辣椒素纳米粒的制作及其在治疗大鼠三叉神经痛中的作用.pdf

基金项 目 江 西 省 科 技 厅 重 点 研 发 计 划 项 目(编 号:2 0 1 9 2 B B G 7 0 0 2 0)江西 省 卫 健 委 科 技 计 划 课 题(编 号:S K J P 2 2 0 2 0 2 2 6 9)作者简介 熊雨(1 9 9 6),女,江西丰城人,硕士,研究方向:三叉神经痛。*通信作者 金幼虹,E-m a i l:2 6 7 0 9 5 4 0 1 4q q.c o m口腔颌面外科学研究辣椒素纳米粒的制作及其在治疗大鼠三叉神经痛中的作用熊雨1,2,3 郑欣欣1,2,3 陈敬林1,2,3 陈丽珍1,2,3 金幼虹1,2,3*王沛2,31.南昌大学附属口腔医院牙周科 江西 南昌 3 3 0 0 0 6;2.江西省口腔生物医学重点实验室 江西 南昌 3 3 0 0 0 6;3.江西省口腔疾病临床医学研究中心 江西 南昌 3 3 0 0 0 6 摘要 目的:将辣椒素(c a p s a i c i n,C a p)制备成纳米颗粒,并进一步制成凝胶观察其对大鼠三叉神经痛的治疗作用。方法:以聚乳酸-羟基乙酸(p o l y l a c t i c-c o-g l y c o l i c a c i d,P L G A)为载体,以牛血清白蛋白(b o v i n e s e r u m a l b u m i n,B S A)为稳定剂,负载辣椒素,采用乳液溶剂蒸发法制备辣椒素纳米粒(p o l y l a c t i c-c o-g l y c o l i c a c i d/c a p s a i c i n n a n o p a r-t i c l e s,P L G A/C a p N P s)。利用扫描电子显微镜-能量色散光谱(s c a n n i n g e l e c t r o n m i c r o s c o p e,S EM)、傅立叶变换红外光谱(f o u r i e r t r a n s f o r m i n f r a r e d s p e c t r o s c o p y,F T I R)、高灵敏度Z e t a电位和纳米颗粒尺寸分析仪对纳米颗粒进行了表征,用差示扫描量热法(d i f f e r e n t i a l s c a n n i n g c a b o r i m e t r y,D S C)分析了纳米颗粒的性质。将辣椒素纳米颗粒用卡波姆9 3 4制备成凝胶,采用高效液相色谱法(h i g h p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y,HP L C)测定载药量、包封率及体外释药性能,将其应用于大鼠三叉神经痛手术部位,观察其疗效。结果:1 7 m g剂量的P L G A/C a p N P s呈规则球形,水化粒径为(3 8 9.5 81 2.0 2)n m,聚合物分散性指数(p o l y m e r d i s p e r s i t y i n d e x,P D I)为0.2 7 00.0 1 8,Z e t a电位为(3 3.5 62.6 1)mV,载药量为(5 7.5 60.0 5)%,包封率为(9 0.2 60.9 0)%,最大累积释放率为7 7.1 9%。在大鼠手术部位涂抹0.0 3%、0.3%和3%P L GA/C a p N P s凝胶后,疼痛阈值明显升高(P0.0 5)。敷药组P物质(s u b s t a n c e P,S P)和前列腺素E 2(p r o s t a g l a n d i n E 2,P G E 2)血清中的浓度较模型组显著下降。结论:辣椒素纳米凝胶对大鼠三叉神经痛有一定的治疗作用。关键词 辣椒素;三叉神经痛;P物质;前列腺素E 2 文献标识码 A 文章编号 1 6 7 17 6 5 1(2 0 2 3)1 00 9 1 10 6d o i 1 0.1 3 7 0 1/j.c n k i.k q y x y j.2 0 2 3.1 0.0 1 2P r e p a r a t i o n o f C a p s a i c i n N a n o p a r t i c l e s a n d T h e i r E f f e c t o n T r e a t m e n t o f T r i g e m i n a l N e u r a l g i a i n R a t s.X I ONG Y u1,2,3,ZHENG X i n x i n1,2,3,CHEN J i n g l i n1,2,3,CHEN L i z h e n1,2,3,J I N Y o u h o n g1,2,3*,WANG P e i2,3.1.D e p a r t m e n t o f P e r i o d o n t o l o g y,T h e A f f i l i a t e d S t o m a t o l o g i c a l H o s p i t a l