2023年HIV梅毒检测（教学课件）.ppt

HIV抗体、梅毒抗体、梅毒 筛查技术筛查技术 平昌疾控平昌疾控 李勇李勇 2022.04.21 HIV抗体筛查依据：?全国艾滋病检测技术标准?2022年修订版?全国艾滋病检测工作管理方法?艾滋病检测实验室的管理艾滋病检测实验室的管理 国家对艾滋病检测实验室实行分类管国家对艾滋病检测实验室实行分类管理，按照实验室的职能、开展检测工理，按照实验室的职能、开展检测工作的性质及范围共分三类实验室，分作的性质及范围共分三类实验室，分别是艾滋病参比实验室、艾滋病检测别是艾滋病参比实验室、艾滋病检测确证实验室、艾滋病检测筛查实验室确证实验室、艾滋病检测筛查实验室包括：艾滋病筛查中心实验室、艾包括：艾滋病筛查中心实验室、艾滋病筛查实验室和艾滋病检测点滋病筛查实验室和艾滋病检测点。艾滋病检测点的申请和验收程序 一申请设立艾滋病检测点的机构或单位应填写“艾滋病检测点资格审批申请表附件2，向当地区县卫生行政部门提出申请，经区县卫生行政部门批准后报市州卫生行政部门审批。二艾滋病检测点根本标准 1.人员条件：至少由2名经过市州级以上艾滋病检测技术培训并获得培训证书的专业人员组成。2.建筑条件：需有艾滋病检测区域或专用实验台，能开展简便、快速检测。3.设备条件：需配备快速试验所必须的物品，包括加样器、普通冰箱、操作环境温度控制设备、消毒与污物处理设备、一次性消耗品、平安防护用品。三对符合规定、材料齐全的申请者，由所在市州卫生行政部门指定2人以上人员组成的艾滋病检测点评审专家组专家组成员必须经过省级以上艾滋病检测相关培训根据本方案艾滋病检测点根本标准对申报单位进行现场验收，同时使用5份盲样对其进行实验操作及结果判读进行现场操作考核。四专家组对通过现场验收的检测点报请市州卫生行政部门批准及备案。五市州级卫生行政部门对通过验收者发出批复通知，同时抄送省卫生厅、省疾病预防控制中心和市州疾病预防控制中心，未通过验收者整改后可重新提出申请。基基 本本 概概 念念 艾滋病艾滋病(AIDS)又称获得性免疫缺陷综合征，是由又称获得性免疫缺陷综合征，是由人类免疫缺陷病毒人类免疫缺陷病毒(HIV)感染所引起的一种免疫感染所引起的一种免疫缺陷性疾病。缺陷性疾病。HIV在病毒分类中属逆转录病毒科在病毒分类中属逆转录病毒科慢病毒属中的人类免疫缺陷病毒组。全球流行的慢病毒属中的人类免疫缺陷病毒组。全球流行的HIV可分为可分为2型：型：HIV-1型和型和HIV-2型。型。HIV-1型是型是引起艾滋病流行的主要病原引起艾滋病流行的主要病原90%以上以上。HIV-2型主要局限于西非等国。应用免疫印迹法型主要局限于西非等国。应用免疫印迹法(WB)可以将二者明确地区别开来。可以将二者明确地区别开来。HIV形态与结构形态与结构 HIV呈球形，直径呈球形，直径100-120nm 内含内含RNA分子及酶分子及酶逆转录酶、整合酶喝蛋白酶逆转录酶、整合酶喝蛋白酶 外层有包膜，膜上为突起插入，突起由糖蛋白外层有包膜，膜上为突起插入，突起由糖蛋白gp120和和跨膜蛋白跨膜蛋白gp41以共价键连接而成。以共价键连接而成。HIV基因：基因：3个结构基因和个结构基因和6个调节基因个调节基因 3个结构基因：个结构基因：env、gag、pol表达的蛋白：表达的蛋白：env-gp160、gp120、gp41 gag-p55、p24、p17 pol-p66、p51、p31 HIV感染机理感染机理一一 HIV病毒侵入人体后，其外表糖蛋白病毒侵入人体后，其外表糖蛋白gp120与细胞外表与细胞外表受体蛋白受体蛋白CD4以高亲和力结合，吸附到宿主细胞上；以高亲和力结合，吸附到宿主细胞上；gp120再与宿主细胞外表辅助受体相互作用，使病毒与再与宿主细胞外表辅助受体相互作用，使病毒与宿主细胞膜更接近；宿主细胞膜更接近；gp41产生一系列构象变化，其产生一系列构象变化，其N端端的融合肽片段插入宿主细胞膜，导致病毒包膜与细胞膜的融合肽片段插入宿主细胞膜，导致病毒包膜与细胞膜的最终融合，病毒的最终融合，病毒RNA进入细胞。进入细胞。在在HIV感染后，最先能够监测到病毒感染后，最先能够监测到病毒RNA、然后是、然后是p24抗原，最后是抗体。抗原，最后是抗体。