老年COPD患者并发骨质疏松与LRP5基因多态性的相关性研究.pdf

临床和实验医学杂志2 0 2 3年8 月第2 2 卷第16 期D0I:10.3969/j.issn.1671-4695.2023.16.014文章编号：16 7 1-46 9 5(2 0 2 3)16-17 2 9-0 4老年 COPD 患者并发骨质疏松与 LRP5 基因多态性的相关性研究1729黄建段文蓉郭燕妮（宜宾市第二人民医院1老年医学科；2 体检中心四川宜宾6 440 0）【摘要】目的探讨老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者并发骨质疏松与低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5）的相关性。方法回顾性分析2 0 17 年3月至2 0 2 0 年3月宜宾市第二人民医院收治的38 0 例老年CO0PD患者临床资料。根据是否伴有骨质疏松将患者分为观察组（伴骨质疏松，n=208）和对照1组（无骨质疏松，n=172）。另收集同期老年非COPD骨质疏松患者作为对照2 组（单纯骨质疏松的非COPD患者，n=84）,老年体检健康者作为对照3组（n=84)。对4组的血液DNA进行遗传分析,分析患者 LRP5 的 tagSNP基因型。采用 Logistic 回归分析患者在不同模式下SNP的 OR值,评价COPD患者在发病时LRP5与骨骼并发症的相关性。结果根据隐性、显性、共显性等遗传模式下SNP的检验值，rs671494、r s 312 0 16、r s 6 38 0 51及rs901823为符合条件的SNP因素。Logistic回归分析结果显示，携带C/C基因型的COPD患者及LRP5基因的rs901823、r s 6 7 149 4基因型与患者罹患骨质疏松的相关程度最高,差异有统计学意义（P0.05）。结论LRP5基因中的rs901823、r s 6 7 1494与COPD患者并发骨质疏松相关,有助于判断骨质疏松发生风险。【关键词】老年人慢性阻塞性肺疾病低密度脂蛋白受体相关蛋白5骨质疏松相关性Study on the relationship between low density lipoprotein receptor associated protein 5 and susceptibility to osteoporosis in elderly pa-tients with chronic obstructive pulmonary disease.HUANG Jian,DUAN Wen-rong,GUO Yan-ni?.1 Department of Gerontology,2 De-partment of Physical Examination Center,Yibin Second Peoples Hospital,Yibin Sichuan 644000,China.Abstract)Objective To study the relationship between low density lipoprotein receptor associated protein 5(LRP5)and susceptibilityto osteoporosis in elderly patients with chronic obstructive pulmonary disease(COPD).Methods Retrospective analysis of the clinical data of 380elderly patients with COPD admitted to Yibin Second Peoples Hospital from March 2017 to March 2020.The patients were divided into observationgroup(with osteoporosis,n=208)and control group1(without osteoporosis,n=172)according to whether they were accompanied by osteopo-rosis.In addition,patients with non COPD osteoporosis in the same period were collected as control group 2(non COPD patients with simple oste-oporosis,n=84),and healthy people were taken as control group 3(n=84).Genetic analysis was performed on the blood DNA of the fourgroups,and the tagSNP genotype of LRP5 was analyzed.The