o f N a n c h a n g U n i v e r s i t y,N a n c h a n g 3 3 0 0 0 6,C h i n a;2.T h e K e y L a b o r a t o r y o f O r a l B i o m e d i c i n e,N a n c h a n g 3 3 0 0 0 6,C h i n a;3.J i a n g x i P r o v i n c e C l i n i c a l R e s e a r c h C e n t e r f o r O r a l D i s e a s e s,N a n c h a n g 3 3 0 0 0 6,C h i n a.A b s t r a c t O b j e c t i v e:T o p r e p a r e c a p s a i c i n(C a p)n a n o p a r t i c l e s a n d d e v e l o p t h e m i n t o g e l t o o b s e r v e t h e i r t h e r a-p e u t i c e f f e c t o n t r i g e m i n a l n e u r a l g i a i n r a t s.M e t h o d s:C a p-l o a d e d p o l y l a c t i c-c o-g l y c o l i c a c i d/C a p n a n o p a r t i c l e s(P L G A/C a p N P s)w e r e p r e p a r e d u s i n g P L GA a s t h e c a r r i e r a n d b o v i n e s e r u m a l b u m i n a s t h e s t a b i l i z e r b y e m u l s i o n s o l v e n t e v a p o r a t i o n m e t h o d.T h e n a n o p a r t i c l e s w e r e c h a r a c t e r i z e d b y s c a n n i n g e l e c t r o n m i c r o s c o p y-e n e r g y d i s p e r s i v e s p e c t r o s c o p y,F o u r i e r t r a n s f o r m i n f r a r e d s p e c t r o s c o p y,h i g h s e n s i t i v i t y z e t a p o t e n t i a l a n a l y z e r,a n d n a n o p a r t i c l e s i z e a n a l y z e r.D i f f e r e n t i a l s c a n n i n g c a l o r i m e t r y w a s u s e d t o a n a l y z e t h e p r o p e r t i e s o f t h e n a n o p a r t i c l e s.T h e C a p n a n o p-a r t i c l e s w e r e t h e n p r e p a r e d i n t o g e l w i t h C a r b o p o l 9 3 4.T h e d r u g l o a d i n g c a p a c i t y,e n c a p s u l a t i o n e f f i c i e n c y,a n d i n v i t r o r e l e a s e p e r f o r m a n c e w e r e d e t e r m i n e d b y h i g h-p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y.F i n a l l y,t h e y w e r e a p p l i e d t o t h e s u r g i c a l s i t e o f r a t t r i g e m i n a l n e u r a l g i a t o o b s e r v e t h e e f f i c a c y.R e s u l t s:A t a d o s e o f 1 7 m g,P L G A/C a p N P s h a d r e g u l a r s p h e r i c a l s h a p e w i t h h y d r a t e d p a r t i c l e s i z e o f(3 8 9.5 81 2.0 