HIV感染机理 二 感染HIV后，机体针对HIV基因编码的抗原性物质产生相应抗体，在临床上具有重要诊断学意义的主要是对抗结构基因编码抗原(如gpl60，gpl20，gp41，p66，p55，p51，p31，p24，p17等)的抗体。由于个体差异、各种病毒蛋白的浓度和抗原性强弱不同及不同个体对不同抗原成分的反响性均有所不同，因此相应抗体的产生时间和不同个体对相同抗原成分的免疫应答强度等存在一定差异，此外，检测方法和使用试剂的敏感性不同对HIV抗体的检出时间产生一定影响。在感染HIV后，患者血清中最先出现p24抗原，继之，各种HIV抗原可到达顶峰；2-6周后，随着HIV-l抗体产生及浓度的不断增加，HIV抗原渐趋降低或检测不出。临床通用ELISA、免疫印迹法WB和目前开始推广的快速诊断法检测HIV抗体。HIV感染的主要检测方法感染的主要检测方法一一 目前检测目前检测HIV的方法很多，总体来说可以分为抗的方法很多，总体来说可以分为抗体检测和病毒检测两大类。病毒检测包括细胞培体检测和病毒检测两大类。病毒检测包括细胞培养养(病毒别离病毒别离)、p24抗原检测和病毒核酸检测。抗原检测和病毒核酸检测。早期对早期对HIV的诊断主要是通过血清学试验检测抗的诊断主要是通过血清学试验检测抗HIV的抗体的抗体,间接地诊断间接地诊断HIV感染。感染。近几年，分子生物学方法不断被应用到近几年，分子生物学方法不断被应用到HIV的检的检测中，测中，HIV的实验室诊断方法取得了很大的进展的实验室诊断方法取得了很大的进展，核酸检测已经成为了，核酸检测已经成为了HIV实验室诊断的开展方实验室诊断的开展方向。向。HIV感染窗口期感染窗口期 窗口期的问题？抗体通常是在感染后窗口期的问题？抗体通常是在感染后38周能够被检测出来。周能够被检测出来。95%在三个月可以检测在三个月可以检测出抗体。出抗体。在窗口期，病毒抗体不能被检出，但可以在窗口期，病毒抗体不能被检出，但可以检测到病毒相关抗原或别离病毒。抗原能检测到病毒相关抗原或别离病毒。抗原能够在个体感染后先于血清转化够在个体感染后先于血清转化218 d被检被检测到。因此，在血清转化期通过检测测到。因此，在血清转化期通过检测p24抗抗原作为早期辅助诊断原作为早期辅助诊断HIV感染的一种方法感染的一种方法。HIV感染的主要检测方法感染的主要检测方法二二-HIV抗体检测抗体检测 检测抗检测抗-HIV抗体是抗体是HIV/AIDS诊断的一项重要指诊断的一项重要指标，抗标，抗-HIV抗体测定作为血清学诊断要求准确抗体测定作为血清学诊断要求准确、可靠，必须经初筛、复检试验和确认实验三个、可靠，必须经初筛、复检试验和确认实验三个步骤。步骤。初筛实验方法主要有：酶联免疫试验初筛实验方法主要有：酶联免疫试验ELISA、明胶颗粒凝集试验、明胶颗粒凝集试验PA、快速免、快速免疫疫层析或渗滤层析或渗滤试验试验RT。确认试验主要用免疫印迹试验确认试验主要用免疫印迹试验 WB。HIV检测程序及流程图检测程序及流程图 筛查试验筛查试验:标本验收合格后，用筛查试剂进行检标本验收合格后，用筛查试剂进行检测，如呈阴性反响，报告测，如呈阴性反响，报告HIV抗体阴性；对呈阳抗体阴性；对呈阳性反响的标本，须进行重复检测性反响的标本，须进行重复检测 复检复检:对筛查呈阳性反响的标本用原有试剂和另对筛查呈阳性反响的标本用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的试剂重复检测。如外一种不同原理或不同厂家的试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反响，那么报告两种试剂复测均呈阴性反响，那么报告HIV抗体抗体阴性；如均呈阳性反响，或一阴一阳，需送艾滋阴性；如均呈阳性反响，或一阴一阳，需送艾滋病确认实验室进行确认。病确认实验室进行确认。应尽可能将重新采集的受检者血液标本和原有标应尽可能将重新采集的受检者血液标本和原有标本一并送检。本一并送检。