OR value of SNP of patients in different modes was analyzed by Logistic regressionand the correlation between LRP5 and bone complications in patients with COPD was evaluated.Results According to the SNP test values underrecessive,dominant,Codominance and other genetic models,rs671494,rs312016,rs638051 and rs901823 are eligible SNP factors.The resultsof logistic regression analysis showed that COPD patients carrying the C/C genotype and the rs901823 and rs671494 genotypes carrying the LRP5gene had the highest correlation with osteoporosis,the difference was statistically significant(P0.05).ConclusionThe rs901823,rs671494 inLRP5 gene is associated with osteoporosis in elderly COPD patients,which is helpful to judge the risk of osteoporosis.Key words Elderly;Chronic obstructive pulmonary disease;LRP-5;Osteoporosis;Relevance慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonarydisease,COPD)是一种高感染、高致死的慢性疾病,患者病死率居高不下。有研究称,预计到2 0 30 年,COPD将在全球致死疾病中排名第三。COPD 患者由于病症不断反复,易引起多种并发症,包括呼吸道感染、糖尿病、心血管疾病、骨质疏松等。其中，骨质疏松为最常见的一种骨骼并发症,临床研究证实,COPD患者患骨质疏松概率为健康人的35倍,患者因经常发生骨折,导致生活质量下降、肺部疾病状况恶化等2 。目前临床上关于COPD患者低密度脂蛋白受体相关蛋白5(lowden-sity lipoprotein receptor associated protein 5,LRP5）基因多样性与骨骼并发症有一定探讨，但其具体机制尚不明确。本研究通过对LRP5基因进行基因型分析,探讨老年COPD患者并发骨质疏松与LRP5的相关性。现将结基金项目：四川省卫生健康委员会科研课题（编号：19PJ310)果报道如下。1资料与方法1.1一般资料回顾性分析2 0 17 年3月至2 0 2 0 年3月宜宾市第二人民医院收治的38 0 例老年COPD患者临床资料。根据是否伴有骨质疏松将其分为观察组（合并骨质疏松，n=208）和对照1组（无骨质疏松，n=172）。另收集同期8 4例老年非COPD骨质疏松患者作为对照2 组（单纯骨质疏松的非COPD患者），8 4名老年体检健康者作为对照3组。观察组中男性114例，女性94例；平均年龄（7 0.6 310.0 7）岁；病程（6.7 52.71)年。对照1组中男性9 6 例,女性7 6 例;平均年龄（7 0.7 8 8.93）岁；病程（6.592.30)年。对照2 组中男性50 例，女性34例；平均年龄（6 9.8 6 9.7 2)岁；病程（6.432.48）年,对照3组中男性51例，女性33例；平均年龄（6 8.359.0 3）岁。4组研究对象一般资:1730 料比较，差异均无统计学意义（P0.05），具有可比性。见表1。所有研究对象均知情同意，本研究经宜宾市第二人民医院伦理会批准。表14组研究对象一般资料比较观察组对照1组对照2 组对照3组指标P值(n=208)(n=172)性别(例)男性女性年龄(岁)病程(年)体重指数(kg/m)20.14 2.63 20.20 2.60 20.25 2.51 20.10 2.65 0.063 0.979吸烟（例）0.196 0.978是62否146饮酒（例）是否糖尿病(例)高血压(例)1.2纳入与排除标准纳人标准：(1)COPD患者均符合慢性阻塞性肺疾病诊断标准(2 0 11版）3 中COPD诊断标准；(2)COPD患者既往接受过肺功能检查,明确诊断为COPD34级；(3)所有入组老年受试者均年龄65岁,且临床资料完整。排除标准：（1)COPD患者近期内患恶性肿瘤并进行化疗、放疗；（2）自身免疫性疾病；（3)除COPD之外的呼吸系统疾病；（4)甲状腺功能亢进、肝肾功能不全、皮质醇增多症等。