2)n m;p o l y m e r d i s p e r s i t y i n d e x(P D I)o f 0.2 7 00.0 1 8;Z e t a p o t e n t i a l o f(3 3.5 62.6 1)mV;d r u g l o a d i n g c a p a c i t y o f(5 7.5 60.0 5)%;e n c a p s u l a t i o n e f f i c i e n-c y o f(9 0.2 60.9 0)%;a n d m a x i m u m c u m u l a t i v e r e l e a s e r a t e o f 7 7.1 9%.A f t e r a p p l y i n g 0.0 3%,0.3%,o r 3%P L-119 口腔医学研究2 0 2 3年1 0月第3 9卷第1 0期GA/C a p N P g e l s t o t h e s u r g i c a l s i t e i n r a t s f a c e s,t r i g e m i n a l p a i n t h r e s h o l d w a s s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d(P0.0 5).T h e l e v e l o f s u b s t a n c e P(S P)a n d p r o s t a g l a n d i n E 2(P G E 2)i n s e r u m w e r e s i g n i f i c a n t l y d e c r e a s e d i n t h e t r e a t m e n t g r o u p c o m p a r e d w i t h t h e m o d e l g r o u p(P0.0 5).C o n c l u s i o n:C a p n a n o-g e l h a s c e r t a i n t h e r a p e u t i c e f f e c t s o n r a t t r i g e m i n a l n e u r a l g i a.K e y w o r d s c a p s a i c i n;t r i g e m i n a l n e u r a l g i a;s u b s t a n c e P;p r o s t a g l a n d i n E 2 辣椒素具有镇痛、抗炎、抗肥胖、止痒、抗凋亡、抗癌、抗氧化和神经保护等多种生物学功能1-3,被广泛应用于人们的生活、临床治疗和实验研究中。辣椒素局部涂敷辅助治疗神经病理性疼痛由来已久4,临床上已将辣椒素含量8%的贴片用于治疗神经痛,但由于辣椒素具有强烈刺激性和辛辣味,且吸收迅速、半衰期短,约有1 0%的患者使用辣椒素贴片过程中会出现局部红斑和疼痛3,因而限制了其在神经痛及其他疾病治疗中的应用范围。聚乳酸羟基乙酸共聚物由乳酸和羟基乙酸两种单体按一定比例共聚而成5,是一种高分子化合物,具有无毒性、生物相容性及生物可降解性。非晶态P L GA具备良好的成球成膜性能、良好稳定性和载药后药物释放的可控性,适用于药物缓释载体的制备6-8。牛血清白蛋白是牛血清中的主要蛋白质,B S A用作水不溶性药物的药物递送系统的载体,可以提高载药量,增强药物的水溶解性,保护药物不降解,被广泛应用于纳米材料合成载体和药物传递等领域7。由于辣椒素是不溶于水的物质,本文采用乳化溶剂挥发技术,以P L GA为载体,B S A为稳定剂,负载C a p,制备P L GA/C a p N P s,将辣椒素原粉纳米化,达到减小粒径、改善药物比表面积,降低辣椒素刺激性的目的,另外,本文还对纳米粒体外释药行为进行了研究,并将其制备成凝胶,应用于大鼠三叉神经痛的治疗,为纳米化包埋辣椒素的临床应用及研究提供有关数据帮助。1 材料与方法1.1 实验动物 4 8只S P F级S D雄性大鼠(1 8 02 2 0 g)由斯贝福北京生物有限公司提供,被安置在标准的实验室条件下,可自由获取食物颗粒和饮用水。生产许可证号:S C X K(京)2 0 1 9-0 0 1 0,动物实验完全按照南昌大学医学伦理委员会的相关规定进行。1.2 实验试剂与仪器 聚乳酸-羟基乙酸共聚物(分子量7 0 0 01 7 0 0 0,S i g m a);牛血清白蛋白(9 6%生物技术级,阿拉丁);辣椒素(纯度9 8%,德斯特生物);卡波姆 9 3 4(9 9.9%,源叶);S P、P G E 2 E L I S A试剂盒(上海生工有限公司)。