样品 样品 初筛试验 筛查试剂 阳性反响 阴性反响 复检试验 一阴一阳 均阴性反响 均阳性反响 阴性报告 送确认实验室 确认试验 筛查试验的流程图筛查试验的流程图 原有试剂+另一不同原理 或厂家试剂或另外两种 不同原理或厂家试剂 酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验(ELISA)根本原理根本原理:是免疫反响物通过化学或免疫学的方法形成酶结合物，是免疫反响物通过化学或免疫学的方法形成酶结合物，酶结合物能与待检样品中相应的抗原或抗体结合成为免疫复合物酶结合物能与待检样品中相应的抗原或抗体结合成为免疫复合物,然后参加酶底物然后参加酶底物,经酶的催化或水解作用经酶的催化或水解作用,无色底物产生颜色无色底物产生颜色,用肉用肉眼、酶标仪观察结果。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免眼、酶标仪观察结果。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反响的结果，使测定方法到达很高的敏感度。疫反响的结果，使测定方法到达很高的敏感度。初筛用的初筛用的HIV ELISA试剂目前已经开展到第四代检测试剂。试剂目前已经开展到第四代检测试剂。第一代试剂主要以病毒裂解物或局部纯化的病毒抗原包被反响第一代试剂主要以病毒裂解物或局部纯化的病毒抗原包被反响板板,以检测血清中的抗体。由于包被的抗原不很纯以检测血清中的抗体。由于包被的抗原不很纯,假阳性率较高假阳性率较高。第二代试剂使用基因工程方法得到的重组抗原和合成肽包被反响第二代试剂使用基因工程方法得到的重组抗原和合成肽包被反响板，由于纯化抗原的使用板，由于纯化抗原的使用,特异性有了很大提高。特异性有了很大提高。第三代试剂使用双抗原夹心法检测抗体第三代试剂使用双抗原夹心法检测抗体,进一步提高了敏感性。进一步提高了敏感性。-目前国内外主要使用第三代目前国内外主要使用第三代 第四代试剂那么在第三代的根底上进一步增加了第四代试剂那么在第三代的根底上进一步增加了P24抗原的检测抗原的检测,把把HIV抗原和抗抗原和抗P24的抗体同时包被反响板的抗体同时包被反响板,可同时检测血清中的可同时检测血清中的HIV抗体和抗体和P24抗原。检出时间提前了抗原。检出时间提前了4-9.1d，用于血源筛查等。，用于血源筛查等。HIV抗体筛查试验根本要求抗体筛查试验根本要求 筛查试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册筛查试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、批检合格、临床评估质量优良、在有效期批准、批检合格、临床评估质量优良、在有效期内的试剂。内的试剂。目前常用的筛查试剂有酶联免疫、颗粒凝集和其目前常用的筛查试剂有酶联免疫、颗粒凝集和其它快速诊断试剂。它快速诊断试剂。建议采用国家参比室试剂考评质量优良的试剂建议采用国家参比室试剂考评质量优良的试剂-中中国疾病预防控制中心性艾中心网站国疾病预防控制中心性艾中心网站 快速检测快速检测RTRT1 1 常用的主要有以下几种：常用的主要有以下几种：明胶颗粒凝集试验明胶颗粒凝集试验PAPA：PAPA是是HIVHIV血清抗体检测血清抗体检测的一种简便方法，是将的一种简便方法，是将HIVHIV抗原致敏明胶颗粒作为抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用，混匀后保温载体，与待检样品作用，混匀后保温一般为室一般为室温温。当待检样品含有。当待检样品含有HIVHIV抗体时，经抗原致敏的抗体时，经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反响，根据明胶颗抗体反响，根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。粒在孔中的凝集情况判读结果。斑点斑点EIAEIA或称斑点或称斑点ELISAELISAdotdot-EIAEIA：以硝酸纤维：以硝酸纤维膜为载体，将膜为载体，将HIVHIV抗原滴在膜上成点状，即为固相抗原滴在膜上成点状，即为固相抗原。加血清样品作用，以后步骤同抗原。加血清样品作用，以后步骤同ELISAELISA。阳性。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反响时间结果在膜上抗