin in tissues were determined by high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,and the drug withdrawal time was calculated by WT1.4 software.Theresults showed that the withdrawal time of the recommended dose of 5%enrofloxacin soluble powder in Beijing-You chicken tissues was 7.1 d for liver,3.8 d for muscle,5.2 d for kidney,4.4 d for fat,and the withdrawal time of double recommended dose was-652023年第45卷第2期China Poultry Vol.45，No.2.2023食品安全食品安全恩诺沙星由于杀菌效果好、药效快、抗菌谱广，是畜禽养殖中普遍使用的第三代氟喹诺酮抗菌药1。抗菌药物的不合理使用会引起肝损伤和神经系统的不良影响等，尤其是长期食用药物残留的动物源食品，药物会经由食物链进入人体，在体内长期蓄积，影响人体健康2-3。恩诺沙星在不同动物体内代谢产物的数量和产率不同，但主要代谢产物均为环丙沙星，因此，恩诺沙星在动物可食性组织中的药物残留标志物为恩诺沙星和环丙沙星之和4-5。近年来禽类产品安全监测发现，兽药残留超标现象频频发生，其中氟喹酮类药物恩诺沙星残留超标情况比较严重，究其原因可能是养殖过程中未遵守休药期规定1。GB 316502019 食品中兽药最大残留限量 虽然规定了恩诺沙星在鸡和火鸡不同组织中的最大残留限量（Maximum residue limit，MRL），但不同动物休药期亦不同6-7，规定的休药期是否完全适用于地方鸡种，有待进一步研究。北京油鸡是我国著名的优质地方鸡种，其生长周期长，属于慢速型品种，于2020年7月获得国家农产品地理标志登记证书，拥有较高的社会价值和经济价值8-10。本试验旨在研究恩诺沙星在北京油鸡体内的残留消除规律，为恩诺沙星在北京油鸡的科学使用和地方鸡种制定适宜休药期提供参考。1材料与方法1.1主要试剂5%恩诺沙星可溶性粉（泰尔康），批号20180704，广东温氏大华农生物科技有限公司动物保健品厂生产。恩诺沙星对照品：含量99.5%，批号H0081505，中国兽医药品监察所生产。盐酸环丙沙星对照品：含量99.8%（89.9%，以环丙沙星计），批号H0101310，中国兽医药品监察所生产。盐酸恩诺沙星-D5对照品：含量99.8%，批号30174006，WITEGA公司产品。盐酸环丙沙星-D8对照品：含量94.2%，批号291924，WITEGA公司产品。1.2主要仪器Infinity/6470 Triple Quad质谱仪，购自美国安捷伦公司；氮吹仪，购自广州德泰仪器科技有限公司；Biofuge Stratos高速冷冻离心机，购自德国Thermo公司；milli-Q纯水仪，购自德国默克公司。1.3试验动物130只150日龄北京油鸡（购自北京绿多乐有限公司），其中母鸡64只，公鸡66只。试验前7天饲喂不加任何抗菌药物的饲料，自由采食、饮水。试验期间不进行任何抗菌药物处理，试验前后饲养条件保持一致。1.4给药和样品采集130只北京油鸡随机分为2组，每组65只（公鸡33只，母鸡32只）。分别取5%恩诺沙星可溶性粉（泰尔康）15 g和30 g加入至10 L超纯水中，配置成75 mg/L和150 mg/L两个剂量的溶液，推荐剂量组采用75 mg/L，2倍推荐剂量组采用150 mg/L，以自由饮水方式连续进行恩诺沙星给药5 d。停药后0（停药后4 h）、1、3、5、7、9、12和15 d，分别从各组取公鸡、母鸡各4只，屠宰取鸡肌肉、肝脏、肾脏和脂肪（皮下脂肪和腹部脂肪），-20 保存备用。1.5恩诺沙星和环丙沙星含量检测采用实验室自建残留检测方法测定样品组织中恩诺沙星和环丙沙星含量11。1.5.1样品前处理取样品（20.01）g置50 mL离心管中，加入50 L内标工作液（内标终浓度为25 g/kg），加入10mL1%乙酸乙腈，涡旋提取2min，4 8000r/min离心5 min，上清液转入另一15 mL离心管中。取上清液2 mL至10 mL玻璃离心管中，加入乙腈饱和正己烷3 mL，涡旋混合3 min，静置分层，弃去上层正己烷。再加入乙腈饱和正己烷3 mL，重复操作一次。下清液在45 水浴下，氮气吹干后，加1 mL 0.1%甲酸乙腈/水（3 7，v/v）溶液溶解，涡旋30 s，4 10 000 r/min离心10 min，取上清液于0.2 m微孔过膜，供Infinity/6470 Triple Quad质谱仪测定。1.5.2仪器条件1.5.2.1色谱条件色谱柱：Luna C18（150 mm2.0 mm，5 m）；流动相A：0.1甲酸水溶液；流动相B：乙腈；柱温：9.6 d for liver,4.2 d for muscle,6.4 d for kidney,8.4 d for fat,respectively.Its suggested that the recommended withdrawal timefor enrofloxacin soluble powder in Beijing-You chicken was 8 days.Key words：enrofloxacin;Beijing-You chicken;residue depletion;drug withdrawal time-662023年第45卷第2期China Poultry Vol.45，No.2.202376543102响应值5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 8.2 8.4 8.6 8.8 9.0 9.2 9.4 9.6 9.8时间/min+TIC MRM（*-*）2019-09-17-040.d（chicken fat blank）d.脂肪1.41.21.00.80.60.4103响应值5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 8.2 8.4 8.6 8.8 9.0 9.2 9.4 9.6 9.8时间/min+TIC MRM（*-*）2019-10-28-002.d（chicken kidney blank）c.肾脏1.21.00.80.60.4103响应值5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 8.2 8.4 8.6 8.8 9.0 9.2 9.4 9.6 9.8时间/min+TIC MRM（*-*）2019-09-24-001.d（chicken meat blank）b.肌肉1.81.61.41.21.00.80.60.4103响应值5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 8.2 8.4 8.6 8.8 9.0 9.2 9.4 9.6 9.8时间/min2+ESI TIC MRM（*-*）chicken liver blank20190822.da.肝脏图1空白组织色谱结果35；进样量：2 L。洗脱条件见表1。1.5.2.2质谱条件离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测毛细管电压：3 500 V；干燥气温度：250；干燥气流速：7 L/min；雾化气压力：241 kPa；鞘气温度：325；鞘气流速：11 L/min。恩诺沙星和环丙沙星质谱定性定量离子对、裂解电压和碰撞能量条件见表2。1.6统计与分析采用残留量计算公式计算组织样品中恩诺沙星及其代谢物环丙沙星的残留量7，以同时测定的阳性添加样品的回收率