1.3仪器与试剂双能X线吸收测定法（dualenergy X-ray absorptiometry，D XA）骨密度仪（DISCOVERYA型，深圳市艾克瑞电气有限公司）；12 8 排螺旋CT机（LCM S196 0 2 型，深圳市安立信电子公司）；低速离心机（TG16KR型，上海继谱电子科技有限公司）；高速离心机（S-1150 s，巩义市宏华仪器设备工贸有限公司）;紫外分光光度计（UV-1800pc济南欧莱博科学仪器有限公司）。蛋白酶K（广州美基生物科技有限公司）；裂解液（由TritonX-100、T r i s、氯化钠组成，上海如吉生物科技发展有限公司）；TE缓冲液：（pH=8.0，北京百奥莱博科技有限公司）;PCR扩增仪Trident960，力新仪器（上海）有限公司。1.4方法使用DXA骨密度仪测量患者的骨密度值，得出患者的T-score分值4。使用12 8 排螺旋CT机对患者进行CT扫描。患者置于仰卧位,CT机参数设置为：电压12 0 kV,电流为110 mAs，螺距为1.18 1.35。先后测量2 次，避开患者骨折椎体,取CT平均值。取患者空腹血 2 mL 进行DNA 检测,检测步骤如下：（1)取1mL血液加2 mL水进行稀释,使用离心机离Journal of Clinical and Experimental Medicine Vol.22,No.16 Aug.2023(n=84)(n=84)F值1.182 0.75711496947670.63 10.07 70.78 8.93 69.86 9.72 68.35 9.03 1.449 0.2286.75 2.716.59 2.30 0.520 0.595 512712157262018215230253129心10 min（350 0 r/m in，离心半径10 cm）重复离心1次。（2)加人5L蛋白酶K及50 0 L裂解液，置人EP管中混匀。（3）加50 0 L异丙醇进行振荡，在12 0 0 0 r/min,离心半径10 cm条件下,离心1min后取下方沉淀物加7 5%乙醇再次重复离心。（4）取下方沉淀物至室温晾干,加10 0 L的TE缓冲液混匀,置4冰箱冷藏505134336.432.48 一25598976759101214一夜。（5)次日取出样本,使用紫外光分光光度计进行测量,稀释为2 0 ng/L,置人-2 0 冰箱冷冻。（6）使用PCR扩增仪配置引物储备液，将溶液浓度调至50 0 mol/L,在37 下加入SAP酶反应40 min,再加热至8 5反应5min，一直将温度维持在2 5。（7)PCR反应结束后,将反应产物在琼脂糖凝胶上进行电泳分离，进行分0.581 0.901 析。由南京巨匠生物科技有限公司对PCR产物进行测序,将测序结果与计算机结果进行比较分析。（8）使用1.051 0.789基质辅助激光解析电离飞行时间质谱5 通过产物分子0.461 0.927量大小对SNP进行分型检测。1.5诊断标准采用DXA诊断骨质疏松标准：T-2.5SD为骨质疏松;T在-1.0-2.5SD为骨量降低;T-1.0为骨质正常6 ,将骨量降低与骨质正常患者合并为非骨质疏松。1.6统计学处理使用SPSS 22.0对数据进行统计处理,计量资料以均数标准差（s）表示，多组间比较采用单因素方差分析；计数资料以率或百分比（%）表示，组间比较采用?检验；采用haploview4.2软件与UCSC 基因组浏览器7 确定LRP5基因的tagSNP;采用Logistic回归分析LRP5 基因在隐性、显性、共显性下的95%CI和OR值；P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1LRP5不同遗传模式下SNP的检验值根据隐性、显性、共显性等遗传模式下SNP的检验值，rs671494、rs312016、r s 6 38 0 51及rs901823为符合条件的SNP因素。见表2。表2 比较LRP5不同遗传模式下SNP的检验值SNP隐性rs6714940.319rs3120160.367rs6380510.294rs9018230.0002.21LRP5基因与COPD合并骨质疏松的相关性分析Logistic回归分析结果显示,携带C/C基因型的COPD患者及LRP5基因的rs901823、r s 6 7 1494基因型与患者罹患骨质疏松的相关程度最高，差异有统计学意义（P0.05)。见表3。显性0.1030.9980.5670.023共显性0.0130.6430.9070.001Log-Additive0.0040.6050.6180.002临床和实验医学杂志2 0 2 3年8 月第2 2 卷第16 期表3LPR5基因多态性与COPD合并骨质疏松的关联性分析SNP模式基因型观察组（n=208）对照1组（n=172）对照2 组（n=84）对照3组（n=84）rs671494隐性C/C-C/AA/A显性C/CC/A-A/A共显性C/CC/AA/Ars312016隐性T/T-T/CC/C显性T/TT/T-C/C共显性T/TT/CC/Crs638051隐性A/A-A/GG/G显性A/AA/G-G/G共显性A/AA/GG/Grs901823隐性T/T-C/TC/C显性T/TC/T-C/C共显性T/TC/TC/C3讨论COPD患者发生骨质疏松症的风险增加,患者椎体容易发生变形、骨折等,进一步导致患者肺功能下降，极大影响患者生活质量。