台式高速冷冻离心机(T G L-1 6 M,湖南湘仪);高灵敏度Z E T A电位及纳米粒度仪(9 0 P l u s P A L S,布鲁克海文);超声波细胞粉碎机(S C I E NT Z-I I D,新芝);冷场发射扫描电镜-能谱 仪(H-7 6 5 0,日 本H i t a c h集 团);喷 金 仪 器(J F L-1 6 0 0,日 本 电 子);傅 里 叶 变 换 红 外 光 谱 仪(F T/I R-4 2 0 0型,J A S C O);差示扫描量热仪(D S C 8 0 0 0 0 3 0 3 0 2 1 5,美国P E公司);高效 液相色谱仪(1 2 6 0 I n f i n i t y,A g i l e n t);V o n F r e y纤维丝测试仪(N o r t h C o a s t M e d i c a l)。1.3 实验方法1.3.1 纳米粒制备 精密称取1 5 m g P L GA和3、5、7、9、1 1、1 3、1 5、1 7、1 9 m g辣椒素分别溶于1 m L二氯甲烷制为油相,在搅拌下逐滴加入由8 0 m g B S A、4 m L超纯水制得的水相中,超声破碎仪超声2 0 s,立刻将乳液倒入正在搅拌的1 0 0 m L超纯水中,磁 力 搅 拌 机 搅 拌4 h,使 用 离 心 机 以 转 速1 0 0 0 0 r/m i n、时间1 0 m i n离心收集纳米粒,使有机相挥发,超纯水清洗2次,得到P L GA/C a p N P s溶液9,冷冻真空干燥得到P L GA/C a p N P s,这一过程也进一步使得二氯甲烷彻底挥发。P L GA N P s制备除第一步未加入辣椒素,其余步骤同P L GA/C a p N P s制备。1.3.2 纳米粒凝胶的制备 取投药量为1 7 m g的辣椒素纳米粒,与凝胶基质(0.1 g卡波姆9 3 4加入5 g去离子水中,第2天溶胀完全后使用)混合,继续加入0.5 g甘油,0.0 2 g三乙醇胺,制成质量分数为0.0 3%、0.3%、3%(质量分数=P L GA/C a p N P s所含辣椒素质量/凝胶总质量)的P L GA/C a p N P s凝胶1 0,备用。1.3.3 P L GA/C a p N P s载药能力测试收集上述P L GA/C a p N P s离心上清液,稀释至一定浓度,采用高 效 液 相 色 谱 法 检 测。色 谱 条 件:色 谱 柱 为S y mm e t r y C 1 8(5 m,4.6 mm2 5 0 mm),流动相使用 甲 醇水 为7 03 0(V/V),流 速 设 置 为1.0 m L/m i n,紫外检测波长2 8 0 n m,柱温3 5,进样量1 0 L1 1。并根据标准曲线计算P L GA/C a p N P s中辣椒素含量,根据公式(1)和公式(2)计算219J o u r n a l o f O r a l S c i e n c e R e s e a r c h,O c t.2 0 2 3,V o l.3 9,N o.1 0 P L GA/C a p N P s的包封率和载药量。包封率/%=(W 1-W f)/W 11 0 0%(1)载药量/%=W g/Wn 1 0 0%(2)公 式 中W 1:理 论 上 应 用 原 始 辣 椒 素 质 量(m g);W f:溶液中游离的辣椒素质量(m g);W g:纳米粒复融后游离的辣椒素质量(m g);Wn:纳米粒的总质量(m g)。1.3.4 P L GA/C a p N P s释药能力测试 采用含吐温8 0(促溶剂)的P B S作为释放介质(其中V P B S:V吐温8 0=9 91)1 2,将样品放于透析袋中,置于有相 同 释 放 介 质 的 玻 璃 瓶 中,恒 温 摇 床,转 速1 0 0 r/m i n,温度3 7,分别于1、2、3、4、5、6、7、8、2 4、4 8、7 2 h各取样1 m L,并补加同体积的释放介质1 3。采用高效液相色谱法检测,根据辣椒素标准曲线计算对应取样点浓度,计算出药物累积释药率。1.4 表征 取少量纯辣椒素、P L GA N P s、投药量为1 7 m g的P L GA/C a p N P s粉末固定于硅片上喷金,S EM下观察;取少量P L GA N P s、P L GA/C a p N P s未离心溶液,分别吸取2 m L溶液置于纳米粒度仪样品池中,测定不同样品水合粒径,P D I与Z e t a电位;取微量辣椒素、P L GA、B S A、投药量为1 7 m g的P L GA/C a p N P s粉末置于傅里叶变换红外光谱仪,波数4 0 0 05 0 0 c m-1范围内扫描;差示扫描量热仪测绘辣椒素及P L GA/C a p N P s曲线,从3 0 以1 0/m i n速 率 升 温 至6 0 0,氮 气 流 速 为5 0 m L/m i n。1.5 三叉神经痛动物模型的制备及行为学测试 在大鼠右侧眶下孔处纵向切开约0.5 c m长切口,暴露眶下神经,分离周围组织,用两根4.0可吸收缝线结扎眶下神经,结扎线间距约2 mm,左侧不做任何处理。