加之COPD发生后患者卧床时间加长，体力活动受限,户外活动减少，导致维生素D合成减少,增加骨质疏松风险。此外,由于COPD患者肺炎感染率会增高，患者在大量使用抗生素时会增强细菌耐药性,加剧病情，或长期应用糖皮质激素减少胃肠钙吸收,增加肾脏排泄钙离子,增加骨质疏松概率。COPD患者常处于低氧或缺氧状态,因此患者易发生肺栓塞等疾病致死,因此在对此类患者进行诊治时需多关注患者病情8 CLRP5是一种跨膜蛋白,可结合多种受体进行对应功能 。临床对LRP5具体功能尚不明确,临床上多研究 LRP5 对2 型糖尿病、肥胖、肿瘤、骨密度等影响,得出LRP5不同 SNP对上述疾病有明显关联,并且对骨量影响较大10-12 。Papadopoulos等13 研究指出LRP5是骨质疏松一假性神经胶质瘤综合征的致病基因，能减少患者成骨细胞数量,降低骨细胞活性,影响骨代谢。但临床上关于LRP5对 COPD患者发生的骨骼并发症研究较少。本研究通过使用选取tagSNP对LRP5基因进行检测分析,使用UCSC基因组浏览器进行研究,选取4个SNP,得出rs901823与COPD患者发生骨质疏松等骨骼并发症之间有一定关联，rs3736228达到边缘统计学意:1731OR 值(95%CI)P值177158311410481104919662771003510158119505354431541295838104814653196153121910896100761089681621914193158151411291968111291736223197862658127025628265812522060245430502866024642068142义，其余SNP关联性较小。李考等14 研究指出,rs901823是位于LRP5 的第19个内含子，处于人体骨骼肌成肌细胞活跃区域，rs901823基因多态性与 COPD患者患骨骼并发症的风险有关;同时纳入38 0 例COPD患者，将其分为骨质疏松及非骨质疏松患者进行研究,指出rs901823与椎骨骨密度有相关性。与rs901823相比,rs3736228为第18 位，临床研究对rs3736228与骨质疏松的研究较多,表明该SNP与骨质疏松发生有一定关系，但仍需要进一步探索15。本研究通过对老年COPD患者进行研究,得出Ct值可初步评估患者骨质疏松程度,并且rs901823可增加患者骨质疏松的易感性。另外,研究结果还发现C/C基因型COPD患者骨质疏松率相对较高，提示rs671494与COPD并发骨质疏松相关，rs671494携带C/C基因型COPD更易发生骨质疏松,这可能是因C/C基因型患者H3K27Ac功能区域活跃,进而诱导激活转录因子,增加骨质疏松风险16 。LRP5 基因对老年COPD 患者发病期间骨骼并发症发作有一定影响,其相关发病机制需要进行进一步研究和探索。4结论综上所述，LRP5基因中的rs901823、r s 6 7 1494与COPD患者并发骨质疏松相关,有助于判断骨质疏松发生风险，但其具体机制尚需进行进一步研究。56282262156094044246024303081367175524565194836404041.003.27(1.04 11.02)1.000.89(0.27 0.99)1.001.84(1.17 3.94)3.29(2.05 10.19)1.000.79(0.52 3.75)1.001.36(0.29 3.28)1.002.25(0.14 3.29)0.55(0.38 2.69)1.000.84(0.21 5.28)1.000.21(0.19 1.46)1.001.33(0.84 2.95)0.69(0.33 2.48)1.0010.88(3.85 39.26)1.002.59(1.64 6.28)1.001.88(0.97 4.39)15.35(3.28 49.58)0.0010.0010.0010.3700.1080.7620.3230.1570.5850.0010.0010.001 1732 参考文献1郑烯，胡雪峰慢性阻塞性肺炎发病机制的研究进展J中国细胞生物学学报，2 0 19，41（2）：138-145.2Graumam RQ,Pinheiro MM,Nery LE,Castro CHM.Increased rate ofosteoporosis,low lean mass,and fragility fractures in COPD patients:association with disease severityJ.Osteoporos Int,2018,29(6):1457-1468.3中华人民共和国卫生部慢性阻塞性肺疾病诊断标准J国际呼吸杂志，2 0 11,31(1)：1-2.4黎康弟，张金山，姚云，等.DXA测量骨密度的精密度评估及其应用J中国骨质疏松杂志，2 0 19，2 5（5）：6 8 3-6 8 9.5 张培，陈丹.基质辅助激光解析电离飞行时间质谱快速定量有机小分子化合物应用研究J中国药业，2 0 2 0，2 9（17）：8 0 8 2.6李婷，李楠，李春霖.DXA与QCT在骨质疏松诊断及预后监测中的应用J医学综述，2 0 2 0，2 6（10）：1999-2 0 0 3.7陈娇，张义双能量计算机断层扫描检查对骨质疏松性椎体压缩性骨折患者的临床应用价值J/CD中国医学前沿杂志（电子版),2 0 2 0,12(5)：136-140.8 方纪林，蒋红利，李向东，等。慢性肾脏病患者血清2 5（OH)D、I G F-1及骨质疏松指标水平变化及其临床意义J疑难病杂志，2020,19(4):344-348.9克彭坤骨质疏松性骨折治疗效果的改善：研究现状及策略分析J.中国组织工程研究，2 0 2 2，2 6（6）：98 0-98 4.Journal of Clinical and Experimental Medicine Vol.22,No.16 Aug.202310 Okuda 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0)【摘要】目的观察沙格列汀联合羟苯磺酸钙对非增生性糖尿病视网膜病变(NPDR)的疗效及对患者视网膜血流动力学和血清糖基化终产物肽（AGE-P）、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH)水平的影响。方法前瞻性选取2 0 2 0 年7 月至2 0 2 2 年10 月毫州市人民医院收治的92 例NPDR惠者为研究对象，根据随机数字表法将其分为两组，每组46 例。两组均给予常规治疗,对照组加用羟苯磺酸钙治疗,观察组在对照组基础上联合沙格列汀治疗。比较两组临床眼底指标，检测两组视力相关指标、ACE-P、NA D PH、晚期蛋白氧化产物（AOPP）及视网膜血流动力学的差异，评估两组安全性。结果观察组出血、渗出吸收时间及水肿消失时间分别为（2.6 50.7 7）、（9.8 7 1.8 7）、（4.6 11.2 3）d,均短于对照组（3.37 0.6 9）、（12.0 52.2 6）、（6.551.8 7）d，差异均有统计学意义（P0.05）。观察组和对照组的视野灰度值、黄斑厚度、出血瘤体积、出血斑面、AGE-P、NA D PH、A O PP均较治疗前下降，且观察组分别为（1.37 0.25)%、(312.0 2 14.7 8)m、(12.0 4 2.2 6)mm、(1.41 0.39)m、(14.36 3.16)mg/L、(5.8 7 1.0 3)p g/mL、(14.023.56)mol/L，低于对照组（2.2 30.41)%、（357.2 516.56）m、（14.7 43.12)mm、(2.0 8 0.44)m、（17.47 3.6 5)m g/L、（6.931.41)p g/m L、（19.36 4.7 1)mol/L),差异均有统计学意义（P0.05）。两组的视网膜中央动脉、睫状后动脉收缩期最大血流速度（PSV）、舒张末期血流速度（EDV）均治疗前升高，两组的视网膜中央动脉、睫状后动脉的血管阻力指数(RI)均较治疗前下降,差异均有统计学意义（P0.05）。观察组总不良反应率10.8 7%（5/46）与对照组6.52%（3/46)比较，差异无统计学意义（P0.05）。结论沙格列汀联合羟苯磺酸钙治疗NPDR患者可促进眼底出血、渗出的吸收，明显改善视力水平，可能与减轻氧化应激损伤有关。【关键词】羟苯磺酸钙沙格列汀非增生性糖尿病视网膜病变视网膜血流动力学氧化应激损伤Effects of saxagliptin combined with calcium hydroxybenzenesulfate on non-proliferative diabetic retinopathy and on retinal hemody-namics and serum AGE-P and NADPH levels in patients.TANG Fei-fei,KONG Yan-hua,LI Xin-je,et al.Department of Endocrinolo-gy,Bozhou Peoples Hospital,Bozhou Anhui 236800,China.Abstract Objective To observe the efficacy of saxagliptin combined with calcium hydroxybenzenesulfate in the treatment of non-prolif-基金项目：安徽省卫生健康科研项目（编号：AHWJ2022b117）文章编号：16 7 1-46 9 5(2 0 2 3)16-17 32-0 5