术后两周采用V o n F r e y行为学测试,筛选出T N模型构建成功的大鼠,分为3组,每组6只,分别在手术侧(右侧)涂抹质量分数为0.0 3%、0.3%、3%的P L GA/C a p N P s凝胶1 h,对照侧(左侧)涂不含辣椒素的凝胶,将凝胶用生理盐水冲洗干净,于2 h、3 h、4 h、5 h、6 h、1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d、8 d、9 d、1 0 d使用V o n F r e y纤维棒在术区触须垫区域测试其机械痛阈1 4。1.6 血清中 S P、P G E 2的检测 本组实验共用3 0只大鼠,分为假手术组、模型组、0.0 3%、0.3%和3%辣椒素纳米 粒 凝 胶 敷 药 后4 h各1组,每 组6只。假手术组:暴露右侧眶下神经但不结扎,左侧不做任何处理。手术组:结扎右侧眶下神经,左侧不做任何处理。敷药后4 h组分别为0.0 3%、0.3%、3%辣椒素纳米粒凝胶敷药1 h后,将凝胶用生理盐水冲洗干净,于4 h后用1 0%水合氯醛麻醉大鼠,腹主动脉取血,离心。E L I S A试剂盒检测血清中S P、P G E 2的水平。1.7 统计学方法 使用S P S S 2 3.0统计软件,采用两独立样本t检验。检验水准为双侧=0.0 5。2 结果2.1 材料表征分析2.1.1 S EM分析 图1是C a p、P L GA、P L GA/N P s、P L GA/C a p N P s S EM图,图1 a中C a p形态不规则,纳米化后呈均匀球形(图1 d)。C a p被二氯甲烷溶解后发生重结晶,随即被P L GA包裹成纳米粒。P L GA/N P s(图1 c)粒径小于P L GA/C a p N P s(图1 d),说明辣椒素被成功包覆于纳米粒中。2.1.2 扫描电镜粒径、水合粒径、P D I、Z e t a电位、包封率、载药量分析 表1是不同投药量对扫描电镜粒径、水合粒径、P D I、Z e t a电位、包封率、载药量的影响,从表中可以看出,P L GA/C a p N P s的扫描电镜粒径、水合粒径和Z e t a电位均高于不含辣椒素的纳米粒,P D I颗粒分散系数无明显差别,颗粒分散均匀,投药量达1 7 m g的纳米粒包封率和载药量最佳,因此选择1 7 m g的纳米粒进入后续的实验中。2.1.3 红外光谱(F T I R)分析 如图2展示的是B S A,C a p,P L G A和所制备的C a p纳米粒的红外光谱图,可 以 看 到,P L G A在1 7 5 7 c m-1、1 6 5 1 c m-1、1 4 2 3 c m-1有 明 显 的 吸 收 峰,其 中1 7 5 7 c m-1、1 6 5 1 c m-1代表着C=0伸缩振动,1 4 2 3 c m-1代表着C-OH 面内弯曲。这些峰在制备的C a p纳米粒的红外光谱中也可以被找到。C a p在1 6 3 2 c m-1处有明显 的 吸 收 峰,代 表 着C=0拉 伸 吸 收 峰B S A在5 0 0 n m1 a:C a p;1 b:P L GA;1 c:P L GA/N P s;1 d:P L GA/C a p N P s图1 S EM图F i g.1 S EM i m a g e s.319 口腔医学研究2 0 2 3年1 0月第3 9卷第1 0期表1 不同投药量对扫描电镜粒径、水合粒径、P D I、Z e t a电位、包封率、载药量的影响(n=3)T a b.1 E f f e c t s o f d i f f e r e n t d o s a g e o n s c a n n i n g e l e c t r o n m i c r o s c o p e p a r t i c l e s i z e,h y d r a t i o n p a r t i c l e s i z e,P D I,Z e t a p o t e n t i a l,e n c a p s u l a t i o n r a t e,a n d d r u g l o a d i n g(n=3)xs投药量/m g扫描电镜粒径/n m水合粒径/n mP D IZ e t a 电位/mV包封率/%载药量/%09 8.7 41 7.0 62 1 4.5 33.1 50.2 50.0 0 2-2 2.2 04.9 60031 2 9.9 61 7.4 33 7 3.9 82 0.4 40.2 00.0 0 7-3 3.1 55.7 73 5.2 80.0 61.5 40.0 051 4 3.0 01 7.8 43 7 5.4 02 3.3 10.2 40.0 3 13 5.6 03.8 03 6.2 90.0 81.2 50.0 071 2 6.5 71 6.5 54 5 9.3 74 3.5 80.2 90.0 3 04 1.0 20.7 64 4.7 30.0 21.1 00.0 091 2 9.5 01 6.3 24 2 9.9 16 8.3 00.2 40.0 6 33 1.4 31.0 85 8.4 00.0 33.2 80.0 01 11 6 4.7 51 6.8 84 1 0.7 62 8.7 00.2 60.0 1 34 2.0 71.6 07 8.5 70.0 31 2.6 00.0 11 31 3 2.7 02 1.4 83 6 7.9 43 2.7 40.2 30.0 5 03 6.9 82.7 28 4.1 70.0 23 0.0 30.0 11 51 3 3.0 32 5.9 24 6 3.0 71 4.1 70.2 80.0 1 13 9.7 41.2 99 0.3 00.0 44 9.4 90.0 71 71 4 9.3 32 4.6 63 8 9.5 81 2.0 20.2 70.0 1 83 3.5 62.6 19 0.2 60.0 15 7.5 60.0 51 91 3 6.5 62 0.7 14 1 1.3 23 1.3 40.2 60.0 1 43 5.7 82.5 15 9.2 40.0 33 2.6 50.0 6图2 B S A、C a p、P L GA、P L GA/C a p N P s F T I R图F i g.2 F T I R s p e c t r a o f B S A,C a p,P L GA,a n d P L GA/C a p N P s.1 3 9 4 c m-1处有明显的吸收峰,其中酰胺带主要是在1 4 5 01 2 4 0 c m-1,代表着C-N的伸缩振动,在制备的C a p纳米粒的红外光谱中也能观察到这两个吸收峰。从红外光谱测试的结果可以分析得出,辣椒素被成功的负载于纳米粒1 5。2.1.4 差示扫描量热仪(D S C)分析 图3是辣椒素、P L GA、B S A和 不 同 投 药 量P L GA/C a p N P s D S A曲线,结果显示P L GA在5 0.4 7 有一个较宽的吸热峰,C a p在6 0.5 1 6 有一个较宽的吸热峰以及在7 0.7 2 5 附近有一个尖锐型吸热峰,1 7 m g的P L GA/C a p N P s在6 8.7 1 2 有一明显吸热峰,熔点峰 位 置 不 同 于P L GA和C a p和B S A,说 明P L GA/C a p N P s 的晶型结构发生了改变。2.2 P L GA/C a p N P s释药能力分析 图4是不同浓度辣椒素凝胶以及纯辣椒素的累积释放曲线,结果显示纯辣椒素在释放介质中7 2 h累积释放率不足3 0%,质量分数为0.0 3%的辣椒素凝胶的8 h累积释放率比纯辣椒素释放率高(P0.0 5),且随着辣椒素凝胶的质量分数的增高,累积释放率逐渐下降。2.3 动物行为学测试结果 图5各组大鼠颌面部图3 P L GA、B S A和不同投药量P L GA/C a p N P s D S C曲线图F i g.3 D S C c u r v e s o f P L GA,B S A,a n d N P s o f P L GA/C a p w i t h d i f f e r e n t d o s a g e.图4 不同浓度辣椒素凝胶以及辣椒素的累积释放曲线图F i g.4 C u m u l a t i v e r e l e a s e c u r v e s o f C a p a n d C a p s a i c i n g e l s w i t h d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n s.机械痛阈变化,术前各组大鼠手术侧和对照侧比较差异均无统计学意义,术后2周手术侧机械痛阈均低于对照侧(P0.0 5),说明大鼠三叉神经痛模型造模成功。大鼠敷0.0 3%、0.3%、3%质量分数的辣椒素凝胶后手术侧和对照侧比较差异均无统计学意义,说明3种质量分数的辣椒素凝胶对三叉神经痛均有治疗效果。敷药5 d后质量分数为0.0 3%辣椒素凝胶手术侧和对照侧比较差异有统计学意义419J o u r n a l o f O r a l S c i e n c e R e s e a r c h,O c t.2 0 2 3,V o l.3 9,N o.1 0 1代表手术前;2代表术后2周;37分别代表敷药后2、3、4、5、6 h;81 7分别代表敷药后1、2、3、4、5、6、7、8、9、1 0 d;5 a:0.0 3%凝胶组;5 b:0.3%凝胶组;5 c:3%凝胶组图5 各组大鼠颌面部机械痛阈变化图F i g.5 C h a n g e s o f m a x i l l o f a c i a l m e c h a n i c a l p a i n t h r e s h o l d o f r a t s i n e a c h g r o u p.(P0.0 5),说明大鼠的痛阈开始逐渐恢复,敷药6 d后0.0 3%、0.3%、3%质量分数的辣椒素凝胶手术侧和 对 照 侧 比 较 差 异 均 有 统 计 学 意 义(P0.0 5)。2.4 大鼠血清中S P、P G E 2水平 表2为不同组别大鼠血清中S P、P G E 2水平,模型组S P、P G E 2与假手术组比较差异有统计学意义(P0.0 5)。凝胶组S P、P G E 2与模型组比较差异有统计学意义(P0.0 5)。表2 辣椒素纳米粒凝胶对三叉神经痛大鼠血清中S P、P G E 2水平的影响T a b.2 E f f e c t o f C a p n a n o p a r t i c l e g e l o n S P a n d P G E 2 l e v e l s i n s e r-u m o f t r i g e m i n a l n e u r a l g i a r a t sn g/L,xs组别S PP G E 2假手术组7 0.2 69.3 22 4 6.3 03 0.3 2模型组1 1 2.5 51 0.6 5*3 8 1.1 24 0.2 7*0.0 3%凝胶组5 1.3 08.4 5#2 0 0.2 02 8.3 4#0.3%凝胶组5 2.3 48.2 3#1 9 8.3 02 9.3 1#3%凝胶组4 9.0 28.3 5#1 9 9.2 62 7.4 5#注:与假手术组比较,*P0.0 5;与模型组比较,#P0.0 53 讨论 以P L GA和B S A为壁材8,1 6,C a p为芯材,通过乳化溶剂挥发法,可得到球形形貌、大小均匀、热稳定性良好、平均水合粒径(3 8 9.5 81 2.0 2)n m的P L GA/C a p N P s。P L GA/C a p N P s载 药 量 为(5 7.5 60.8 5)%,包封率为(9 0.2 60.0 1)%,这种制备方法简单易操作,所需药品材料廉价易获得,为未来临床大批量应用奠定基础。相较于纯的辣椒素,辣椒素纳米粒制成的凝胶其释放率有所提高,辣椒素可以得到较好的利用。大鼠的机械阈值变化显示0.0 3%、0.3%、3%质量分数的辣椒素凝胶均对治疗三叉神经痛有效,并且敷药后,效果持续长达1 0 d,这可能是因为敷药后三叉神经痛大鼠末梢神经的疼痛递质P物质、前列腺素消耗殆尽所致,血清中检测结果也表明在敷药后4 h S P、P G E 2水平相较于模型组显著下降。辣椒素受体T R P V 1由8 3 8个氨基酸组成,分子量为9 5 k D a,6个跨膜蛋白构成非选择性配体门控阳离子通道,当其与辣椒素结合后,通道打开,钙离子从胞外流入胞内,引起细胞内外电荷失衡,从而产生一系列生物学效应。J a n c s o1 7指出辣椒素与感觉神经纤维上的T R P V 1特异性结合后,T R P V 1通道持续开放,以致于S P和P G E 2浓度下降,从而产生止痛的效果。由于辣椒素被包裹于P L GA内,所以辣椒素的辛辣刺激被降低1 8,再者超低的粒径既适合制作膏剂、乳剂、贴剂,也能制作针剂,因而扩大了辣椒素应用于神经性疼痛、关节炎、肥胖、皮炎等疾病的治疗范围。致谢:本实验在江西省口腔生物医学重点实验室完成,在此表示感谢。参考文献1 S a h i n K,K u c u k O,O r h a n C,e t a l.B i o a v a i l a b i l i t y o f a c a p-s a i c i n l i p i d m u l t i-p a r t i c u l a t e f o r m u l a t i o n i n r a t s J.E u r J D r u g M e t a b P h a r m a c o k i n e t,2 0 2 1,4 6(5):6 4 5-6 5 0.2 C h e n M,X i a o C,J i a n g W,e t a l.C a p s a i c i n i n h i b i t s p r o l i f e r a-t i o n a n d i n d u c e s a p o p t o s i s i n b r e a s t c a n c e r b y d o w n-r e g u l a-t i n g F B I-1-m e d i a t e d N F-B p a t h w a y J.D r u g D e s D e v e l T-h e r,2 0 2 1,1 5:1 2 5-1 4 0.3 A n a n t a w o r a s a k u l P,C h a i y a n a W,M i c h n i a k-K o h n B B,e t a l.E n h a n c e d t r a n s d e r m a l d e l i v e r y o f c o n c e n t r a t e d c a p s a i c i n f r o m c h i l i e x t r a c t-l o a d e d l i p i d n a n o p a r t i c l e s w i t h r e d u c e d s k i n i r r i-t a t i o n J.P h a r m a c e u t i c s,2 0 2 0,1 2(5):4 6 3.4 P u r i N,R a t h o r e A,D h a r m d e e p G,e t a l.A c l i n i c a l s t u d y o n c o m p a